大鼠骨髓間充質干細胞的體外分離培養與鑒定

李蘭蘭　陳玲肖　馬炬明

[摘要] 目的 建立大鼠骨髓間充質干細胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）體外分離培養方法。方法 采用全骨髓貼壁法分離培養BMSCs，進行形態學觀察，繪制生長曲線，流式細胞儀分析細胞周期、檢測細胞表面抗原標志物，并進行成脂、成骨分化誘導。 結果 獲取的BMSCs形態呈均一成纖維細胞樣，并呈集落樣生長。生長曲線呈S形，細胞周期顯示86.02% P3代細胞為G0/G1期，保持活躍的擴增能力。BMSCs 高表達CD44、CD90、低表達CD34、CD45。成脂誘導21 d后，可見細胞的胞漿內出現大量紅染脂滴。成骨誘導21 d后，可見大量橘紅色礦化結節形成。結論 全骨髓貼壁培養法可成功有效地分離培養BMSCs。

[關鍵詞] 骨髓間充質干細胞；全骨髓貼壁法；鑒定

[中圖分類號] R329.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2014）01-0007-04

BMSCs具有高度增殖的能力、體外基因轉移效率高以及多向分化潛能等優點[1-2]，使其成為組織工程、細胞替代治療等領域的首選種子細胞。但是骨髓中的間充質干細胞含量極低[3]，且其含量隨年齡增長而逐漸減少[4]，需經體外分離、純化、擴增為純度高、活力強、生物特性均一的間充質干細胞才能滿足組織工程需求。實驗旨在建立一套簡便有效的BMSCs原代培養方法，為后續實驗做好準備。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級雄性SD大鼠6只，4周齡，體質量100 g，由浙江省實驗動物中心提供。實驗過程中對動物的處置符合2006年科技部《關于善待實驗動物的指導性意見》的規定。

1.2 時間及地點

于2013年1～6月在中國人民解放軍第一一七醫院干細胞治療中心完成。

1.3 實驗主要試劑

低糖DMEM培養……