高效液相色譜法測定亞油酸甲酯含量

馮文娟，劉圣鵬，徐澤平，馬杰

（黃河三角洲京博化工研究院有限公司，山東濱州256500）

高效液相色譜法測定亞油酸甲酯含量

馮文娟，劉圣鵬，徐澤平，馬杰

（黃河三角洲京博化工研究院有限公司，山東濱州256500）

建立一種高效液相色譜測定亞油酸甲酯含量的方法。采用Intertsil ODS-SP柱，紫外檢測器，檢測波長為243 nm，流動相為甲醇-水（體積比為95∶5）混合液，流速為0.8 mL/min，進樣體積為20 μL，柱溫為30℃。結果可知，亞油酸甲酯質量濃度和峰面積的線性回歸方程是y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9，線性范圍是0～4.16 g/L，平均加樣回收率為99.92%。

高效液相色譜；亞油酸甲酯；紫外檢測器

亞油酸甲酯是動植物油脂與甲醇經酯交換反應制得的脂肪酸甲酯中的一種產物，可作為一種替代化工柴油的可再生的環保能源而廣受關注[1-4]，而目前對其的檢測方法還存在著很多的問題和不足，用于檢測脂肪酸甲酯的方法大多采用氣相色譜法[5-6]，氣相色譜法雖然靈敏度高，但是對于測定相對分子質量較大、沸點較高、不易揮發的物質存在一定的局限性[7-10]。現有的報道中一般都是采用高效液相色譜法測定脂肪酸[11]，采用高效液相色譜法測定脂肪酸甲酯的研究較少。李一哲等[12]采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）-蒸發光散射檢測器（evaporative light-scattering detector，ELSD）和C18色譜柱測定生物柴油中常見的脂肪酸及脂肪酸甲酯含量。劉濤等[13]利用HPLC-蒸發光檢測器及C18反相色譜柱，以乙腈和二氯甲烷的混合液為流動相，測定了混合樣中脂肪酸甘油酯的含量，沒有涉及脂肪酸甲酯的測定。本研究建立了一種HPLC-紫外檢測器（ultraviolet detector，UVD）測定亞油酸甲酯的方法，以甲醇和水的混合液為流動相，毒性較小，同時能夠彌補氣相色譜法的不足，能有效快速地對亞油酸甲酯進行定性定量分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

亞油酸甲酯（C19H34O2，純度≥99%）標準品：長沙晶康新材料科技有限公司；甲醇（色譜級）：天津市科密歐化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

LC-20AT高效液相色譜：日本島津公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準曲線的繪制

準確稱取0.50 g亞油酸甲酯標準品，用甲醇溶解，配制成質量濃度為5.00 g/L的亞油酸甲酯標準液。然后用甲醇稀釋為0、0.83 g/L、1.67 g/L、2.50 g/L、3.33 g/L、4.16 g/L質量濃度梯度的溶液，按照下述色譜條件進行液相色譜分析，以亞油酸甲酯質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線，并計算獲得線性回歸方程。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（體積比為95∶5）混合液，二元高壓梯度洗脫；流速：0.8 mL/min；進樣體積：20 μL；柱溫：30℃；紫外檢測器：SPD-20A；檢測波長：243 nm。

1.3.3 精密度試驗

配制質量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標準液按照上述色譜條件重復測定5次。

1.3.4穩定性試驗

質量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標準液在室溫條件下儲存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按照上述色譜條件測定亞油酸甲酯的含量。

1.3.5 準確性試驗

質量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯標準液分別配制5次，按照上述色譜條件測定亞油酸甲酯的含量。

1.3.6 加樣回收率試驗

準確稱取0.333 0 g亞油酸甲酯標準品于50 mL容量瓶中，以甲醇定容制得樣品溶液。以質量濃度為3.33g/L的亞油酸甲酯標準液為對照品。取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL的樣品溶液分別與2.0 mL、1.5 mL、1.0 mL、0.5 mL、0 mL的亞油酸甲酯標準液混合均勻，243 nm處測定峰面積，計算亞油酸甲酯的質量濃度。

2 結果與分析

2.1 亞油酸甲酯標準曲線

分別以亞油酸甲酯質量濃度（x）和峰面積（y）為橫坐標和縱坐標繪制標準曲線（如圖1所示），得到的回歸方程為y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9。結果表明，在亞油酸甲酯質量濃度為0～4.16 g/L范圍內，亞油酸甲酯質量濃度與峰面積有良好的線性關系，亞油酸甲酯標準液的色譜圖見圖2。

圖1 亞油酸甲酯的標準曲線Fig.1 Standard curve of methyl linoleate

圖2 亞油酸甲酯標準液的色譜圖Fig.2 Chromatogram of standard methyl linoleate

2.2 精密度試驗

對質量濃度為3.33g/L的亞油酸甲酯溶液按色譜條件測定亞油酸甲酯的含量，由以下公式計算標準偏差（standard deviation，SD）和相對標準偏差（relative standard deviation，RSD），結果見表1。

式中：Sqr代表平方根，∑代表總和，xi代表每個亞油酸甲酯峰面積值，xˉ代表x的算術平均值，n代表測定次數。

表1 精密度試驗結果Table 1 Results of precision experiment

表1結果表明，溶液重復測定5次得到的結果的RSD值為0.17%，說明了此測定方法的精密度較高。

2.3 穩定性試驗

質量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯在室溫條件下儲存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按上述色譜條件測定其含量。表2結果表明，5組樣之間的RSD值為0.23%，說明亞油酸甲酯在室溫條件下5 h內基本穩定。

表2 穩定性試驗結果Table 2 Results of stability experiment

2.4 準確性試驗

表3 準確性試驗結果Table 3 Results of repeated experiment

分別配制5組質量濃度為3.33 g/L的亞油酸甲酯溶液，并按照上述色譜條件測定其含量。表3結果表明，5組樣品之間的RSD值＜1%，說明了此測定方法準確性較高。

2.5 平均加樣回收率試驗

表4 平均加樣回收率結果Table 4 Results of average adding recovery experiment

測定不同濃度的亞油酸甲酯樣品的平均加樣回收率，測定結果見表4。5個樣品的平均加樣回收率為99.92%，RSD值為0.49%，說明了此測定方法準確度高。

3 結論

建立了一種高效液相色譜測定亞油酸甲酯含量的方法，該方法能夠檢測相對分子質量較大、沸點較高、不易揮發的物質，不需要昂貴的質譜儀及內標物，分析迅速，彌補了氣相色譜的不足[14-15]。以甲醇和水的混合液為流動相，對人體的毒性較小。通過方法學驗證結果表明，高效液相色譜法測定亞油酸甲酯含量的方法精密度和準確性較高，其RSD都在1%以內。加樣回收率良好，為99.92%，RSD為0.49%，說明了HPLC-UVD法能有效快速地對亞油酸甲酯進行定性定量分析。

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Determination of methyl linoleate by HPLC

FENG Wenjuan,LIU Shengpeng,XU Zeping,MA Jie
(Chambroad Chemical Industry Research Institute Co.,Ltd.,Binzhou 256500,China)

A method for methyl linoleate determination was established by HPLC.The chromatographic condition was as follows:Inertsil ODS-SP column,ultraviolet detection wavelength 243 nm,mixed solution of methanol and water(volume ratio 95∶5)as mobile phase,flow rate 0.8 ml/min,injection volume 20 μl,column temperature 30℃.Results showed that the regression equation of methyl linoleate content wasy=（2E+06）x-43 628, R2=0.999 9.The liner range was 0-4.16 g/L and the average recovery was 99.92%.

HPLC;methyl linoleate;ultraviolet detector

O657.7

A

0254-5071（2014）11-0155-03

10.11882/j.issn.0254-5071.2014.11.036

2014-10-16

山東省科技發展計劃項目（2013YD21001）

馮文娟（1986-），女，助理工程師，碩士，研究方向為食品工程。