黃酮類化合物的含量測定方法

吳婷妮

安徽醫科大學藥學院，安徽合肥 230032

黃酮類化合物是廣泛分布于自然界中的一類化合物，生活中常見的食品茶葉、豆類、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黃酮類化合物。黃酮類化合物具有C6-C3-C6 的基本骨架，是許多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。該文綜述了近年黃酮類化合物分析中主要應用的方法，為廣大同行提供一些參考。

1 分光光度法

分光光度法主要適用于總黃酮的測定，具有操作簡便、快速、準確度及精密度較好的特點。目前黃酮類化合物測定法有直接測定法和比色法。直接測定法直接以黃酮類化合物為對照物測定樣品中的此成分的含量，比色法是將化合物加入顯色劑后測定吸光度再進行換算測定，其中常用的顯色劑有Al (NO3)3和AlCl3。直接測定法和比色法的選擇要綜合考慮，樣品中成分是否會與顯色劑發生沉淀反應、 樣品成分的復雜性等都會影響結果的準確性，在NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 體系中, 堿性條件經常會影響結果的準確性和穩定性, 只有物質中含有鄰二酚羥基, 并且鄰二酚羥基的鄰位沒有取代時, Al(NO3)3比色法才在510 nm 左右有最大吸收[1]。

王東升等[2]、李春紅等[3]采用紫外分光光度法分別測定了淫羊藿、黃芪中總黃酮的含量。呂凜等[4]比較了直接測定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色法測定桔皮中總黃酮含量，結果表明顯色法檢測，會出現渾濁現象；直接法檢測，操作簡便，結果準確，重現性好。時維靜等[5]研究直接測定法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法測定中藥復方總黃酮含量，結果表明NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 法測定中藥復方總黃酮含量穩定可靠，快速準確。徐靈源等[6]采用AlCl3-HAc-NaAc(pH 5.5)為顯色劑，建立一種青天葵藥材中總黃酮檢測的方法，并考察14 批青天葵藥材中總黃酮的含量。

2 薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是一種進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法，薄層色譜法主要用于黃酮類化合物的定性和半定量分析，可同時測定多個樣品，跟高效液相色譜法相比，薄層色譜法儀器設備簡單，操作方便，但由于其影響因素較多，靈敏度和精確度方面不如高效液相色譜法。

陳乃東等[7]采用薄層色譜法檢測酸水解過的蕨菜黃酮苷元的組成，發現其主要成分為山奈酚。徐穎等[8]建立一種薄層色譜分離鑒定、定量異黃酮的方法，結果表明，薄層色譜法具有操作簡便，取樣量少，檢出靈敏度高等優點。劉德勝等[9]采用薄層色譜法定性檢測了落地生根藥材水解液中的槲皮素和山奈酚，實驗同時建立了紫外分光光度法測定水解液的總黃酮含量和高效液相色譜法測定水解液中槲皮素、山奈酚的含量，這些定性定量方法簡便、靈敏，可作為落地生根藥材的質量控制方法。

3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法適用于極性大、沸點高、分子量大、熱穩定性差的化合物分析，是黃酮類化合物分離檢測中使用非常廣泛的一種方法，具有效率高、靈敏度高、分離效率高等優點。高效液相色譜法采用液體為流動相，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。黃酮類化合物的分離中常用的色譜柱是C18 柱，對復雜化合物的分析經常采用梯度洗脫系統，實現高效率的分離，紫外檢測器、 二極管陣列檢測器是黃酮類化合物分析中最常用的檢測器，具有靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫的特點。

Yang 等[10]采用C18 柱、梯度洗脫系統同時分離16 個酚類化合物，并將建立的分析方法成功應用于35 批魚腥草樣品。張群林等[11]采用ODS 色譜柱，高效液相色譜-二極管陣列檢測器法同時測定了羅布麻葉中的6 種黃酮類化合物的含量。章弘揚等[12]采用高效液相色譜-質譜法 鑒定了山楂中的綠原酸、原花青素B2、表兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷，采用反相色譜-二極管陣列檢測法同時定量測定了其含量。楊必成等[13]采用C18 色譜柱高效液相色譜-紫外分光光度法測定了油菜花粉的滲濾液中的槲皮素、山奈酚、異鼠李素的含量，為油菜花粉原料及其提取物的質量控制和評價提供了理論和數據支持。

4 毛細管電泳法（CE）

毛細管電泳是以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力的微分離分析技術，有多種分離模式，毛細管區帶電泳，膠束毛細管電泳，毛細管等速電泳，毛細管凝膠電泳等。黃酮類化合物分離中經常應用毛細管區帶電泳和膠束毛細管電泳。分離中常用的緩沖溶液是硼砂，常用的緩沖體系有硼砂-氫氧化鈉，硼砂-磷酸二氫鈉，硼砂-硼酸體系，少量報道也采用過中性磷酸鹽的體系。在堿性條件下，黃酮類化合物中的順式二羥基與硼酸形成帶負電荷的硼酸類配合物，在電場作用下發生移動。

海平等[14]采用0.25 mol/L 硼砂30%乙腈緩沖溶液分離了三種黃酮，用建立的方法比較了不同產地多葉棘豆中的此類化合物的含量。吳婷妮等[15]對電泳緩沖液的pH、濃度等條件進行優化，建立測定野菊花中的9 種黃酮類化合物的方法。Shi 等[16]采用膠束毛細管電泳法測定了枳殼槐花中染料木苷、 染料木素、 山奈酚、槲皮素和蘆丁的含量。葉靜等[17]采用膠束毛細管電泳法測定豆粕及發酵豆粕中大豆異黃酮含量,緩沖液是15 mmol/L 十二烷基硫酸鈉、5%甲醇的10 mmol/L 硼砂溶液( pH 9.4)。周逸芝等[18]采用膠束毛細管電泳測定龍柴方及其組方藥材黃芩中4 種黃酮的含量，緩沖液是40 mmol/L 磷酸氫二鈉-15 mmol/L 硼砂-40 mmol/L十二烷基硫酸鈉-15%乙腈-7.5%丙醇(pH 8.6)。

毛細管電泳法和高效液相色譜法均適用于單體黃酮類成分的分析，與高效液相色譜法相比，毛細管電泳法具有樣品預處理簡單、分析更快速的優點，但在分析的準確度和靈敏度方便較高效液相色譜法稍差，也是目前黃酮類化合物分析中應用非常廣泛的一種方法。

5 其他方法

陳墨等[19]采用差分脈沖伏安法同時測定а-山竹黃酮和γ-山竹黃酮，研究了pH 和靜置時間等因素對黃酮分離的影響。鄒節明等[20]研究了舒血寧片中總黃酮的共振散射光譜分析方法，結果表明該方法簡便靈敏。孫仕萍等[21]采用單掃示波極譜法測定了保健食品中總黃酮的含量。黃倩倩等[22]采用近紅外漫反射光譜法測定黃芩中總黃酮及黃芩苷的含量，胡鋼亮等[23]采用近紅外漫反射光譜法直接測定銀杏葉提取物粉末中總黃酮的含量。

6 結語

黃酮類化合物是藥理活性非常廣泛的一類化合物，人體的黃酮類化合物均從食物獲得，研究食物和人體液中黃酮類化合物的含量測定方法非常重要，如何快速、準確、簡單、經濟的測定黃酮類化合物的含量成為分析工作者的重要任務。鑒于目前的發展現狀，改善儀器的檢測靈敏度和準確性方面值得更進一步的研究。

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