柿葉中黃酮類成分的化學(xué)研究*

張勝海，王英姿，段飛鵬，李彩霞，王 玥，孟繁蘊

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102；2.北京師范大學(xué)，中藥資源保護(hù)與利用北京市重點實驗室，北京 100875）

柿葉為柿樹科柿樹屬植物柿（Diospryros kaki L）的新鮮或干燥葉，味苦，性寒，具有下氣平喘、生津止渴、清熱解毒等作用。其入藥始見于明《滇南本草》記載“經(jīng)霜葉敷臃瘡”，《本草再新》記載用于“治咳嗽吐血，止咳生津”，主要用于止血、降壓及治療冠心病心絞痛、胃潰瘍出血、肺結(jié)核出血、功能性子宮出血等內(nèi)臟出血病癥[1]，其主要有效成分為黃酮類、三萜類、有機(jī)酸類、香豆素類、植物甾醇類、揮發(fā)性成分等[2-3]。目前上市的的柿葉制劑均以柿葉的乙酸乙酯萃取物為原料，其中的主要有效成分為黃酮類化合物。柿葉中的黃酮類化合物具有防治心血管疾病，保護(hù)心肌細(xì)胞、腦細(xì)胞等多種活性[4-7]。

為了進(jìn)一步研究柿葉中的黃酮類化合物組成，本實驗分離并鑒定了6個黃酮類化合物：染料木素，異鼠李素，槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷，槲皮素，槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，蘆丁。其中化合物1～3為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker A vance500型核磁共振譜儀；A PEX II型FT-ICR質(zhì)譜儀，Lab Alliance中低壓半制備液相；LabAlliance半制備柱KromasilC18（250mm×20mm，10 μm）；Sephadex LH-20 為 Pharmacia 公司產(chǎn)品；Toyopearl HW-40C為日本TOSOH公司產(chǎn)品；柱色譜用聚酰胺（100～200目）和薄層色譜聚酰胺薄膜均為臺州市路橋四甲生化塑料廠產(chǎn)品；實驗所用試劑均為分析純。實驗分離用樣品為柿葉水提取物的乙酸乙酯萃取物，陜西華天生物工程有限公司，批號：201003。

2 分離

柿葉水提取物的乙酸乙酯萃取物（100 g），經(jīng)聚酰胺柱色譜（水-乙醇 90∶10～5∶95）梯度洗脫劃分為Fr.1～7共7個組分。Fr.4經(jīng)聚酰胺柱色譜（水-乙醇梯度洗脫）分離純化得化合物6（48 mg）。Fr.5經(jīng)聚酰胺柱色譜（水-乙醇梯度洗脫）和Toyopeal HW-40（甲醇洗脫）分離純化得化合物3（4 mg）。Fr.6經(jīng)聚酰胺柱色譜（水-乙醇梯度洗脫）和Toyopeal HW-40（50%甲醇）分離純化得化合物1（8 mg）。Fr.6經(jīng)聚酰胺柱色譜（水-乙醇梯度洗脫）、Sephadex LH-20（50%甲醇）及半制備液相色譜[8-9]（水-甲醇梯度洗脫）分離純化得化合物 5（22mg），2（6mg），4（24mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:淡黃色樹枝狀針晶粉末（甲醇）。ESIMSm/z：271[M+H]+。1H-NMR（DMSO－d6）δ：12.96，10.88，9.59（5，7，4’－OH），8.33（1H，s，H －2），7.38（2H，d，J＝8.5Hz，H－2’，6’），6.82（2H，d，J＝8.5Hz，H－3’，5’），6.39（1H，s，H－8），6.23（1H，s，H－6）。13CNMR （DMSO－d6，125 MHz）δ：180.7 （C－4），164.8（C－7），162.5 （C－5），158.1 （C－4’），157.9 （C－9），154.4（C－2），130.6（C－2’，6’），121.7（C－1’），120.4（C－3），115.6（C－3’，5’），104.9（C－10），99.4（C－6），94.1（C－8）。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道的化合物染料木素基本一致，判斷該化合物為染料木素。

化合物 2：淡黃色粉末。1H-NMR（DMSO-d6），δ：12.44，10.78，9.75，9.43（5，7，4’，3－OH），7.76（1H，d，J＝2.0 Hz，H－2’），7.70（1H，dd，J＝2.0 Hz，8.4 Hz，H－6’），6.95（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5’），6.48（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.20（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6），3.85（3H，s，OCH3）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：176.3（C－4），164.4（C－7），161.1（C－9），156.6（C－5），149.2（C－4’），147.8（C －2），147.0（C －3’），134.9（C －3），122.5（C－1’），122.1（C－6’），116.0（C－2’），112.1（C－5’），103.5（C－10），98.7（C－6），94.1（C－8），56.2（OCH3）。氫譜、碳譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11-12]報道的異鼠李素數(shù)據(jù)基本一致，故確定該化合物為異鼠李素。

化合物3：黃色結(jié)晶性粉末（甲醇）。1H－NMR（DMSO －d6）δ：12.50，9.65，9.53，9.32 （5，4’，3’，3 －OH），7.73（1H，d，J＝2.0 Hz，H－2’），7.59（1H，dd，J＝9.0，2.0 Hz，H－6’），6.89 （1H，d，J＝9.0 Hz，H －5’），6.79（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.41（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6），5.55（1H，s，H－1’’），5.15（1H，d，J＝4.0 Hz），4.93（1H，d，J＝5.0 Hz），4.81（2H，m），3.85（1H，s），3.64（1H，m，H－5’’），1.13（3H，d，J＝7 Hz，Rha－CH3）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：176.5（C－4），161.9（C－7），160.8（C－5），156.1（C－9），148.3（C－2），147.9（C－4’），145.5（C－3’），136.6（C－3），122.3（C－1’），120.6（C－6’），116.1（C－2’），115.6（C－5’），105.1（C－10），99.3（C－6），98.9（C－1’’），94.6（C－8），72.0（C－4’’），70.7（C－3’’），70.5（C－2’’），70.3（C－5’’），18.4（C－6’’）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[13]的槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷一致，故鑒定該化合物為槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷。

化合物 4：黃色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.50，10.78，9.59，9.36，9.30（5，7，3，3’，4’，－OH），7.68 （1H，d，J＝2.0 Hz，H －2’），7.55 （1H，dd，J＝7.5，2.0 Hz，H－6’），6.88（1H，d，J＝7.5 Hz，H－5’），6.41（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6）。13C－NMR （CD3OD，125 MHz）δ：175.9 （C－4），164.9（C－7），161.1（C－9），156.8（C－5），147.5（C－2），146.6（C－4’），144.8（C－3’），135.8（C－3），122.7（C－1’），120.3（C－6’），114.8（C－5’），114.6（C－2’），103.1（C－10），97.8（C－6），93.0（C－8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道的槲皮素數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物 5：黃色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.65，10.86，9.72，9.22（5，7，4’，3’－OH），7.59（1H，dd，J＝8.4，1.5 Hz，H－6’），7.58 （1H，d，J＝1.5 Hz，H －2’），6.85（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5’），6.41（1H，s，H－8），6.21 （1H，s，H－6），5.47 （1H，d，J＝7.2 Hz，H－1’’）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：177.9（C－4），164.6（C－7），161.7（C－5），156.8（C－2，9），148.9（C－4’），145.3（C－3’），133.8（C－3），122.1（C－1’），121.6（C－6’），116.6 （C－5’），115.7 （C－2’），104.4 （C－10），101.3（C－1’’），99.1（C－6），93.9（C－8），78.0（C－2’’），77.0（C－3’’），74.5（C－4’’），70.4（C－5’’），61.4（C－6’’）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[15]的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷一致，故鑒定該化合物為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 6：淡黃色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.61，10.84，9.67，9.18（5，7，3’，4’－OH），7.56（1H，d，J＝2.0 Hz，2’－H），7.55 （1H，dd，J＝2.0，9.0 Hz，6’－H），6.85（1H，d，J＝9.0 Hz，5’－H），6.39（1H，d，J＝1.9 Hz，8－H），6.20（1H，d，J＝1.9 Hz，6－H），5.28（1H，d，J＝7.3 Hz，1’’－H），4.400 （1H，d，J＝1.3 Hz，1’’’－H），3.05～3.72（m，sugar protons），1.00（3H，d，J＝6.2 Hz，6’’’－H）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：177.8（C－4），164.5（C－7），161.7（C－5），157.1（C－9），156.9（C－2），148.9（C－4’），145.2（C－3’），133.8（C－3），122.0（C－6’），121.6 （C－1’），116.7 （C－5’），115.7 （C－2’），104.4（C－10），101.6（C－1’’），101.2（C－1’’’），99.1（C－6），94.0（C－8），76.9（C－3’’），76.4（C－5’’），74.5（C－2’’），72.3（C－4’’’），71.0（C－3’’’），70.8（C－2’’’），70.5（C －4’’），67.4（C －6’’），68.7（C－5’’’），18.2（C－6’’’）。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道一致，故鑒定該化合物為蘆丁。

[1] 王樹松.柿葉的研究進(jìn)展[J].河北中醫(yī)，1998，20（1）：63-64.

[2] 林嬌芬，林河通，謝聯(lián)輝，等.柿葉的化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用及開發(fā)利用[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2005，31（7）：90-96.

[3] 馮振興，任愛農(nóng).柿葉中膽堿含量測定[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（3）：248-249.

[4] 陳 麗，梁宇紅，裴世成，等.柿葉總黃酮對高脂血癥大鼠血脂和血液流變學(xué)的影響[J].中成藥，2011，33（8）：1397-1400.

[5] 歐陽平，貝偉劍，賴文巖，等.柿葉黃酮對缺氧復(fù)氧以及晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2003，23（7）：680-682.

[6] 譚宏棣，孫 懿，覃斐章，等.柿葉總黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床，2009，25（1）：27-29.

[7] 孫 懿，譚宏棣，藍(lán)曉步，等.柿葉黃酮對離體心臟缺血再灌注損傷的干預(yù)作用[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（11）：2915-2916.

[8] 吳克磊，康利平，熊呈琦，等.蒺藜全草中甾體皂苷類化學(xué)成分研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，31（4）：225-228.

[9] 吳 帥，劉二偉，張 祎，等.川續(xù)斷中化學(xué)成分的研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，29（3）：147-150.

[10] 王鳳芹，蔣可志，李祖光.銀杏葉提取物中染料木素的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定[J].色譜，2007，25（4）：509-513.

[11] 唐于平，樓鳳昌，王景華，等.銀杏葉中黃酮類成分的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2001，36（4）：15-17.

[12] 古海鋒，陳若蕓，孫玉華，等.香青蘭化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志，2004，29（3）：232-234

[13] 黃敏珠，陳海生，劉建國，等.中藥鬼針草化學(xué)成分的研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2006，27（8）：888-891.

[14] 魏友霞，王軍憲.二色補血草地下部分化學(xué)成分研究[J].中藥材，2006，29（11）：1182-1184.

[15] 賈曉東，馮 煦，趙興增，等.灰氈毛忍冬的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2008，39（11）：1635-1637.

[16] 唐于平，王 穎，樓鳳昌，等.銀杏葉中的黃酮醇苷類成分[J].藥學(xué)學(xué)報，2000，35（5）：363-366.