補腎活血法對單純收縮期高血壓大鼠NO、AngⅡ的影響

宋業琳盧 娜徐偉俊魏陵博于廣宇聶穎穎遲偉峰李 潔

（1天津中醫藥大學，天津，300193；2青島市海慈醫療集團，青島，266033；3青島阜外心血管病醫院，青島，266034）

實驗研究

補腎活血法對單純收縮期高血壓大鼠NO、AngⅡ的影響

宋業琳1，2盧 娜3徐偉俊1魏陵博1于廣宇1聶穎穎1遲偉峰1李 潔1

（1天津中醫藥大學，天津，300193；2青島市海慈醫療集團，青島，266033；3青島阜外心血管病醫院，青島，266034）

目的：探討補腎活血法對單純收縮期高血壓（Isolated Systolic Hypertension，ISH）模型大鼠血管重塑的影響。方法：采用法華林和維生素K誘導動脈中層鈣化法（WVK）法復制ISH大鼠模型，分為補腎活血湯組、氨氯地平組、補腎活血湯與氨氯地平聯用組（兩藥聯用組）、空白對照組、模型對照組，予以相應的藥物干預，8周后檢測大鼠尾端血壓、血清一氧化氮（Nitrogen Monoxide，NO）、血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）水平。結果：補腎活血法能夠增加ISH大鼠血清NO水平，降低AngⅡ水平，較模型組均有統計學意義（P＜0.05），且中西藥聯用組效果更明顯。結論：補腎活血法等夠改善ISH大鼠的血管順應性。

補腎活血法；單純收縮期高血壓；一氧化氮；血管緊張素Ⅱ；血管順應性

ISH是指收縮壓≥140mmHg，舒張壓＜90mmHg，是高血壓的一種特殊類型，常見于60歲以上的老年人，其發生常與血管重塑[1]有關，如動脈中層彈力纖維減少，血管僵硬度增加、彈性下降，血管順應性降低等。本研究根據老年ISH患者“腎虛血瘀”的發病機制，探討補腎活血法對單純收縮期實驗大鼠血管重塑之血管順應性的影響。

1 材料

1.1 實驗動物 選取健康6～7周齡Wistar-Kyoto大鼠（WKY）50只，SPF級，♂，體重175～200 g，由青島市藥物檢驗研究所提供，動物合格證號SCXK（魯）20090007。大鼠飼養于青島市海慈醫療集團動物房，金屬鼠籠，分籠飼養，每籠5只，保持室內環境恒溫（19 ±3）℃，濕度在50%～60%，通風良好，標準飼料，自由進食飲水。

1.2 藥物 補腎活血湯（BSHXD）藥物組成為生地黃20 g、熟地黃20 g、山茱萸15 g、茯苓15 g、澤瀉30 g、牡丹皮12 g、菟絲子20 g、益母草15 g、當歸15 g、鉤藤15 g、淫羊藿6 g，由青島海慈醫療集團藥劑科中藥制劑室制備，濃度為生藥1.647 g／mL，質量標準按照2010版《中華人民共和國藥典》；苯磺酸氨氯地平片，每片5 mg，大連輝瑞制藥有限公司（國藥準字號：H10950224）；華法林鈉片，每片2.5 mg，山東齊魯制藥有限公司生產（國藥準字號：H37021314）；維生素K1注射液，每支1 mL：10 mg，山東魯抗辰欣藥業有限公司生產（國藥準字號：H37021988）。

1.3 試劑 大鼠用血清NO測定試劑盒，購自湖北武漢博士德試劑有限公司；大鼠用血清AngⅡ試劑盒（批號201007171），購自青島市百瑞達醫療器械有限公司。

2 方法

2.1 模型制備 WVK法誘導動脈中層鈣化法[2]。華法林鈉片研成粉末，蒸餾水配成懸濁液，按照華法林鈉片15 mg／（kg·d）灌胃，1次／d；予以維生素K1注射液，按10 mg／（kg·d）背部皮下注射，每天1次。維生素K1比華法林提前1周用藥，每2周測量并記錄血壓1次，6周后判定造模結果。收縮壓升高并持續大于18.67 kPa（140 mmHg）為造模成功。

2.2 分組及給藥

2.2.1 分組 實驗大鼠隨機分為5組。隨機選取其中的10只做空白對照組，其余40只進行高血壓造模。按隨機數字表法分為：補腎活血湯組、氨氯地平組、補腎活血湯與氨氯地平聯用組（中西藥聯用組）、模型對照組，每組10只。

2.2.2 給藥 根據人和動物間按體表面積折算的等效劑量分別灌胃給藥：補腎活血湯組給予16.47 g／（kg ·d）；氨氯地平組給予0.45 mg／（kg·d）；中西藥聯用組給予BSHXD 16.47 g／（kg·d）和氨氯地平0.45 mg／（kg·d）；余組給予蒸餾水10 mL／（kg·d）；配制成10 mL／（kg·d），1次／d，給藥8周。

2.3 指標檢測 ELISA法檢測大鼠血清NO、AngⅡ實驗大鼠最后1次給藥后，予以禁食12 h，用10%水合氯醛（0.2 mL／kg）腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口，腹主動脈取血約5 mL，3 500 r／min離心10 min，將大鼠血清置于-70℃低溫下冷凍備用；嚴格按照免疫組化試劑盒說明的操作步驟，測定血清AngⅡ含量。

2.4 統計學方法 應用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，所有結果以（±s）表示，數據之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t。

3 結果

3.1 各組大鼠血清NO水平 與空白對照組比較，模型對照組NO濃度較低，差異有統計學意義（P＜0.01）；與模型對照組比較，各治療組NO濃度均增高，差異有統計學意義（P＜0.01）；兩藥聯用組較氨氯地平組升高明顯，差異有統計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 各組大鼠血清NO、AngⅡ水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清NO、AngⅡ水平比較（±s）

注：與空白對照組比較，**P＜0.01；與模型對照組比較，△△P＜0.01；與氨氯地平組比較，▲▲P＜0.01。

組別只數NO（μmol／L）AngⅡ（pg／m L）10 95.58±26.98 36.01±12.21模型對照組8 51.26±9.35**289.55±72.23**補腎活血湯組9 164.71±27.85△△140.23±10.71△△氨氯地平組10 98.54±6.23△△147.28±12.97△△兩藥聯用組9 201.27±27.20**△△▲▲48.35±13.29空白對照組**△△▲▲

3.2 各組大鼠血清AngⅡ水平 與空白對照組比較，模型對照組AngⅡ升高，差異有統計學意義（P＜ 0.01）；與模型對照組比較，各治療組AngⅡ均有所降低，其中兩藥聯用組降低最為明顯，與空白對照組比較無統計學意義（P＞0.05），見表1。

4 討論

ISH的發生主要與動脈僵硬度增加有關[3]。隨著年齡的增長，老年人大動脈的結構也發生了變化[4-5]：如動脈中層彈力纖維減少，血管僵硬度增加、彈性下降[6]，血管順應性降低[7]等。老年ISH時腎素-血管緊張素系統等神經體液因子的激活促進了動脈僵硬程度的增加[8]和血管收縮功能紊亂。這與中醫病機“腎虛血瘀”相輔相成。老年單純收縮期高血壓患者天癸衰竭[9-10]，虛則氣血運行不暢，血留而不行致瘀，因此腎虛是形成血瘀的重要因素。腎虛和血瘀相互影響，腎虛為本，血瘀為標，由虛致瘀，血瘀是腎虛的必然結果，而血瘀的存在又加重了腎虛。因此，腎虛血瘀是老年人單純收縮期高血壓病的根本病機。

NO是調節血管順應性的重要因子，通過對血管平滑肌細胞的調控作用調節機體器官的血流量，使其保持相對穩定，使血管自身調節作用得到發揮，可以調節機體的血壓水平，NO缺乏時，這種調節作用減弱甚至缺失，導致血管順應性下降，在某種程度上導致了高血壓病的發病[11]。血清中的NO可以阻滯細胞生長[12]，高血壓血管重塑是刺激因子和抑制因子間比例失衡的結果。在一般情況下，血管持續受到血流的沖擊，由于某些原因導致血壓突然的升高時，NO發揮其有效的調節血管作用[13]，保持機體各器官，尤其是心、腦、腎等重要臟器的血流量的相對穩定性，發揮血管自身調節血流量的作用，這不僅能夠有效降低體循環血壓水平[14]，還能改善局部血流分布，調節微循環的血流量，起到有效調節血壓的作用。AngⅡ是潛在的促生長因子，分泌過多[15]，會導致血管平滑肌緊張度增高，血管強烈收縮，長期的刺激，血管壁的平滑肌細胞發生代償性的增生，細胞肥大，其在高血壓血管重塑[16-17]中發揮重要作用[18]。

本實驗表明補腎活血湯能夠提高血液中NO含量，從而起到調節血壓，降低血管重塑的作用；且作用優于氨氯地平組藥物，可能與方劑中含有的類內源NO物質有關[19]。補腎活血湯能夠有效降低AngⅡ的水平，發揮其降壓作用，由此推測，其降壓作用可能與改善腎素-血管緊張素系統有關，同時能夠減少血管重構，中西藥物聯用作用更強。綜上所述，補腎活血法能夠通過提高NO水平，減低AngⅡ的水平從而達到調節血管順應性、改善血壓的作用。

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（2013-06-19收稿 責任編輯：徐暉）

Effect of Bushen Huoxue Method on Expression of NO and AngⅡin Isolated Systolic Hypertension Rats

Song Yelin1，2，Lu Na3，Xu Weijun1，Wei Lingbo1，Yu Guangyu1，Nie Yingying1，Chi Weifeng1，Li Jie1
（1 Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China；2 Qingdao Hiser Medical Group，Qingdao 266033，China；2 Qingdao Fuwai Hospital，Qingdao 266033，China）

Objective：To explore effect of the Bushen Huoxue method on vascular remodeling of isolated systolic hypertension（ISH）rats.Methods：ISH rats model was established by WVK method，divided into Bushen Huoxue decoction group，amlodipine group，Bushen Huoxue decoction-amlodipine combination group，blank control group，and model control group，gave corresponding drug intervention，measured rat’s tail blood pressure，serum NO level，AngⅡlevel after 8-week treatment.Results：Bushen Huoxue decoction can significantly increase serum NO level and reduce the AngⅡlevel in ISH rats compared with model group（P＜0.05）.The Chinese and western medicine combination group was more effective.Conclusion：Bushen Huoxuemethod can improve vascular compliance in rats of isolated systolic hypertension.

Bushen Huoxue method；Isolated systolic hypertension；Nitric oxide；AngiotensinⅡ；Vascular compliance

R243；R259；R289.5

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.024

2010年度青島市公共領域科技支撐計劃（編號：10-3-3-5-3-nsh）