醒脾解郁方對抑郁模型大鼠抑郁行為和血清5-羥色胺、皮質酮的影響

王椿野郭蓉娟

（1中國中醫科學院，北京，100700；2北京中醫藥大學東方醫院，北京，100078）

實驗研究

醒脾解郁方對抑郁模型大鼠抑郁行為和血清5-羥色胺、皮質酮的影響

王椿野1郭蓉娟2

（1中國中醫科學院，北京，100700；2北京中醫藥大學東方醫院，北京，100078）

目的：初步探索醒脾解郁方對抑郁模型大鼠的抗抑郁行為和血清激素、神經遞質變化的影響。方法：本實驗將SD大鼠隨機分為4組：正常組、模型對照組、舍曲林對照組、中藥（石菖蒲、西洋參、郁金、熟地黃）組，采用21 d慢性不可預見性溫和應激建立抑郁大鼠模型，以糖水偏愛和曠野試驗移動距離評價各組大鼠抑郁行為，用ELISA法測定大鼠血清5-羥色胺、皮質酮含量，并比較醒脾解郁方對其影響的作用。結果：21 d慢性應激建立大鼠抑郁模型后，與正常組比較，模型組體重降低明顯（P＜0.01），糖水偏愛率、曠場試驗移動距離顯著下降（P＜0.01），同時模型組血清皮質酮含量顯著增加（P＜0.01）、5-HT明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組均能顯著改善大鼠抑郁行為（P＜0.05），并且醒脾解郁方和舍曲林均對抑郁大鼠血清皮質酮、5-HT均有顯著逆轉作用（P＜0.05）。結論：醒脾解郁方具有抗抑郁作用，并與舍曲林效果相當，并能逆轉抑郁模型大鼠血清皮質酮、5-HT的作用，這可能是其改善抑郁的作用機制。

慢性不可預見性應激；抑郁癥；醒脾解郁法；5-HT；皮質酮

抑郁癥是由多種因素引起的，以心境低落為主要癥狀的一種精神障礙性疾病。抑郁癥會對人的神經、內分泌、免疫系統的生理病理功能產生嚴重影響。其具有高發病率、低治愈率、高復發率等特點，給患者造成的身心危害，給家庭及社會帶來的沉重的經濟和精神負擔。世界衛生組織預測，抑郁癥將在2020年成為全球排位在第二位的疾病，嚴重危害眾多人們的健康，且抑郁癥患者存在自殺危險性是正常人的11倍［1］。抑郁癥的機制普遍認為抑郁患者純在5-羥色胺（5-HT）等神經遞質的異常，及下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）功能異常。目前，抗抑郁藥在臨床上廣泛應用，多數藥物是基于腦組織內單胺類神經遞質的代謝異常，及其受體、轉運體功能障礙的機制假說而研發的，通過提升神經元突觸間隙內5-HT和去甲腎上腺素（NE）濃度起到治療作用，包括5-HT、NE轉運體抑制劑和單胺氧化酶抑制劑。然而，抗抑郁藥不總是有效，且存在不良反應較大、起效緩慢等問題。中醫藥對抑郁癥的認識和治療歷史悠久，普遍認為歸屬于“郁病”范疇，病機涉及肝、脾，病機多見肝郁脾虛等［2-4］。醒脾解郁方方藥少而精，基于上述中醫病機認識組成，本實驗主要探討醒脾解郁方對慢性不可預見性應激致抑郁大鼠模型的抗抑郁作用，及其對大鼠血清5-HT、皮質酮的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 清潔級健康成年雄性SD大鼠，體重（210～230 g），由軍事醫學科學院實驗動物中心提供并飼養（合格證號：SCXK-2012-0001）。溫度24～26℃，明暗循環（各12 h），標準顆粒飼料飼養，純凈飲水。適應性飼養7 d后，隨機分成4組，即正常組、模型組、舍曲林組、中藥組，每組10只。除正常組外，各給藥組和模型組大鼠均單籠飼養。

1.2 藥物干預 鹽酸舍曲林片：輝瑞制藥公司生產（國藥準字H10980141），50 mg片。醒脾解郁方：石菖蒲、西洋參、郁金、熟地黃，購自北京康仁堂藥業有限公司。舍曲林組灌胃給予10 mgkg，中藥組灌胃給予600 mgkg，連續給藥21 d，正常組、模型組每日等劑量生理鹽水灌胃。

1.3 慢性不可預見性應激致抑郁模型大鼠的建立 慢性應激方法具體如下［5-6］：將鼠籠傾斜24 h，明暗顛倒24 h，10℃冰水游泳5 min，25℃熱水游泳30 min，夾尾1 min，水平搖晃5 min，濕墊料24 h，共7種刺激隨機安排到21 d內，1種d，每種刺激至少出現2次，同種刺激不能連續出現，使動物不能預料刺激的發生，連續給予21 d應激。

1.4 糖水偏愛測試 所有大鼠在模型建立前后進行糖水偏好實驗。動物在禁食禁水20 h后放入1瓶1%的蔗糖水和1瓶普通飲用水，2瓶位置隨機，觀察其在1 h內的液體消耗量，排除飲水瓶滴漏所致的液體消耗量。糖水偏愛＝糖水消耗總液體消耗×100%。

1.5 曠場試驗 裝置由不透明木材制造，周圍為高40 cm的木墻，底面為100 cm×100 cm的正方形，被分為25個等邊方格，內壁涂滿黑色漆料。模型建立前后1 d的14：00～18：00在安靜的房間內進行。每只大鼠只進行1次測定，測定完畢后徹底清潔敞箱再進行下1只。糖水偏好試驗結束后，將大鼠放入中心方格內，觀察其在3 min內穿越格數（4爪均進入方格才記數，為水平運動得分）、后肢直立次數（2前爪騰空或攀附墻壁，為垂直運動得分），記錄移動距離。

1.6 血清5-HT和皮質酮含量的影響 用ELISA法測定大鼠血清皮質酮、5-HT的含量。試劑：皮質酮、5-HT測試盒由軍事醫學科學院實驗動物中心提供，用ELISA法檢測血清中皮質酮、5-HT含量，測定按照試劑盒說明嚴格進行。主要儀器Sunrise Romote酶標儀（天津天美國際貿易有限公司），離心機（上海安亭科學儀器廠），分析天平等。

1.7 統計學方法 運用SPSS 17.0統計軟件進行數據統計，數據以（±s）表示，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 體重 造模前各組大鼠體重無統計學意義。21 d慢性應激后，與正常組比較，模型組大鼠體重顯著降低（P＜0.01），而中藥組和舍曲林組大鼠體重無統計學意義（P＞0.05）（見表1）。

表1 大鼠體重變化

2.2 抑郁行為學評價（糖水偏愛試驗和曠場試驗）造模前各組大鼠的糖水偏愛率無統計學意義。21 d慢性應激后，與正常組比較，模型組大鼠糖水偏愛率顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組顯著增加抑郁大鼠糖水偏愛率（P＜0.05）。21 d慢性應激后，與正常組比較，模型組大鼠活動路程顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組大鼠運動路程顯著降低（P＜0.05）（見表2）。

表2 抑郁行為學變化

2.3 血清皮質酮和5-HT的影響 21 d慢性應激后，與正常組比較，模型組大鼠皮質酮顯著升高、5-HT顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，中藥組和舍曲林組均能顯著降低抑郁大鼠皮質酮（P＜0.05），明顯增加抑郁大鼠5-HT含量（P＜0.05）（見表3）。

表3 大鼠血清皮質酮、5-HT變化

3 討論

抑郁癥患者在國內外的發病率逐漸增加，在我國據有關報道，抑郁癥患者已經超過2 600萬，抑郁癥正逐漸成為嚴重危害人名健康的重大公共衛生問題，給患者和社會造成了沉重的負擔，并且抑郁癥患者自殺和自殺未遂者占我國自殺和未遂人數的50%～70%［7-8］，成為致病致殘的重要病因之一。目前，在抑郁癥機制研究中，認可度較高是下丘腦-垂體-腎上腺（Hypothalamic-pituitary-adrenocortical，HPA）軸異常假說和單胺遞質假說。

當機體受到外界刺激時，會導致一系列的應激反應，其本質是一系列的神經內分泌變化，其中HPA軸是關鍵機制，其生理機制如下［9］：首先，促腎上腺皮質激素釋放激素（Corticotropin-releasing Hormone，CRH）在室旁核神經元分泌，經過垂體門脈系統到達刺激垂體，垂體釋放促腎上腺皮質激素（Adrenocorticotropic Hormone，ACTH），ACTH經過體循環到達腎上腺皮質，促進糖皮質激素（Glucocorticoid，GC）的釋放，在靈長類動物主要為皮質醇，在齲齒類動物主要為皮質酮，最后，GC分別通過作用于海馬糖皮質激素受體（Glucocorticoid Receptor，GR）和垂體、腎上腺受體，減少ACTH的釋放及阻斷其興奮效用，形成反饋機制。

在抑郁癥患者中，HPA軸呈功能亢進狀態［10］。其原因包括兩方面：一方面由于應激的持續存在，機體產生過多的GC，與海馬GR結合，導致海馬損傷；另一方面，在持續應激下海馬神經元功能和結構損傷，對HPA軸的抑制作用減弱，對HPA軸負反饋作用減弱，機體會生產更多的GC，形成惡性循環。海馬是情緒和學習記憶的重要腦區，海馬神經元可塑性損傷后，導致抑郁癥患者發生情緒和認知障礙。

單胺假說認為，單胺類神經遞質濃度和活性下降是抑郁癥發生的重要機制。單胺神經遞質和其受體結合后，發揮調節細胞內蛋白質表達的作用。5-HT系統異常是抑郁癥重要神經生物學基礎之一，有研究表明，抑郁癥患者多伴有5-HT含量下降［11］。5-HT可以調節第二信使cAMP介導的信號級聯反應，如激活轉錄因子CREB、激活BDNF的相關基因表達等［12］。慢性應激過程中，海馬神經元5-HT及其受體功能異常，影響了海馬的生理功能［13］。

本研究所采用的21 d慢性不可預見性應激致抑郁大鼠模型的造模方法，被國內外神經科學者廣泛應用，屬于經典的抑郁模型之一，該方法很好的模擬了人類的抑郁癥狀和復雜的應激環境，造模后模型穩定［14］。模擬了抑郁癥的興趣喪失、快感缺乏、運動能力下降等核心癥狀［15］。本研究旨在探討醒脾解郁方是否可以通過調節血清5-HT、皮質酮的含量起到抗抑郁作用。結果顯示：抑郁模型大鼠的血清5-HT明顯下降、皮質酮顯著增加，與正常組比較有統計學意義，這與其他研究結果一致［16］。醒脾解郁方組成方藥數量較少，臨床應用時間較長，在本次研究中發現醒脾解郁方可以明顯改善抑郁大鼠的糖水偏愛和曠場試驗中表現的抑郁行為，并與舍曲林效果相當；在逆轉血清5-HT、皮質酮含量方面，也與舍曲林相當，其可以增高抑郁大鼠血清5-HT含量，降低血清皮質酮的含量。抑郁癥機制尚不清楚，目前的抗抑郁藥也不能100%有效，除了上文論述的抑郁癥機制外，還涉氧化應激、炎性因子等方面。現在普遍認為中醫藥通過多靶點、多途徑、多層面在抑郁癥的治療中發揮作用，筆者等正在對醒脾解郁方在抑郁癥炎性因子方面的作用機制進行實驗研究。相信通過中醫藥對抑郁癥不同機制干預作用的探討，將進一步加深對抑郁癥相關機制的了解，并對提高抑郁癥的療效起到巨大作用。

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（2014-04-09收稿 責任編輯：曹柏）

The Effect of Xingpijieyu Decoction on Depressive Behavior and Serum 5-HT as well as Corticosterone of Depression Rats from Chronic Stress

Wang Chunye1，Guo Rongjuan2
（1 China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China；2 Dong Fang Hospital of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China）

Objective：To preliminarily explore the effect of Xingpijieyu decoction on depressive behavior and serum 5-HT and corticosterone on depression model rats.Methods：SD rats were randomly divided into 4 groups：normal group，model control group，sertraline control group，and traditional Chinese medicine（stone calamus，American ginseng，radix curcumae，cultivated land）group.21 days chronic unpredictable mild stress was adopted to establish the rat model of depression，using sucrose preference and open-field test to evaluate depression of rats，and compare the change of 5-HT and corticosterone form every groups of rats by ELISA.Results：After 21 days of chronic stress depression rats model made，compared with normal group，weight，preference for sugar water rate and open-field total distance of the model group were significantly decreased（P＜0.01），and serum corticosterone increased significantly（P＜0.01），serum 5-HT significantly decreased（P＜0.01）；Compared with model group，sertraline group and Chinese medicine group both could improve depressive behavior（P＜0.05），and reverse serum 5-HT and corticosterone significantly（P＜0.05）.Conclusion：Xingpijieyu Decoction can improve chronic unpredictable stress depression rats model depression function，which is the same as sertraline controls.Xingpijieyu decoction also could reverse erum 5-HT and corticosterone from depression rats，which might be related to its improvement of depression.

Chronic unpredictable stress；Depression；5-HT；Corticosterone；Xingpijieyu decoction

R332；R277.7

A

10.3969j.issn.1673-7202.2014.12.019

國家自然科學基金面上項目（編號：81273624）

王椿野（1981—），中國中醫科學院廣安門醫院博士后，研究方向：中醫心身醫學，E-mail：chaojichunye＠hotmail.com

郭蓉娟（1964—），女，博士，主任醫師，博士生導師，研究方向：中醫藥防治腦病基礎及臨床研究，E-mail：dfguorongjuan＠163.com