烏藥水提取物抗心律失常作用的研究

郭曉秋 李 武 王莉萍 何 躍

1.江西省中醫院藥劑科，南昌 330006；2.江西省撫州市第一人民醫院藥劑科，江西撫州 344000

烏藥水提取物抗心律失常作用的研究

郭曉秋1李 武2王莉萍2何 躍2

1.江西省中醫院藥劑科，南昌 330006；2.江西省撫州市第一人民醫院藥劑科，江西撫州 344000

目的 研究烏藥水提取物的抗心律失常作用。 方法 采用常規抗心律失常方法，將三氯甲烷誘發小鼠室顫試驗和氯化鈣誘發大鼠室顫試驗分為生理鹽水組、維拉帕米組、10.0 mg/kg烏藥水提取物組和30.0 mg/kg烏藥水提取物組；將腎上腺素誘發家兔心律失常試驗分為給藥前后組；蟾蜍離體坐骨神經動作電位試驗分為任氏液組、1.0%鹽酸普魯卡因溶液組、0.5 g/ml和1.0 g/ml烏藥水提取物組。 結果 烏藥水提取物對三氯甲烷誘發的小鼠室顫具有明顯的治療作用（P＜0.05），對氯化鈣誘發的大鼠室顫具有明顯的預防效果（P＜0.05），能明顯對抗腎上腺素誘發的家兔心律失常（P＜0.01），可明顯降低蟾蜍離體坐骨神經動作電位振幅（P＜0.05）。 結論 烏藥水提取物具有明顯的抗試驗性心律失常作用，能對抗由三氯甲烷、氯化鈣、腎上腺素等誘發的心律失常，其抗心律失常作用可能與其抑制Na+內流及與阻斷β-腎上腺素受體有關。

烏藥；水提取物；心律失常

心血管疾病是一類嚴重威脅人類健康的常見病和多發病，其發病率和死亡率在各類疾病中占首位，嚴重心律失常已經成為導致人類死亡的主要原因之一。近年來，對于心律失常的非藥物治療已取得了不少進展，雖然非藥物治療可以解決一部分心律失?；颊叩闹委焼栴}，但是大部分心律失常患者還需用藥物治療，因此，藥物治療仍是心律失常疾病的主要治療方法。烏藥又名銅錢樹、土木香，是樟科山胡椒屬植物烏 藥[Lindera Aggregata（Sims） Kosterm.（LAK）]的 塊根，主產于江西、浙江、安徽、江蘇、陜西等地。味辛，性溫，歸肺、脾、腎、膀胱經，具有行氣止痛、溫腎散寒等功效，臨床主要用于胃寒氣滯、胸悶脘痛、呃逆、痛經等癥[1-2]。烏藥各部位含有糖類、酚類、鞣質、氨基酸、蛋白質、生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素、內酯、甾體等成分，但是各成分在不同器官中的含量有差異，如氨基酸在塊根中含量較高，生物堿在直根和塊根中含量較高。烏藥主要由揮發油、異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜三大類成分組成[3-5]，同時烏藥中還含有烏藥醚內酯、異烏藥內酯、烏藥內酯和去甲異波爾定等[6]。有報道烏藥提取物有明顯的鎮痛、抗炎作用[7-8]，烏藥葉總黃酮具有降脂作用、抗氧化作用及肝損傷的保護作用[9-10]，烏藥提取物還具有抗疲勞作用[11]。本次研究主要分析烏藥水提取物抗心律失常的作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

烏藥水提取物的制備：取干燥烏藥全草（從撫州市醫藥公司購置）300 g，加雙蒸水過液面2 cm，煮沸3次。30 min/次，合并濾液，濾液濃縮至300 ml。濃縮液加3倍量95%的乙醇混勻，冰箱靜置過夜，次日減壓蒸留，回收乙醇，得300 ml無醇味的烏藥提取物。提取物相當于1 g/ml的烏藥。用0.5%NaHCO3溶液調整pH為7.0，置冰箱中備用。

維拉帕米（上海禾豐制藥有限公司，批號：20120234），三氯甲烷（上海試劑總廠，批號：20110820），腎上腺素（上海禾豐制藥有限公司，批號：20120234），鹽酸普魯卡因（天津世紀藥業有限公司，批號：20120402），氯化鈣（天津金耀氨基酸有限公司，批號：20100904）。

1.2 試驗動物與儀器

動物：家兔、SD大鼠和昆明種小鼠購自江西中醫學院實驗動物中心（級別：清潔級），蟾蜍由贛南醫學院動物中心提供。

儀器：SBR-1示波器（汕頭電子儀器廠），XDH-3心電圖機（上海醫療電子儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 烏藥水提取物對三氯甲烷誘發小鼠室顫影響試驗 昆明種小鼠80只，雌雄兼用，體重（22.3±1.8）g，隨機分為4組。分別腹腔注射10.0 mg/kg烏藥水提取物、30.0 mg/kg烏藥水提取物、5.0 mg/kg維拉帕米和等容積的生理鹽水，25 min后將小鼠移入含有10 ml三氯甲烷藥棉的燒杯中，至小鼠呼吸停止后，立即剖胸觀察，以確定是否發生心室纖顫。

1.3.2 烏藥水提取物對氯化鈣誘發大鼠室顫影響試驗取SD大鼠24只，雌雄兼用，體重(190±20)g，隨機分為4組，腹腔注射烏拉坦1.2g/kg，麻醉，記錄Ⅱ導聯ECG，分別腹腔注射10.0 mg/kg烏藥水提取物、30.0 mg/kg烏藥水提取物、5.0 mg/kg的維拉帕米和等容積的生理鹽水，5 min 后快速（10 s內）靜脈注射 CaCl2，140 mg/kg，記錄大鼠發生心室纖顫的只數和發生率。

1.3.3 烏藥水提取物對腎上腺素誘發家兔心律失常影響試驗 取家兔 16只，體重（2.0±0.5）kg。 首次快速（1 min內注完）靜脈注射0.025%腎上腺素75 μg/kg，記錄出現室性心律失常的時間以及心律失常的持續時間。45 min后，靜脈注射20.0 mg/kg的烏藥提取物，5 min后再次快速靜脈注射等量的腎上腺素。采用自身對照方法，比較給藥前后開始出現室性心律失常的時間和心律失常持續時間。

1.3.4 烏藥水提取物對蟾蜍離體坐骨神經動作電位影響試驗 制備蟾蜍離體坐骨神經標本，標本于任氏液中穩定0.5 h，坐骨神經近心端用0.25 ms、2 Hz、2倍閾電壓強度的方波刺激，遠心端通過引導電極與SBR雙線示波器連接，觀察坐骨神經正常動作電位。在位于刺激電極與引導電極之間的神經干上，分別放置浸濕試藥的小棉球，觀察用藥前后動作電位的振幅。標本分別給予任氏液、1.0%的鹽酸普魯卡因溶液、0.5 g/ml和1.0 g/ml的烏藥水提取物，以給藥前后動作電位振幅為100%，分別計算給藥后不同時間動作電位振幅的相應百分率。

1.4 統計學方法

采用SPSS 14.0統計軟件包對相關數據進行分析，計量資料以±s表示，組間兩兩比較用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 烏藥水提取物對三氯甲烷誘發小鼠室顫的影響

本研究提示，10.0、30.0 mg/kg的烏藥水提取物能使小鼠室顫發生率顯著下降（P＜0.05）（表1）。

表1 烏藥水提取物對三氯甲烷誘發小鼠室顫的影響（±s）

與生理鹽水組比較，*P＜0.05；#P＜0.01

組別 n 劑量（mg/kg）小鼠室顫只數（n）室顫發生率（%）生理鹽水組維拉帕米組烏藥水提取物A組烏藥水提取物B組20 20 20 20-5.0 10.0 30.0 20 4 10 7 100.0 20.0#50.0*35.0#

2.2 烏藥水提取物對氯化鈣誘發大鼠室顫的影響

10.0 mg/kg、30.0 mg/kg的烏藥水提取物能顯著降低大鼠室顫的發生率（P＜0.05）（表2）。

表2 烏藥水提取物對CaCl2誘發大鼠室顫的影響（±s）

表2 烏藥水提取物對CaCl2誘發大鼠室顫的影響（±s）

與生理鹽水組比較，*P＜0.05；#P＜0.01

組別 n 劑量（mg/kg）小鼠室顫只數（n）室顫發生率（%）生理鹽水組維拉帕米組烏藥水提取物A組烏藥水提取物B組6666-5.0 10.0 30.0 5132 100.0 16.6#50.0*33.3#

2.3 烏藥水提取物對腎上腺素誘發家兔心律失常的影響

20.0 mg/kg的烏藥水提取物能顯著延長腎上腺素誘發家兔開始出現心律失常的時間和心律失常持續時間（P＜0.05）（表3）。

2.4 烏藥水提取液對蟾蜍離體坐骨神經動作電位的影響

0.5 g/ml和1.0 g/ml的烏藥水提取液能顯著降低蟾蜍離體坐骨神經動作電位振幅（P＜0.05）（表4）。

表3 烏藥水提取物對腎上腺素誘發家兔心律失常的影響（s，±s）

表3 烏藥水提取物對腎上腺素誘發家兔心律失常的影響（s，±s）

與給藥前比較，*P＜0.01

時間 n 開始出現心律失常的時間 心律失常持續時間給藥前給藥后88 1.9±1.1 18.1±8.6*198±30.3 56.2±25.6*

表4 烏藥水提取液對蟾蜍離體坐骨神經動作電位振幅的影響（%，±s）

表4 烏藥水提取液對蟾蜍離體坐骨神經動作電位振幅的影響（%，±s）

與任氏液組比較，*P ＜0.05；**P ＜0.01

藥物名稱 n 給藥前給藥后6 min 12 min 18 min 24 min任氏液普魯卡因烏藥水提取液（0.5 g/ml）烏藥水提取液（1.0 g/ml）10 10 10 10 100 100 100 100 99.5±4.6 31.6±18.7*58.1±22.3*42.4±17.9*99.1±3.6 3.3±2.5#27.3±5.6#22.6±3.1#100.5±4.7 0#10.8±2.6#6.7±3.1#99.8±2.7 0#2.3±1.8#0#

3 討論

一定劑量的三氯甲烷可提高心肌的自律性，導致室性期前收縮、室性心動過速，甚至室性顫動。本次研究中生理鹽水組小鼠室顫發生率為100.0%，而低劑量（10.0 mg/kg）和高劑量（30.0 mg/kg）的烏藥水提取物使小鼠室顫率分別降低為50.0%、35.0%，提示烏藥水提取物可降低三氯甲烷誘發的室顫發生率，且具有劑量依賴性。

腎上腺素為腎上腺素受體（α、β）激動劑，通過激動心臟的β1-腎上腺素受體對心臟產生較強的興奮作用，并且腎上腺素受體興奮后可開放Ca2+通道，促進Ca2+內流，提高心肌細胞的興奮性和自律性，但也可引起后去極及自發活動。同時β1-受體興奮還可激活K+通道，促進K+外流，降低心肌細胞的最大舒張電位，增加膜反應性，使傳導加快，故腎上腺素過量又可導致心律失常的發生。給予10.0、30.0 mg/kg的烏藥水提取物后，腎上腺素誘發心律失常的時間較給藥前明顯延長，且心律失常持續時間也明顯縮短。說明烏藥水提取物可能通過阻斷心臟的β1-腎上腺素受體，降低心肌細胞的興奮性和自律性，達到對抗腎上腺素誘發的心律失常。

蟾蜍離體坐骨神經動作電位振幅主要系Na+內流所致，0.5、1.0 g/ml的烏藥水提取物能明顯降低蟾蜍離體坐骨神經動作電位的振幅，表明烏藥水提取物對Na+內流有抑制作用。

綜上所述，烏藥水提取物具有抗心律失常作用，且其抗心律失常作用可能與抑制Na+內流及抗β-腎上腺素受體有關。

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Study of antiarrhythmic effect ofLindera aggregataaqueous extract

GUO Xiao-qiu1LI Wu2WANG Li-ping2HE Yue2
1.Department of Pharmacy,Hospital of Traditional Chinese Medicine of Jiangxi Province,Nanchang 330006,China;2.Department of Pharmacy,the First People′s Hospital of Fuzhou City in Jiangxi Province,Fuzhou 344000,China

ObjectiveTo study the antiarrhythmic effect of aqueous extract of Lindera aggregata.MethodsThe conventional anti-arrhythmic methods was selected,two conventional antiarrhythmic models were employed by establishing the chloroform-induced mice ventricular fibrillation model and calcium-induced rat ventricular fibrillation model,the experimental animals were divided into saline group,verapamil group,10.0 mg/kg and 30 mg/kg Lindera aggregata aqueous extract treating groups.In the adrenaline-induced arrhythmias rabbits experiment,animals were grouped as before administration and after administration.In the in vitro toad sciatic nerve action potential experiment,the toads were randomly divided into ringer solution group,1.0%procaine hydrochloride group,0.5 g/ml and 1.0 g/ml Lindera aggregata aqueous extract groups.ResultsThe aqueous extract of Lindera aggregata showed obvious treating effect on mice ventricular fibrillation(VF)induced by chloroform(P＜0.05),and also for preventive effect of rat VF induced by calcium chloride(P＜0.01),it reduced the potential amplitude of toad sciatic nerve action significantly(P＜0.05).ConclusionThe aqueous extract of Lindera aggregata has obvious antiarrhythmic effect against arrhythmia induced by chloroform,calcium chloride and adrenaline.The mechanism may be related to the inhibition of Na+influx and blocking β-adrenergic receptor.

Lindera Aggregata(Sims)Kosterm;Aqueous extract;Arrhythmia

R965.1

A

1674-4721（2014）04（a）-0016-03

江西省衛生廳科技計劃項目（20133229）

郭曉秋（1972-），女，本科學歷，副主任藥師，主要從事臨床藥學研究

2014-01-27 本文編輯：袁 成）