多壁碳納米管抑制RAW264．7巨噬細胞的吞噬功能

李 慧 祝 紅 閆 莉 谷婧麗 郝 維 曹濟民

碳納米管由石墨烯片卷曲而成，根據石墨烯片的層數，可以將碳納米管分為多壁碳納米管(multiwalled carbon nanotube，MWCNT)和單壁碳納米管(single-walled carbon nanotube，SWCNT)。碳納米管重量輕、比表面積大，是研制藥物遞送載體的良好材料，因其展示的較高的穩定性和良好的生物相容性，在生物醫學領域顯示出了無限的應用前景［1，2］。有研究報道，碳納米管對骨細胞的增殖分化及骨組織的生成具有明顯的促進作用，能促進神經再生和減少神經組織瘢痕的產生［3，4］。隨著對碳納米管研究的深入，其生物安全性方面的報道也逐漸受到重視［5～8］。雖然碳納米管對生物有一定的毒性作用，但其在生物醫學應用領域仍被寄予厚望。目前生物學界對碳納米管的免疫細胞效應仍知之甚少。本工作以來源于小鼠的RAW264．7巨噬細胞系作為吞噬細胞模型，采用熒光素標記的大腸桿菌E．coli k-12(FITC-E．coli k-12)作為吞噬體系，重點研究了MWCNT對巨噬細胞吞噬功能的影響。考慮到碳納米管的可能毒性與劑量和作用時間的關系，筆者觀察了不同濃度和不同作用時間的多壁碳納米管的功效。

材料與方法

1．細胞和試劑:RAW264．7 巨噬細胞系、Hepes、DMEM(高糖)培養基、雙抗(含青霉素和鏈霉素)及PBS緩沖液購自中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞中心;胎牛血清購自Gibco公司(USA);6孔板、12孔板等細胞培養耗材購自Corning公司(USA);熒光標記的大腸桿菌吞噬試劑盒(v6694 Vybrant?Phagocytosis Assay Kit)購自Molecular Probes公司(USA)。

2．流式細胞術:常規培養RAW264．7細胞;選取對數生長期的RAW264．7細胞，用0．25%的胰酶消化成單個細胞，加入DMEM培養基終止消化，1000r/min離心5min，棄掉上清液，重新加入DMEM完全培養基充分重懸細胞。……