蟬花中脂肪酸成分和含量的分析

衛亞麗，楊茂發，劉愛英

(1.貴州大學農學院昆蟲研究所，貴州貴陽550025;2.貴州民族大學化學與環境科學學院貴州少數民族醫藥資源開發與利用重點實驗室，貴州貴陽550025; 3.貴州大學真菌資源研究所，貴州貴陽550025)

蟬花作為中國傳統中藥材，早已聞名全世界。最早在南北朝雷斅的《雷公炮炙論》就有加工蟬花的記載。宋代唐慎微的《征類本草》、明朝李時珍的《本草綱目》以及其它藥典都有記載。除此之外，蟬花作為一種蟲生真菌，對很多昆蟲特別是鱗翅目的昆蟲有很高致病性［1－5］，蟬棒束孢菌可能成為一種重要的生物防治真菌資源。現代藥理學研究表明，蟬花能增強機體免疫調節功能［6］、滋補強壯，提升機體的營養狀況，解熱鎮痛，改善腎功能［7－8］，抗輻射、抗疲勞、抗應激、抗氧化［9］，抑菌［10－11］，抗腫瘤［12－14］、抗病毒，降血壓、降血糖［15］，抗驚厥［16］等作用。蟬花化學成分的研究主要集中在多糖、核苷類物質［17－18］、蟲草酸、麥角甾醇、多種必需氨基酸［19］及生物堿等多種物質［20］，對其脂肪酸成分及相對含量研究報道較少。本文研究了七種不同提取溶劑對脂肪酸成分和相對含量的影響，建立了氣相色譜－質譜技術檢測蟬花中脂肪酸的方法，為蟬花中脂肪酸的準確定量提供了技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

中藥蟬花 北京同仁堂;正己烷(沸程65～69℃)、石油醚(沸程 60～90℃)、乙醚(沸點34.5℃)、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷 分析純，均購于重慶川東化工有限公司。

SB－100DT型超聲波清洗儀 濟南天華超聲電子儀器有限公司;RE－52AA型旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠;LXJ－Ⅱ型離心機 上海醫用儀器分析廠;BS224S型千分之一電子天平 梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司;7890N－5975 GC－MS 美國安捷倫公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 脂肪酸提取 將中藥蟬花流水漂洗至無泥土，在(50±1)℃的烘箱中烘干至恒重，用粉碎機粉碎，過60目篩，存放在干燥器中備用。稱取蟬花粉末1g，放入50m L塑料離心管中，分別加入30m L提取劑(正己烷、石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮)，超聲波提取60m in。超聲完畢后，提取液靜置30min，4000 r/m in離心15min，取出上清液，50℃濃縮至5m L，取上清液2m L用0.45μm過濾器過濾，收集于2m L進樣瓶中，進行GC－MS定性、定量分析。

1.2.2 GC/MS條件 Agilent毛細管色譜柱 DBFFAP(30m×0.25mm×0.25μm);進樣口溫度230℃;分流比10:1，進樣量1μL;載氣氦氣，色譜柱流量1m L/m in;程序升溫:初始溫度80℃，以20℃/m in升至100℃保留2m in，再以15℃/m in升至180℃保留2m in，最后6℃/m in升至230℃保留20m in;GC－MSD接口溫度220℃。質譜條件:電離源EI，電子能量70eV，離子源溫度230℃，掃描范圍:50～500amu。

1.3 數據處理與分析

通過檢索NIST2008標準譜庫和W ILEY質譜圖庫，對化學成分進行定性鑒定:通過峰面積歸一化法確定各成分的相對百分含量。

2 結果與討論

2.1 不同溶劑提取條件下的總離子流圖

按上述實驗條件，分別對樣品進行GC－MS分析。不同溶劑提取條件下的總離子流圖譜見圖1。在脂肪酸的分析技術中，樣品預處理是整個分析過程中重要的一步，其中樣品預處理的一個主要方法就是使脂肪酸甲酯化。常用的甲酯化方法分為酸催化、堿催化兩大類。每種方法各有其優缺點，且使用范圍各不相同。而且在操作的過程中，由于要經過兩個步驟:一、脂肪酸的提取，二、甲酯化，該步驟可能增加了樣品的損失，盡管有研究表明可以采用微波輔助原位脂肪酸甲酯化方法，但是反應條件難以控制，甲酯化不完全。在利用氣相色譜進行分離時，分離的效果和色譜柱的性質密切相關，為了簡化分析程序，得到較好的分離效果，在本實驗中，采用安捷倫Agilent DB－FFAP強極性柱，不經脂肪酸甲酯化，直接采用程序升溫的方式測定了脂肪酸的組成及相對含量，各脂肪酸的分離效果較好，與預實驗中采用甲酯化后進行分析結果相比，脂肪酸的組成一致，但是脂肪酸的相對含量不一致，這是因為在樣品中本身就含有一些脂肪酸甲酯，而甲酯化后結果是根據脂肪酸甲酯的種類來判斷脂肪酸的種類及相對含量，從而使兩者結果不一致。因此，采用不經甲酯化直接測定的方法更能反映樣品的實際脂肪酸的組成和相對含量。

圖1 不同溶劑提取液脂肪酸成分總離子流圖譜Fig.1 TIC of fatty acid compounds in different solvent extractions from Cordyceps cicadae Shing

2.2 不同溶劑提取條件下脂肪酸的組成及相對含量

本研究采用七種溶劑結合超聲波提取法提取了蟬花中脂肪酸，分析脂肪酸的保留時間、相對含量及種類，發現不同溶劑提取液中脂肪酸種類及相對含量不完全相同，其中共有的脂肪酸成分有十四烷酸(0.53%～0.64%)、十五烷酸(0.07%～0.13%)、十六烷酸(11.94%～13.38%)、棕櫚油酸(1.22%～1.34%)、十八烷酸(3.55%～3.98%)、油酸(63.28%～68.54%)、亞油酸(12.36%～12.89%)。除共有脂肪酸外，每種溶劑能提取出一些特有的脂肪酸，如在乙醚提取液中鑒定出油酸(4.10%);在三氯甲烷提取液中發現(7Z)－十六碳烯酸(0.39%);正己烷提取液中發現反－9－十四碳烯酸(0.05%)等(表1)。這與每一種溶劑的極性及脂肪酸的極性有關。按照相似相溶的原理，溶劑的極性與脂肪酸的極性一致，脂肪酸在此溶液種的溶解度越大。在七種提取溶劑中，正己烷提取的脂肪酸最多，占總量的99.88%，乙酸乙酯提取的不飽和脂肪酸最多占總量的82.54%，丙酮提取的油酸最多占總量的68.44%。因此，在實際操作過程中，應該根據實驗的目的及條件選擇合適的溶劑。蟬花脂肪酸中油酸(63.28%～68.54%)和亞油酸(12.36%～12.89%)含量較高，對軟化血管，降低血脂和預防動脈粥樣硬化等心血管疾病均具有重要作用。

表1 不同溶劑提取條件下脂肪酸的組成及相對含量Table1 Components and relative content of fatty acids in in different solvent extractions from Cordyceps cicadae Shing

3 結論

采用安捷倫Agilent DB－FFAP強極性柱，不經脂肪酸甲酯化，可直接測定脂肪酸的組成及相對含量，各脂肪酸的分離效果較好，此方法更能反映樣品的實際脂肪酸的組成和相對含量。

七種不同溶劑中，共有的脂肪酸成分有十四烷酸(0.53%～0.64%)、十五烷酸(0.07%～0.13%)、十六烷酸(11.94%～13.38%)、棕櫚油酸(1.22%～1.34%)、十八烷酸(3.55%～3.98%)、油酸(63.28%～68.54%)、亞油酸(12.36%～12.89%)。除共有脂肪酸外，每種溶劑能提取出一些特有的脂肪酸，如在乙醚提取液中鑒定出油酸(4.10%);在三氯甲烷提取液中發現(7Z)－十六碳烯酸(0.39%);正己烷提取液中發現反－9－十四碳烯酸(0.05%)等(表1)。在七種提取溶劑中，正己烷提取的脂肪酸最多，占總量的99.88%，乙酸乙酯提取的不飽和脂肪酸最多占總量的82.54%，丙酮提取的油酸最多占總量的68.44%。

蟬花脂肪酸中油酸(63.28%～68.54%)和亞油酸(12.36%～12.89%)含量較高，此兩類脂肪酸屬于不飽和脂肪酸，對軟化血管，降低血脂和預防動脈粥樣硬化等心血管疾病均具有重要作用。

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