子宮肌瘤患者外周血胰島素樣生長因子水平的變化及其與子宮肌瘤組織中雌激素受體和孕激素受體的關系研究

李元成，崔志丹，沈 伶

子宮肌瘤是女性生殖系統最常見的良性腫瘤，是影響婦女生殖健康的常見病及多發病。據報道，育齡婦女中其發病率高達25%～40%，年齡>40歲的婦女約有50%患有子宮肌瘤[1-2]。子宮肌瘤的發生、發展是多步驟、多因素的復雜過程，其病因尚未十分明確[3]。目前,普遍認為是雌激素和孕激素相互作用引起的，為激素依賴性腫瘤，與基因、細胞增殖與凋亡、細胞信號傳導途徑異常及細胞因子等多種因素有關[4]。胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor，IGF)家族由配體IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ、受體IGF-ⅠR和IGF-ⅡR 以及6種結合蛋白構成。IGF具有促進細胞分裂、增殖、分化、調節代謝以及血管形成的作用，當其過度高表達時與腫瘤的發生發展密切相關[5]。本研究通過對子宮肌瘤患者IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progestrone receptor，PR)的檢測，探討子宮肌瘤的發病機制，為子宮肌瘤的藥物治療提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1—9月在汕頭大學醫學院第一附屬醫院婦產科住院手術治療臨床診斷為子宮肌瘤的患者56例為研究組，年齡36～52歲，平均(43.5±6.7)歲。所有患者行子宮肌瘤切除術(包括子宮全切術或子宮肌瘤剔除術)，術后切除標本送病理學檢查確診為子宮肌瘤。另選擇同期在本院進行健康體檢的健康女性45例為對照組，年齡38～51歲，平均(44.1±5.2)歲。所有受檢者近3個月內未使用任何激素類藥物，并且排除糖尿病、甲狀腺功能亢進或減低、卵巢腫瘤等合并癥。

1.2 方法

1.2.1 外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平的檢測 抽取肘靜脈血5 ml，標本室溫靜置待血液完全凝固后，3 000 r/min離心10 min(離心半徑13.5 cm)，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法測定血清中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平，樣本由專人負責檢測，操作嚴格按說明書進行。ELISA試劑盒由美國R&B公司提供。

1.2.2 標本的采集及固定 子宮肌瘤標本取自子宮肌瘤患者子宮肌瘤結節中心部位組織，置于10%中性甲醛溶液中固定24 h，常規石蠟包埋切片。

1.2.3 子宮肌瘤組織ER、PR的檢測 石蠟切片用二甲苯脫蠟至去離子化，乙二胺四乙酸(EDTA)修復緩沖液進行抗原高壓熱修復，打孔劑洗滌后采用3%過氧化氫室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后滴加特異性ER和PR單克隆抗體，4 ℃孵育過夜，PBS洗滌加入二抗37 ℃孵育30 min，PBS洗滌，加入三抗37 ℃ 孵育30 min，PBS洗滌；二氨基聯苯胺(DAB)顯色，沖洗，蘇木素復染，脫水、透明、封片。各個受體細胞核內或細胞質內有棕黃色顆粒染色者為陽性染色細胞，陽性判斷采用Sinicrope改良法。根據切片中染色細胞計數和染色強度進行評分，表達評分=染色細胞計數評分×染色強度評分，表達評分<1分為陰性結果，2～3分為弱陽性，4～5分為中度陽性，>5分為強陽性。

2 結果

2.1 研究組與對照組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比較 研究組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 子宮肌瘤患者ER(-)組與ER(+)組、PR(-)組與PR(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比較 子宮肌瘤患者ER(-)22例(39.3%),ER(+)34例(60.7%)；PR(-)18例(32.1%),PR(+)38例(67.9%)。子宮肌瘤患者ER(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于ER(-)組，差異有統計學意義(P<0.05，見表2)；子宮肌瘤患者PR(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于PR(-)組，差異有統計學意義(P<0.05，見表3)。

Table1 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood between study group and control group

組別例數IGF-ⅠIGF-Ⅱ對照組45 425±54234±44研究組561343±78739±18t值 4 17 2 13P值<0 05<0 05

注：IGF-Ⅰ=胰島素樣生長因子Ⅰ，IGF-Ⅱ=胰島素樣生長因子Ⅱ

Table2 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with ER (-) and ER (+)

組別例數IGF-ⅠIGF-ⅡER(-)組221125±69578±17ER(+)組341483±73843±18t值 2 35 2 51P值<0 05<0 05

注：ER=雌激素受體

2.3 子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達的相關性分析 相關性分析結果顯示，子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達評分均呈正相關(P<0.05，見表4)。

Table3 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with PR (-) and PR (+)

組別例數IGF-ⅠIGF-ⅡPR(-)組181243±70678±18PR(+)組381552±75859±18t值 2 29 2 48P值<0 05<0 05

注：PR=孕激素受體

表4 子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達的相關性分析

Table4 Correlation analysis on IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood and the expression of ER and PR in uterine leiomyoma tissue

指標ERr值 P值PRr值 P值IGF-Ⅰ0 5740 0000 5980 000IGF-Ⅱ0 6650 0000 6260 000

3 討論

子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，是影響婦女生殖健康的常見病及多發病，并且是導致不孕、月經失調及子宮切除的主要原因。雖然絕大多數子宮肌瘤呈現良性，但也有少數產生惡變。子宮肌瘤發病機制尚未十分明確，其發生可能與女性體內雌、孕激素分泌過高或長期雌激素刺激有關。雌激素有誘發并促進子宮肌瘤生長的作用，使子宮肌瘤細胞增生肥大，肌層變厚，是誘發子宮肌瘤的一個重要內分泌因素。近來研究表明孕激素對子宮肌瘤更有促生長作用[6]。雌激素、孕激素分別通過ER、PR發揮生物學作用。ER、PR與雌、孕激素有較高的親和力，選擇性保留較高濃度的雌、孕激素，從而使其生物學效應加強[7]。

胰島素樣生長因子軸(IGFs)是人體內具有多種重要功能的細胞因子。IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ為胰島素樣生長因子家族的成員，參與胚胎發育、創傷愈合過程，并且與其他生長因子一起協同促進多種細胞的分化成熟。IGF-Ⅰ是一種在多種細胞和組織中發揮促有絲分裂和細胞分化作用的多肽類生長因子，在腫瘤生長分化方面起著重要的調控作用[8]。血清及組織中IGF-Ⅰ過度表達時引起正常細胞活性改變，出現增殖失控、分化缺失及凋亡減少，導致惡性腫瘤的發生、發展[9]。多種類型的腫瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌、大腸癌組織中均可異常表達IGF-Ⅰ[10-11]。IGF-Ⅱ是由IGF-Ⅰ編碼產生的單鏈弱酸性多肽，是腫瘤自分泌生長因子，在體內外都有很強的促進細胞分裂、增殖能力，IGF-Ⅱ過表達與腫瘤的侵襲、轉移顯著相關，此外IGF-Ⅱ還具有較強的促血管內皮細胞分裂、增加內皮細胞的化學趨向性等作用[12-14]。子宮肌瘤的發生發展在與ER、PR相關的同時，IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ等細胞因子可能也扮演著重要角色，并可能與ER、PR相關聯[7]。

本研究結果顯示，子宮肌瘤組織ER和PR的陽性表達率分別為60.7%和67.9%，與文獻報道基本一致[7]。與健康體檢人群比較，子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平顯著升高，提示IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在子宮肌瘤的發生和發展中可能發揮重要作用。本研究對ER(+)、ER(-)以及PR(+)、PR(-)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平進行比較，結果顯示子宮肌瘤ER(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于ER(-)患者，子宮肌瘤PR(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于PR(-)患者；相關性分析結果顯示，IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達評分均呈正相關。因此認為，IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ與ER、PR具有關聯性，子宮肌瘤的生長與患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平升高有關，并且與子宮肌瘤ER、PR的表達呈正相關。但是因本研究為臨床橫斷面研究，尚難確定二者間的因果關系，仍需設計合理的大樣本研究來進行進一步論證。

綜上所述，女性外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平的變化可能會導致子宮間葉組織的異常改變，與子宮肌瘤發病密切相關，為從分子水平研究子宮肌瘤藥物治療開辟新途徑。

1 Sosna O，Kolesor L，slavcev A，et al.Thl/Th2 cytokine gene poly morphisms in patients with uterine fibroid[J].Folia Biol(Praha)，2010，56(5)：206-207.

2 李巖，翟淑娜，姜騰軒，等.體力活動水平與子宮肌瘤發生關系的研究[J].中國全科醫學，2012，15(9)：2905

3 李春紅.絕經后子宮肌瘤16例臨床分析[J].實用心腦肺血管病雜志，2010，18(3)：325.

4 張華，王紀元，王悅冰，等.TNF-α、MMP-2及NF-κB在人子宮肌瘤組織中的表達研究[J].天津醫科大學學報，2013，19(3):209-213.

5 Novosyadlyy R,LeRoith D.Insulin-like growth factors and insulin:at the crossroad between tumor development and longevity[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2012,67(6):640-651.

6 Hoekstra AV，Sefton EC，Berry E，et al.Progestins activate the AKT pathway in leiomyoma cells and promote survival[J].J Clin Endocrind Metab，2009，94(5)：1768-1774.

7 王敏，李青，史春雪.SULT1A1和雌、孕激素受體蛋白在子宮肌瘤中的表達及其臨床意義[J].中國醫科大學學報，2010，39(8)：658-662.

8 Bartella V,De Marco P,Malaguarnera R,et al.New advances on the functional cross-talk between insulin-like growth factor-Ⅰ and estrogen signaling in cancer[J].Cellular Signalling,2012,24(8):1515-1521.

9 Gallagher EJ,LeRoith D.The proliferating role of insulin and insulin-like growth factors in cancer[J].Trends in Endocrinology and Metabolism,2010,21(10):610-618.

10 Rinaldi S，Cleveland R，Norat T，et al.Serum levels of IGF-Ⅰ，IGFBP-3 and colorectal cancer risk：results from the EPIC cohort，plus a meta-analysis of prospective studies[J].Int J Cancer，2010，126(7)：1702-1715.

11 陳博藝.IGF-Ⅱ、VEGF和IL-2、IFN-γ在原發性肝癌根治術前、后的變化及意義[J].海南醫學院學報，2009，15(6)：576.

12 崔書中，巴明臣，呂嘉春，等.IGF-Ⅱ、IGFBP-2在肝癌病人血清的表達及其對評價經皮肝動脈化療栓塞治療效果的意義[J].中華肝膽外科雜志，2010，16(4)：245-238.

13 彭珊璐，馮國祝，王國香，等.新生兒缺氧缺血性腦病血清胰島素樣生長因子-1測定的意義[J].實用心腦肺血管病雜志，2012，20(4)：601.

14 劉潤萍,孫麗莎,陳秋.胰島素樣生長因子-1與糖尿病合并骨質疏松的關系研究進展[J].中國全科醫學,2013,16(1)：237.