支原體肺炎補體結(jié)合試驗測定及臨床意義

劉方鶴 曹珍珍 張海雁 張祎

支原體肺炎是由肺炎支原體引起的一種常見病，多發(fā)于秋冬季，受累人群主要是18歲以下的兒童和青少年。支原體肺炎有時臨床癥狀十分嚴重，甚至出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀或造血功能障礙，及時做出診斷并給予大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療療效甚佳。補體結(jié)合試驗(CFT)應用最為廣泛，但其敏感性與采血時機的早晚有關(guān)，通常發(fā)病10 d以后才會出現(xiàn)陽性結(jié)果。選取支原體肺炎患者30例補體結(jié)合試驗臨床分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 30例肺炎支原體肺炎患者男20例，女18例。年齡7個月～43歲，平均19歲，發(fā)熱6例，咳嗽21例，胸痛2例，乏力、懶動、心慌為主要表現(xiàn)者1例。全部患兒均行胸部X線檢查，支氣管肺炎或肺炎29例，胸腔積液1例，肺不張1例。

1.2方法

1.2.1溶血素滴定 將溶血素用BBS(巴比妥-巴比妥鈉緩沖液)稀釋成1 ∶ 100，然后再稀釋成1 ∶ 1000～1 ∶ 10000共8個稀釋度。溶血素單位是固定補體用量測定溶解一定量綿羊紅細胞所需的最小溶血素量(MHD)，作為一個單位，以上結(jié)果表示0.1 ml 1 ∶ 4000的溶血素為一個溶血單位，在正式試驗中一般使用2個溶血單位，即1 ∶ 2000稀釋。

1.2.2補體滴定 加入不同量的用BBS稀釋的1 ∶ 60補體，再加抗原和正常抗原(如用已知抗體測定未知抗原，則改加抗體和正常抗體)，目的是觀察這些試劑對補體及溶血系統(tǒng)的影響。致敏綿羊紅細胞在臨用前15 min配制，即將2單位溶血素與等體積2%羊血細胞混勻，放37℃ 15～30 min即可[1]。

1.2.3抗原、抗體的效價滴定(方陣滴定) 若抗原、抗體來源于人或動物血清，在滴定前先作1 ∶ 2稀釋，56℃滅活30 min。將抗原、抗體分別用BBS進行稀釋，從1 ∶ 4直到1 ∶ 512。按表將已稀釋的抗原和抗體各0.1 ml加入相應管中。各管內(nèi)加入補體0.2 ml，搖勻，4℃過夜，37℃ 30 min，每管加致敏血細胞(在加入前15～30 min將溶血素和2%SRBC等量混合)0.2 ml，搖勻，37℃ 30 min，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

補體對照含有2.0和1.5個單位補體對照管應完全溶血，1.0個單位補體對照管應部分溶血或接近完全溶血，而0.5個單位補體對照管應不溶血。陰性血清對照各稀釋倍數(shù)管均完全溶血。陽性血清對照前后每次陽性效價一致。全部試驗管皆為完全溶血，報告陰性。如試驗管不溶血，而正常抗原和BBS對照管完全溶血，報告陽性，并同時寫明效價，若試驗管和正常抗原管均不溶血，可能是標本抗正常抗原，若試驗管、正常抗原和BBS對照管都不溶血，則可能標本有抗補體現(xiàn)象。

3 討論

補體結(jié)合試驗(CFT)是利用補體能與抗原-抗體復合物結(jié)合的特性設計的一種血清學反應，當抗原-抗體反應后不形成肉眼可見的沉淀物或凝集塊時，亦可根據(jù)是否結(jié)合(固定或消耗)了補體的以溶血反應為指標來判斷反應系統(tǒng)中有無相應的抗原-抗體發(fā)生反應。在正式試驗中，先將定量補體加入待測系統(tǒng)中，使抗原-抗體有優(yōu)先結(jié)合補體的機會，如果抗原-抗體相對應，補體被固定，沒有剩余的補體與指示系統(tǒng)反應，不溶血，為陽性反應，反之則陰性(溶血)，也可有不同程度的溶血現(xiàn)象發(fā)生。據(jù)此可推知抗原或抗體的效價。如果反應系統(tǒng)中存在待測抗體或抗原，抗原抗體反應后與結(jié)合補體，再加入指示系統(tǒng)，此時補體已耗盡而不出現(xiàn)溶血反應，為補體結(jié)合試驗陽性，反之則會出現(xiàn)溶血，為補體結(jié)合試驗陰性[2]。定量補體結(jié)合試驗是將抗體或抗原作不同稀釋后按上述步聚操作，各試劑必須準確定量，尤其是補體用量應精確計算。

CFF是一個經(jīng)典的方法，雖操作較繁，但具有高度的特異性和較高的敏感性，同時參與反應的抗原、抗體純度要求不高，不需要特殊設備，至今仍是一個比較實用的方法，該方法廣泛應用于病毒的血清學診斷[2]。特別指出在病毒性疾病的流行病學調(diào)查中，可根據(jù)補體結(jié)合抗體在體內(nèi)維持時間不超過一年的特點，發(fā)現(xiàn)某人為抗體陽性時，可表明某人在最近一年內(nèi)感染此病，一般臨床檢驗以雙份血清效價差別4倍以上為陽性。

[1] 謝國艷,高志生,郁淼,等.肺炎支原體檢測方法的評價.世界感染雜志,2005,5(5):444.

[2] 魏成軍,蔣福國,劉德美,等.呼吸道感染肺炎支原體檢測1786例分析.中國誤診學雜志,2006,6(21):4207.