正交試驗法優選除濕口服液制備工藝研究

蔣秀娟 高希梅

1.山東省青州市人民醫院藥劑科，山東青州 262500;2.北京同仁堂，北京 100010

除濕口服液是我院經驗處方，為我院皮膚科根據臨床經驗用藥組方而成，臨床使用多年，療效顯著，副作用小，安全可靠。該制劑處方由苦參、車前草、艾葉等組成；功能清熱除濕，消腫止癢；主治皮炎、濕疹、瘙癢癥等。為了對該處方進行進一步開發，并對其藥效學及臨床療效進行研究，首先對該制劑的提取工藝進行了研究。

苦參為本方君藥，其主要成分為苦參堿。藥理研究表明，苦參堿具有抗炎、止癢、調節免疫功能[1-2]；因此用于治療濕疹等皮膚疾病的市售藥品及醫院制劑多將苦參堿作為質量控制的重要指標[3-4]。本制劑為口服液，故本實驗以苦參堿含量和干浸膏得率為指標綜合評分，應用L9(34)正交試驗表進行試驗。選定加水量、煎煮時間、煎煮次數、浸泡時間作為考察因素，于2013年6月開始對該制劑的提取制備工藝進行研究，2014年2月完成實驗研究，現總結研究結果如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10AD 高效液相色譜儀；SPD-10A 紫外可見檢測器；SIL-10A 自動進樣器；C-R7A 數據處理機；Sartorius BP211D型分析天平；TDX 離心機。

苦參堿對照品（批號110805-200306，中國藥品生物制品鑒定所）；所用藥材：苦參、茯苓、車前草等藥材均購自本院中藥房。

甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 試驗方法與結果

2.1 正交試驗設計

根據預試驗，考慮劑型因素，選定加水量、煎煮時間、煎煮次數、浸泡時間作為考察因素。以苦參堿含量和干浸膏得率為指標綜合評分，應用L9(34)正交試驗表進行試驗。重復試驗1 次以計算誤差。因素水平安排見表1。

表1 水提工藝因素水平表

2.2 干浸膏得率的測定

精密稱取藥材9 份，每份126 g，按L9(34)正交表所列實驗條件煎煮，合并各次水提液，濃縮定容至100 mL。精密移取10 mL，置于已知重量的蒸發皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，減去皿重，計算干浸膏得率，結果見表2。

表2 水提工藝正交試驗結果

2.3 苦參堿的含量測定方法

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-氨水（52：45：3）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：50℃。

2.3.2 線性范圍考察 精密稱取苦參堿對照品10.20 mg，置于10 mL容量瓶中加甲醇定容，配成1.02 mg/mL 的溶液，取此對照品溶液50 μL，稀釋至1mL，即濃度為0.051 mg/mL 的對照品溶液。在上述色譜條件下，分別取對照品溶液10、20、30、40、50 μL 注入液相色譜儀測定峰面積，以進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，得回歸方程：Y=588712.7X-1254.9，r=0.9999。結果表明：苦參堿在0.51～2.55 μg 內，進樣量與峰面積呈現良好的線性關系。

2.3.3 樣品供試液的制備 精密量取定容后的水提液10 mL，精密加入濃氨試液2 mL（調節pH 9～11），搖勻，精密加入二氯甲烷30 mL，振搖提取后3000 r/min 離心5 min，精密吸取下層溶液5 mL，于蒸發皿中水浴揮干溶劑，殘渣加甲醇溶解并轉移至2 mL 容量瓶內定容，搖勻，0.22 μm 濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.3.4 測定方法 精密吸取樣品供試液20 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，代入回歸方程，計算樣品中苦參堿含量，結果見表2，方差分析采用SPSS 10.0 軟件，結果見表3。

表3 方差分析表

2.4 結果

由表2 的R 值和表3 的F 值可以看出，各因素對實驗結果的重要性為C>A>B>D。方差分析結果表明，A、B、C 因素對結果有極顯著意義（P＜0.01），D 因素無意義（P>0.05）。最佳水提工藝應該采用A1B3C3D3，即加8 倍量水，浸泡3 h，煎煮4 次，每次2 h。該工藝與正交試驗中的3 號試驗工藝完全相同，該方案平行2 次的試驗中浸膏得率分別為15.75%、16.73%；苦參堿含量分別為1.263 mg/g、1.104 mg/g，均明顯高于其它方案的得率。從表2 中影響因素D（浸泡時間）的R 值僅為0.401，遠小于其它因素；表3 中因素D 的顯著性分析為0.149，P>0.05，說明浸泡時間對結果無明顯影響，因此為節省工時，最終確定該制劑的提取工藝為藥材不浸泡，直接加8 倍量水，煎煮4 次，每次2 h。

3 討論

①苦參是中醫治療各種皮膚疾患的常用藥材，也是本方君藥。本實驗采用正交設計以苦參堿和浸膏得率為指標，對水提工藝進行優選。實驗結果表明浸泡時間對浸膏得率及苦參堿含量影響不大，分析可能與苦參藥材質地較疏松，以及處方藥材多為葉類、花草等輕質藥材有關[5]。故為生產過程中節約工時及能耗考慮，最終確定藥材不浸泡，直接加8 倍量水，煎煮4 次，每次2 h 的最佳提取方案。并在中試研究中以此方案獲得合格的中試產品。

②分析表2 數據可見，不同提取工藝條件下測得苦參堿含量0.601～1.263 mg/g，處方中的主要藥效指標在優化條件下可以提高1 倍，充分說明對提取工藝篩選的必要性。

③本研究過程中曾試驗以藥材中苦參堿與氧化苦參堿的總量作為定量指標[6]，但是實驗過程中發現因苦參堿與氧化苦參堿在加熱過程中存在互相轉化，以此綜合指標測定結果不穩定，且多數研究文獻表明苦參堿是苦參中抗炎、止癢[1-2]的主要藥效成分，故最終以苦參堿含量作為測定指標。

④處方中另有車前草等藥材也是清熱利濕的主要組分，但是因條件所限在本研究中未能對車前草的指標性成分進行測定，在質量標準的建立中應考慮對該藥材進行鑒別或定量分析。

[1]徐國紅.苦參治療濕疹的藥理作用研究[J].長春中醫藥大學學報,2010，26(5)：781.

[2]孫創斌，胡晉紅，朱全剛，等.苦參堿對皮膚角質形成細胞IL217R、p2p38MAPK 和炎癥因子的影響[J].中國藥學雜志,2010,45(7)：506-509.

[3]趙冰,鄭家富,彭秀中,等.HPLC 測定膚康搽劑中苦參堿含量[J].中國衛生產業,2013（31）：88-90.

[4]于東平.苦參洗劑的質量控制[J].中國衛生產業，2011（33）：51.

[5]江蘇新醫學院.中藥大辭典上冊[M].上海：上海科學技術出版社，1986：1283-1285.

[6]王春燕.中藥湯劑的制備及服用方法的體會[J].光明中醫，2013，28（6）：1278-1279.

[7]王麗聰,李松.HPLC 測定苦參配方顆粒中苦參堿與氧化苦參堿含量[J].鹽城工學院學報(自然科學版)，2013，26（1）：48-51.

[8]潘廣洲,李峰,李鍵,等.苦參堿和氧化苦參堿的轉化對苦參提取工藝的影響[J].現代中藥研究與實踐，2008，22(2)：52-54.

[9]江蘇新醫學院.中藥大辭典上冊[M].上海：上海科學技術出版社，1986：403-404.

[10]梅全喜.艾葉的藥理作用研究概況[J].貴州農業科學，1996，27(5)：311-314.