溶菌酶蛋白在聚合物防污膜表面的吸附

胡立梅 藺存國 王 利 苑世領

(1山東大學膠體與界面化學教育部重點實驗室,濟南250100;2海洋腐蝕與防護重點實驗室,中國船舶重工集團公司第七二五研究所,山東青島266101)

1 引言

海洋生物污損會給船舶和海洋設施帶來極大的危害:①增加船體自重和船體摩擦阻力,從而增加燃油消耗,增加溫室氣體排放;②影響船舶的使用性能,如阻塞管道、造成材料結構腐蝕損壞;③增加維護修理費用,帶來巨大經濟損失.因此,采取有效措施防止污損生物的附著極為重要.其中,涂裝防污涂料1-3是最為經濟有效的方法.目前廣泛使用的防污涂料為以氧化亞銅、硫氰酸亞銅為防污劑的無錫自拋光防污涂料,由于銅元素在港口的累積作用給海洋環境造成嚴重影響,許多國家已禁止或限制銅類防污劑的使用.因此開展新型對環境友好的防污材料研究勢在必行.

依據固體表面與蛋白質之間的相互作用,實驗發現親水性防污涂層材料對抗蛋白質吸附的能力要優于疏水性防污材料,4,5歸因于蛋白質內部多為疏水性殘基,因此疏水性防污膜對蛋白質具有更大的親和性;同時,親水性材料表面穩定的水化層對蛋白質的吸附過程也具有能障作用,6-9因此親水涂層對蛋白質吸附也具有防污性能.親水或疏水材料表面不同的結構和化學性質,會影響周圍水分子的聚集行為和蛋白質的吸附,引起抗污損性能的差異,其防污機理也有所不同.

聚乙二醇(PEG)是一種非枝化水溶性高分子材料,與許多物質有很好的相容性,具有良好的穩定性和潤滑性,是目前應用最為廣泛、抗污染效果最好的防污材料之一.10,11因而,PEG常被作為“標尺”,衡量其他材料的抗污染性能.在新興眾多環保型海洋防污新材料中,以聚二甲基硅氧烷(PDMS)為代表的有機硅聚合物涂層由于具有較低的表面能、不粘性和在水中的穩定性,在海洋船舶中的應用越來越廣泛.12,13在眾多實驗對比研究中,多把PEG聚合物膜歸為親水防污涂層,而把PDMS聚合物膜當作疏水涂層,通過對比兩種防污材料的結構差異和防污機理,將有助于理解不同結構類型防污涂層對蛋白質吸附的影響.

實驗研究推測,材料的防污能力與其表面結合的水化層密切相關,但是如何從微觀層次上理解防污材料表面水化層所起的作用,傳統實驗研究還有一定的難度,其中蛋白質吸附的微觀過程一直是實驗研究的難點,也是蛋白質構象轉換研究的制約因素.利用分子動力學模擬14在分子層次上研究蛋白質與材料表面的相互作用,闡釋相關吸附機理,是對宏觀實驗的一項有益補充,對理解防污材料表面的水化層結構,以及材料表面微觀結構與宏觀防污能力之間的關系有不可替代的作用.本文通過分子動力學方法研究了溶菌酶蛋白在聚合物防污材料(PEG和PDMS)表面的吸附行為,通過分析蛋白質與兩種聚合物結合位點、蛋白質與吸附膜的作用能,以及表面膜附近水分子的氫鍵和動力學性質等,尋找親水和疏水兩種聚合物膜防污性能差異的原因,從微觀層面上闡述防污材料的防污機理.

2 模型與方法

2.1 模型

模擬中選擇溶菌酶蛋白作為目標分子,研究蛋白質在防污涂層上的吸附.含有129個氨基酸的溶菌酶蛋白具有優良的二級結構,存在典型的α螺旋和β折疊結構,易于在模擬過程中觀察其結構變化.大量的實驗和理論方法都對溶菌酶分子的結構、空間折疊等進行過討論,15,16對其詳細結構的認識有利于我們討論防污膜與蛋白質之間的相互作用.模擬中溶菌酶蛋白的晶體結構從蛋白質數據庫中獲得(PDB號為7LYZ).選取的兩種聚合物膜包括:(1)利用Materials Studio程序包中的Amorphous Cell模塊構建密度為0.965 g?cm-3,厚度為2 nm的PDMS基底;(2)從Materials Studio原有數據庫中調出PEG晶格,17分別在x,y,z方向上擴展得到與PDMS基底面積相近的PEG基底,并確保蛋白質分子在其表面上有足夠大的接觸面積.溶菌酶分子帶有8個正電荷,因此在模擬體系中加入8個氯離子作為抗衡離子以平衡體系電荷.為充分研究聚合物膜與蛋白質在水中的相互作用,我們在聚合物膜上方分別添加了相同厚度的水層.作為初始構型將溶菌酶分子以相同方向和位置放在距聚合物膜0.7 nm17處的水相中.同時為防止構象重疊,刪除蛋白質和聚合物膜周圍0.2 nm之內的水分子.

2.2 模擬方法

模擬采用GROMOS 45a3聯合原子力場,18選用GROMACS 4.0.5進行分子動力學計算.19,20模擬中采用周期性邊界條件,其中PDMS基底體系的格子大小選為12.8 nm×10 nm×20 nm,PEG基底體系為13 nm×10 nm×20 nm.在模擬過程中,PEG和PDMS基底的底部固定,表面膜部分未加約束條件,使模擬結果更加準確.聚合物膜所用的力場參數及電荷參見表1.模擬中溶劑水模型為單點電荷(SPC)模型,21采用particle-mesh Ewald(PME)方法22處理長程靜電相互作用,非鍵相互作用的截斷半徑選擇1.2 nm.初始構型建立以后,對所有體系首先利用最速下降法進行能量優化以消除可能的構象重疊,隨后進行分子動力學方法計算.模擬中選擇Berendsen熱浴法23控制溫度,采用LINCS方法24約束鍵長.分子動力學模擬階段,固定蛋白質質心在298 K溫度下進行15 ns的分子動力學模擬;然后取消對質心的固定,再進行20 ns的動力學模擬,讓蛋白質在自由狀態下與聚合物膜作用達到平衡,其中模擬步長為2 fs,間隔0.2 ps記錄一次軌跡信息.

表1 模擬中使用的PDMS和PEG的力場參數Table 1 Force field parameters for PDMS and PEG used in this work

3 結果與討論

3.1 溶菌酶蛋白在聚合物膜表面吸附行為

通過整個模擬過程發現隨著模擬時間的變化,溶菌酶蛋白均會吸附到兩種聚合物表面,在吸附過程中溶菌酶蛋白構型及性質有不同程度的變化.從圖1中可以看到蛋白質在兩種聚合物膜表面吸附后的構型形態不同且吸附在膜表面的殘基也不同.在PDMS表面,蛋白質傾向于平鋪吸附,吸附在表面的殘基數相對較多;而在PEG表面,蛋白質是以側立的方式吸附于PEG表面,與膜的接觸面積較小.這是因為蛋白質中極性氨基酸與非極性氨基酸在疏水表面和親水表面相互作用方式不同造成的.疏水基團的空間位阻使得分子取向受到限制,盡管在水溶液中蛋白質具有將疏水基團折疊在分子內部,表面顯露極性和帶電基團相互作用,但總有一些疏水性基團或極性基團的疏水部位暴露在蛋白質表面.這部分疏水基團可與弱疏水基團發生疏水相互作用,被疏水性吸附劑所吸附,因此疏水性表面易于蛋白質分子的吸附.

為了更好地了解兩種表面對蛋白質的吸附特性,統計了吸附在聚合物膜表面上氨基酸殘基(表2).總體上,在PDMS表面上吸附的氨基酸數目要比在PEG表面上的多,同時,在PDMS表面吸附的氨基酸類型中非極性氨基酸所占的比例要比在PEG表面上的高,親水指數要大.通常,親水指數越大,疏水性就越強,親水性就越弱.我們推測這是由于PDMS相對PEG為疏水結構.從表2中可以看出溶菌酶蛋白回轉半徑(Rg)相對于在純水中有變化:在PDMS膜表面有所增大,而在PEG膜表面有所減小.一般而言,蛋白質內部多為疏水殘基而表面多為親水殘基,因此蛋白質傾向于將內部的疏水殘基翻轉從而與PDMS更好地通過疏水相互作用結合,吸附在PDMS表面蛋白質中心結構較稀疏,這是蛋白質內部的殘基翻轉的結果,同時吸附在膜表面的面積較大.而PEG表面吸附的蛋白質殘基的平均親水指數較小,歸因于PEG是親水表面,因而蛋白質更傾向于通過表面的親水殘基與PEG作用.從圖2中可以看出,吸附在PEG膜表面的蛋白質相對緊湊,幾乎沒有翻轉,同時與膜接觸的面積較小.

圖1 溶菌酶蛋白在聚合物(PDMS,PEG)膜表面的初始構型及20 ns動力學模擬之后溶菌酶吸附在聚合物膜表面的形態Fig.1 Initial configurations of lysozyme protein above the non-fouling membranes and snapshots oflysozyme′s adsorption on two polymer(PDMS,PEG)membranes after 20 ns dynamics simulation

表2 20 ns動力學模擬過程中吸附的殘基類型及蛋白質參數的變化Table 2 Adsorbed residue types and changes of protein parameters during 20 ns dynamics simulation

蛋白質分子的均方根偏差(RMSD)可以用來表征其構象變化,RMSD是關于分子在模擬過程中運動幅度的一個衡量,RMSD值越大,分子在模擬過程中的位置變化越劇烈.RMSD的定義為:

圖2 20 ns動力學模擬之后溶菌酶吸附在兩個聚合物膜表面的形態及吸附殘基Fig.2 Snapshots and adsorbed residues oflysozyme′s adsorption on two polymer membranes after 20 ns dynamics simulation

其中mi是原子i的質量,M為所有mi的和,ri(t)是原子i在時間t時的位置.t1為模擬過程中的某一時刻,t2一般為初始時刻,t2=0.在本工作中,溶菌酶分子的初始結構作為RMSD計算的參考結構.我們計算了溶菌酶分子中所有原子的RMSD值以及骨架碳的RMSD值(表2).在PDMS表面與PEG表面上溶菌酶分子的Cα-RMSD值均比溶液中的值有所增加,表明表面誘導了蛋白質分子構象發生變化.其中,在PDMS表面上Cα-RMSD值要比在PEG表面上的值大,說明溶菌酶蛋白在PDMS表面上的構型變化比較大.兩個表面上所有原子的RMSD值要比Cα-RMSD值變化大,這表明溶菌酶分子的側鏈、環區域或序列末端有較大的運動.同時,從RMSD隨模擬時間的變化(圖3)顯示RMSD值的增加主要在3.0 ns前,表明構象的變化主要是在蛋白質以優勢取向吸附在表面后發生的,這與蛋白質吸附的“兩個階段”機理一致.第一個階段(快速吸附階段)主要是短時間尺度的取向變化階段,蛋白質通過平移和轉動運動優化其與表面的相互作用,并以優勢取向吸附在表面.第二個階段(緩慢吸附平衡階段)為長時間尺度的表面誘導蛋白質吸附構象變化階段.

圖3 溶菌酶均方根偏差(RMSD)隨時間的變化Fig.3 Root mean square deviation(RMSD)of lysozyme changes over time

3.2 吸附過程中能量的變化

蛋白質與表面的相互作用力主要是范徳華力和庫侖引力等非鍵作用力.對于非鍵作用能包含三項:排斥項、吸引項、庫侖項.范德華作用的排斥項和吸引項的作用能用Lennard-Jones勢能表示,而庫侖項則用庫侖作用能表示.溶菌酶蛋白質分子中具有疏水的、非極性的部分,可以通過范德華力直接與材料表面相互吸引.而蛋白質分子中帶有8個正電荷,電荷的存在使其與膜表面之間形成庫侖相互作用.從圖4中了解到,不管是范德華作用能還是庫侖作用能,PDMS體系中的能量要比PEG體系中的能量高,基底對蛋白質的強的作用能表明PDMS基底對溶菌酶蛋白有較強的吸附作用.

我們分析了兩個體系在整個過程中的總非鍵相互作用能的變化,從圖4中可以看到,在整個蛋白質與表面的相互作用過程中,溶菌酶蛋白與PDMS膜表面的結合能要比PEG膜表面的結合能要高,這表現為PDMS膜表面對溶菌酶蛋白分子具有更強的相互作用,強的相互作用牽引蛋白質吸附,吸附后構型也更加穩定,不易脫離.同時,研究了范德華相互作用與庫侖相互作用在整個作用能中所占比例,發現在兩個體系中,范德華作用均貢獻了大部分.文獻資料25認為,由于是由取向性不好的范德華作用占主導,蛋白質吸附時的取向性也是隨機的.

3.3 水化層分子

圖4 溶菌酶與聚合物膜中范德華作用能和庫侖作用能所占的比例Fig.4 Decomposed van der waals(VDW)and Coulomb energies between lysozyme and polymer membranes

目前關于蛋白質與膜表面的相互作用中,普遍的觀點26,27均認為其與聚合物表面緊密結合的水化層有關,蛋白質要吸附在聚合物膜表面首先要克服該水化層形成的物理壁壘和能量障礙.我們將距離界面膜原子在0.5 nm范圍內的水分子定義為水化層水分子,通過水化層中水分子的動力學行為可以了解在蛋白質吸附到聚合物表面過程中水化層分子所起作用.

3.3.1 水化層與聚合物膜間的均力勢

為對比兩種聚合物膜對水分子的束縛能力,我們采用均力勢(PMF)來表示聚合物膜表面的水化層的能障作用.模擬中選取界面膜表層原子與水分子之間的徑向分布函數g(r),通過方程E(r)=-kBTlng(r)求得PMF,其中kB是波爾茲曼常數,T是溫度,其變化曲線如圖5所示,表示外部水分子靠近聚合物膜的過程中所要克服的阻礙作用.以PEG體系為例說明如下幾點:(1)勢能曲線極小值點(CM)大約在0.20 nm處,表示聚合物膜和一個水分子直接接觸的距離;(2)勢能曲線上的第二個極小值點大約在0.41 nm處,是溶劑分離極小點(SSM),為第二個溶劑層與水分子接觸的位置,CM和SSM對應的能量數值決定了第一水化層和第二水化層中水分子與聚合物膜結合的穩定性;(3)CM和SSM中間是一個比較高的能壘,也就是溶劑層能障(BS),表示水分子從聚合物膜的第二水化層進入第一水化層,與聚合物膜結合時所需要克服的水化層分子的阻礙作用.隨著水分子與聚合物膜間距離的增大,在無窮遠處PMF趨向于0.

圖5 水分子與聚合物膜間的均力勢(PMFs)Fig.5 Potential of mean forces(PMFs)between water and polymer membranes

聚合物膜和水化層分子之間的結合能ΔE＋=從圖5中可以看出:(1)體系II(PEG基底-蛋白質)中PEG聚合物膜與水分子之間形成了能量上更加穩定的水化層,對應第一水化層中能量數值為1.43 kJ?mol-1,遠小于體系I(PDMS基底-蛋白質)中PDMS聚合物膜與水分子之間的能量數值(7.22 kJ?mol-1);(2)體系II中PEG聚合物膜與水分子之間的結合能ΔE＋(4.47 kJ?mol-1)要小于體系I中PDMS聚合物膜與水分子之間的結合能ΔE＋(9.14 kJ?mol-1),表示水分子PEG聚合物膜之間的結合需要克服的能壘要低,即水分子與PEG之間的結合相對而言要容易一些;但是其解離能ΔE-(1.96 kJ?mol-1)要大于體系I中PDMS聚合物膜與水分子之間的解離能ΔE-(1.36 kJ?mol-1),亦即相對體系I而言,水分子易于與PEG結合,但是當形成穩定的結合對以后,水分子亦不易解離.上述分析表明,相對PDMS膜而言,水分子易于跨過水化層分子的阻礙作用與PEG聚合物膜相結合,但是二者結合后也不易解離,說明PEG聚合物膜與水分子的結合更牢固.

3.3.2 水化層分子的擴散性質

為了更好地研究水化層分子的作用,我們將溶菌酶固定質心且距膜表面1.0 nm進行了20 ns的動力學模擬.計算了模擬過程中最后5 ns聚合物膜表面水化層分子的均方位移(MSD)-時間曲線,如圖6所示.從圖6中可以看出均方位移與時間呈線性關系,說明模擬已經達到平衡.通過公式(2)可求得水化層分子的擴散系數(D):

圖6 兩聚合物膜表面水化層分子的均方位移(MSD)-時間曲線Fig.6 Plots of mean square displacement(MSD)vs time of hydration molecules above two polymer membranes

其中d為維度數,等于3,N為水化層中的水分子數,分別為第i個粒子在時刻t和0時的坐標,即為圖6中直線的斜率.我們分析了聚合物膜表面與水花層分子之間形成的氫鍵數目及氫鍵壽命(表3),通過計算發現單位面積上PEG與水分子形成的氫鍵數約為1.2 nm-2,而PDMS單位表面積上與水分子形成的氫鍵數約為0.36 nm-2.通過與體相水的比較,發現水分子在兩種膜表面的擴散均呈一定程度的降低,這是由于膜與水之間存在較強的相互作用,并且PEG由于和水化層分子間存在更多的氫鍵和靜電相互作用,因而擴散更慢,說明聚合物膜將該水化層分子緊密束縛在表面.

3.3.3 弛豫時間

界面附近水分子的弛豫時間能很好地反映界面與水化層的關系,弛豫時間越長說明界面對水層的束縛能力越強.弛豫時間通常由在一個時間步長內殘留在初始厚度范圍內水的比例來決定,弛豫時間可通過壽命自相關函數Cr(t)計算得到:28-30

其中PRj是一個二值算符(R指水化層分子的厚度),如果第j個水分子在t時刻時仍停留在初始選定的區域內,則PRj(t)=1,否則PRj(t)=0.Nw是所有在初始選定范圍內的水分子數,<>代表系綜平均.

模擬中選取距離聚合物膜0.4 nm水化層內的水分子進行分析,其Cr(t)-t關系圖如圖7所示.為了定量地表示弛豫時間,對壽命自相關函數進行指數擬合,Cr(t)=Arexp(-t/τr),其中Ar表示強度系數,τr為弛豫時間.擬合得到的兩種聚合物膜附近水的弛豫時間見表3.同樣體相水的弛豫時間一并列出.從表3中可以發現,PDMS和PEG表面水的弛豫時間都比體相水長,說明PDMS和PEG均對水分子有束縛作用,限制了水分子逃逸出水化層的運動,而PEG表面的這種限制作用更加明顯.這表明PEG表面結合的水化層分子更加緊密,而蛋白質要穿過這層水化層分子吸附到表面的難度就更大.

表3 兩表面水化層分子的擴散系數(D),弛豫時間(τr)和氫鍵性質Table 3 Diffusion coefficients(D),residence times(τr),and H-bond of hydration molecules of the two surfaces

圖7 水化層分子的壽命自相關函數(Cr(t))Fig.7 Survival time correlation functions(Cr(t))of hydration molecules

3.4 疏水/親水膜的防污機理

蛋白質在聚合物膜表面的吸附是一個膜與蛋白作用,和膜與水化層分子作用之間相互競爭的結果.首先蛋白質和聚合物膜在溶劑環境中會在表面極化出一層緊密結合的水化層,蛋白質要在膜表面吸附首先就要使膜表面和蛋白質表面去溶劑化.該過程需要克服一定的能量勢壘,然后才能在膜與蛋白質間作用力的驅動下,蛋白質逐漸接近膜表面.從文中的分析可以看出,蛋白質與親水性膜和疏水性膜的相互作用方式是不同的.在疏水性膜表面,其對水化層分子的束縛作用較弱,蛋白質吸附到膜表面需要克服的能量較低.同時,由于蛋白質分子內部多為疏水性殘基,在靠近疏水性膜的過程中,蛋白質分子會在膜表面原子的誘導下發生構象翻轉,使內部的疏水殘基暴露(圖8a),與膜表面通過疏水相互作用更緊密的結合,接觸面積較大(圖8b),吸附相對更加穩定;在親水性膜表面,由于膜與水化層分子的結合較為緊密(圖8c),蛋白質要吸附到膜表面需要克服更高的能量,蛋白質分子表面多為親水殘基,所以在于親水性膜表面的相互作用過程中,蛋白質構象翻轉不大,吸附后與表面膜的接觸面積相對較小(圖8d).

圖8 蛋白質在疏水性與親水性聚合物膜的吸附行為示意圖Fig.8 Illustration of protein adsorption on hydrophobic and hydrophilic polymer membranes

4 結論

本文對溶菌酶蛋白在聚二甲基硅氧烷和聚乙二醇表面的動力學行為進行了研究.經過20 ns的動力學模擬,蛋白質在兩種防污膜表面均完成了吸附,并且在更長的時間范圍內也未完成脫附.通過對蛋白質在表面的構像變化、能量變化以及兩個表面的水化層分子的研究表明:(1)對比兩體系中的RMSD及Rg的變化,發現蛋白質在PDMS表面翻轉變形較大,且在PDMS表面上吸附的殘基類型及數目較多.這主要是因為相對PEG表面,PDMS為疏水性聚合物膜,蛋白質在疏水性材料上容易將內部的疏水殘基翻轉出來更好地與疏水表面通過疏水相互作用結合.(2)PDMS表面對蛋白質的吸附能較高,其中范德華作用能占主導作用.較高的作用能牽引蛋白質吸附到材料表面,不宜于蛋白質防污應用.(3)我們從擴散性質和弛豫時間對水化層分子進行分析,結果表明水化層分子在PDMS表面的擴散系數較大,弛豫時間較短,即PDMS表面對水化層分子的束縛作用較弱.這是由于首先PEG相對于PDMS表面有著更豐富的氫鍵受體,單位面積上形成的氫鍵數目及氫鍵的壽命較長;其次,更為重要的是PEG表面形成的氫鍵壽命更長,即其與水分子形成的氫鍵不易斷裂,使得PEG與水分子的結合更加緊密,降低了表面水分子的可運動性,形成了一層結合穩定的水化層,能夠很好地阻礙蛋白質的吸附.綜上所述,本文通過研究蛋白質與PEG和PDMS聚合物膜的相互作用,從微觀角度解釋了PEG表面相對PDMS表面阻抗蛋白質吸附性能更佳的原因.

(1)Ostuni,E.;Chapman,R.G.;Holmlin,R.K.;Takayama,S.;Whitesides,G.M.Langmuir2001,17,5605.doi:10.1021/la010384m

(2)Shen,M.C.;Martinson,L.;Wagner,M.S.;Castner,D.G.;Ratner,B.D.;Horbett,T.A.J.Biomater.Sci.Polym.Ed.2002,13,367.doi:10.1163/156856202320253910

(3) Chambers,L.D.;Stokes,K.R.;Walsh,F.C.;Wood,R.J.Surface and Coatings Technology2006,201(6),364.

(4) Zheng,J.;Li,L.;Chen,S.;Jiang,S.Langmuir2004,20(20),8931.doi:10.1021/la036345n

(5) Cedervall,T.;Lynch,I.;Foy,M.;Bergg?rd,T.;Donnelly,S.C.;Cagney,G.;Dawson,K.A.Angewandte Chemie International Edition2007,46(30),5754.

(6)Aggarwal,P.;Hall,J.B.;McLeland,C.B.;Dobrovolskaia,M.A.;McNeil,S.E.Advanced Drug Delivery Reviews2009,61(6),428.doi:10.1016/j.addr.2009.03.009

(7) Kitano,H.;Sudo,K.;Ichikawa,K.;Ide,M.;Ishihara,K.The Journal of Physical Chemistry B2000,104(47),11425.doi:10.1021/jp000429c

(8)Zheng,H.R.;Wang,X.W.;Lin,X.H.;Geng,Q.;Chen,X.;Dai,W.X.;Wang,X.X.Acta Phys.-Chim.Sin.2012,28,1764.[鄭華榮,王曉韡,林霞暉,耿 強,陳 旬,戴文新,王緒緒.物理化學學報,2012,28,1764.]doi:10.3866/PKU.WHXB201205112

(9) Lüsse,S.;Arnold,K.Macromolecules1996,29(12),4251.doi:10.1021/ma9508616

(10)Wang,Y.Q.;Wang,T.;Su,Y.L.;Peng,F.B.;Wu,H.;Jiang,Z.Y.Langmuir2005,21(25),11856.doi:10.1021/la052052d

(11) Zhao,W.;Su,Y.;Li,C.;Shi,Q.;Ning,X.;Jiang,Z.Journal of Membrane Science2008,318(1),405.

(12) Chen,H.;Yuan,L.;Song,W.;Wu,Z.;Li,D.Progress in Polymer Science2008,33(11),1059.doi:10.1016/j.progpolymsci.2008.07.006

(13) Michalkova,A.;Tulyani,S.;Beals,J.;Leszczynski,J.Journal of Molecular Modeling2012,18(1),239.doi:10.1007/s00894-011-1058-8

(14)Shen,J.W.;Wu,T.;Wang,Q.;Pan,H.H.Biomaterials2008,29(5),513.doi:10.1016/j.biomaterials.2007.10.016

(15) Bai,S.;Li,H.;Zhang,L.Acta Phys.-Chim.Sin.2013,29,849.[白 姝,李 浩,張 麟.物理化學學報,2013,29,849.]doi:10.3866/PKU.WHXB201301182

(16)Fang,Y.Y.;Hu,X.G.;Yu,L.;Li,W.B.;Lin,R.S.Acta Phys.-Chim.Sin.2007,23,84.[方盈盈,胡新根,于 麗,李文兵,林瑞森.物理化學學報,2007,23,84.]doi:10.3866/PKU.WHXB20070117

(17)Panos,M.;Sen,T.Z.;Ahunbay,M.G.Langmuir2012,28(34),12619.doi:10.1021/la301546v

(18) Schuler,L.D.;Daura,X.;Van Gunsteren,W.F.Journal of Computational Chemistry2001,22(11),1205.

(19) Van der Spoel,D.;Lindahl,E.;Hess,B.;Groenhof,G.;Mark,A.E.;Berendsen,H.J.Journal of Computational Chemistry2005,26(16),1701.

(20) Hess,B.;Kutzner,C.;Van der Spoel,D.;Lindahl,E.Journal of Chemical Theory and Computation2008,4(3),435.doi:10.1021/ct700301q

(21) Lindahl,E.;Hess,B.;Van der Spoel,D.Molecular Modeling Annual2001,7(8),306.

(22) Essmann,U.;Perera,L.;Berkowitz,M.L.;Darden,T.;Lee,H.;Pedersen,L.G.The Journal of Chemical Physics1995,103(19),8577.doi:10.1063/1.470117

(23) Berendsen,H.J.;Postma,J.P.M.;van Gunsteren,W.F.;DiNola,A.R.H.J.;Haak,J.R.The Journal of Chemical Physics1984,81(8),3684.doi:10.1063/1.448118

(24) Hess,B.;Bekker,H.;Berendsen,H.J.;Fraaije,J.G.Journal of Computational Chemistry1997,18(12),1463.

(25) Dismer,F.;Hubbuch,J.Journal of Chromatography A2007,1149(2),312.doi:10.1016/j.chroma.2007.03.074

(26) Hower,J.C.;He,Y.;Bernards,M.T.;Jiang,S.The Journal of Chemical Physics2006,125(21),214704.doi:10.1063/1.2397681

(27) Vanderah,D.J.;La,H.;Naff,J.;Silin,V.;Rubinson,K.A.Journal of the American Chemical Society2004,126(42),13639.doi:10.1021/ja047744n

(28) Shao,Q.;He,Y.;White,A.D.;Jiang,S.The Journal of Physical Chemistry B2010,114(49),16625.doi:10.1021/jp107272n

(29) He,Y.;Hower,J.;Chen,S.;Bernards,M.T.;Chang,Y.;Jiang,S.Langmuir2008,24(18),10358.doi:10.1021/la8013046

(30) He,Y.;Chang,Y.;Hower,J.C.;Zheng,J.;Chen,S.;Jiang,S.Physical Chemistry Chemical Physics2008,10(36),5539.doi:10.1039/b807129b