口腔念珠菌病患者口內菌株檢出分布及藥敏實驗臨床研究

陳水堂

（黃梅縣人民醫(yī)院 口腔科，湖北 黃岡 435500）

口腔念珠菌病俗稱“鵝口瘡”，為口腔黏膜發(fā)生的真菌感染，在免疫功能低下人群中高發(fā)，近年隨廣譜抗生素、免疫抑制劑及皮質激素類藥物的廣泛應用，真菌感染率不斷上升，口腔念珠菌病感染真菌菌株種類臨床報導也不斷增多，耐藥率出現(xiàn)上升［1］，提升了相關治療的困難性，本研究采取回顧性分析，研討了96例口腔念珠菌病CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)及藥敏實驗結果，旨在更好的指導臨床的合理用藥。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

96例臨床確診口腔念珠病患者均來自我院2011年1月至2013年1月口腔科門診病人，鏡檢及培養(yǎng)均支持真菌感染，其中男34例，女性62例，年齡2－60歲，中位數(shù)年齡30歲，臨床癥狀體征主要表現(xiàn)為：口腔黏膜下白色假膜、基底呈現(xiàn)紅色潰瘍、糜爛，研究對象于餐后2h無菌PBS緩沖液（p H7.2）漱口1分鐘，含漱液收集于無菌容器內，分別鏡檢及培養(yǎng)。

1.2 培養(yǎng)、鑒定

含漱液標本離心50μl接種于CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)（由成都培洋生物提供），37℃培養(yǎng)48 h，根據(jù)CHROMagar培養(yǎng)基菌落形態(tài)及顏色進行鑒定，翠綠色菌落為白色念珠菌（直徑2 mm左右），粉紅色、邊緣呈現(xiàn)毛刺狀為克柔念珠菌（直徑4－5 mm左右），紫紅色為光滑念珠菌（直徑2 mm左右），藍灰色為熱帶念珠菌（直徑1.5 mm左右）。

1.3 藥敏試驗

藥敏試驗采用紙片擴散法（kindy－Bauer，KB），接種環(huán)取鑒定后菌株轉種于沙堡弱培養(yǎng)基（由杭州天和生物提供），取純菌落（＞1 mm）5個溶于5 ml無菌生理鹽水混勻，血細胞計數(shù)板調整菌懸液濃度至（1－5）×106cfu／ml，無菌棉拭子涂布RPMI－I640培養(yǎng)基（美國Hycolone公司提供），干燥后放置伊曲康唑（ICZ）、氟康唑（FCZ）藥敏紙片各一，均為杭州民生藥業(yè)提供，伊曲康唑劑量8μg，氟康唑劑量15μg，35℃培養(yǎng)72 h，根據(jù)藥敏紙片說明判讀藥敏結果：抑菌圈：伊曲康唑19 mm以上敏感（相應 MIC≤0.125值），15－18劑量依賴性敏感（相應 MIC值0.25－0.5），14 mm以下耐藥（相應 MIC值≥1）；氟康唑19 mm以上敏感（相應 MIC值≤8），15－18劑量依賴性敏感（相應 MIC值16－32），14 mm以下耐藥（相應MIC值≥64），以24 h結果為該藥物判定時間，質控菌株ATCC22019（標準菌種購自中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所）。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，構成比、率比較采用卡方檢驗，以P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 菌群分布

96例念珠病共分離114株念珠菌，其中78例患者分離單一菌株（75例分離白色念珠菌，3例分離非白色念珠菌）；18例患者分離出兩種不同菌種菌株，念珠菌菌種分布詳見表1，其中以白色念珠菌分離71株占62.3%，與其他菌種比較經(jīng)卡方檢驗分析均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），熱帶念珠菌分離15株占13.2%，光滑念珠菌分離12株占10.5%，克柔念珠菌分離9株占7.9%，其他念珠菌分離7株占6.1%。

表1 念珠菌分離株菌群分布（n，%）

2.2 真菌藥敏試驗

伊曲康唑對白色念珠菌的敏感率49.3%，氟康唑對白色念珠菌的敏感率74.6%，經(jīng)卡方檢驗分析有統(tǒng)計學差異（χ2＝57.58，P＜0.05），兩藥物對其他菌種的敏感率詳見表2。

表2 真菌藥敏試驗（n，%）

3 討論

念珠菌為口腔的正常菌群屬于條件致病菌，其對口腔黏膜上皮有較強的粘附性，中性粒細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞等均對念珠菌有殺滅作用，念珠菌對機體的毒性取決于代謝產(chǎn)物［2］，口腔念珠菌多屬內源性感染，機體抵抗力下降、口腔菌群失衡均可引起急性、亞急性及慢性感染，易復發(fā)，部分患者可發(fā)生敗血癥，尤其對于免疫功能缺陷患者常為致死的重要病因。臨床廣譜抗生素、免疫抑制劑及激素類藥物的不合理使用被認為是感染發(fā)生的重要因素之一［3］。

口腔念珠菌感染菌株以白色念珠菌為主，在我們研究中白色念珠菌62.3%，與國內一些臨床研究數(shù)據(jù)接近［4－6］，白色念珠菌可分泌磷脂酶、蛋白酶，對口腔粘膜上皮的蛋白、膠原具有較強的水解作用，可導致上皮細胞破壞、溶解，粘膜充血、糜爛。目前研究人員發(fā)現(xiàn)［7］，白色念珠菌產(chǎn)生的N－亞甲基苯甲基甲胺具強烈的致癌作用。熱帶念珠菌、光滑念珠菌及克柔念珠菌均有檢出，3種念珠菌種感染構成比無統(tǒng)計學差異，均低于白色念珠菌。非白色念珠菌感染在臨床研究報道逐漸增多，本研究中非白色念珠菌多以白色念珠菌混合感染居多，僅3例非白色念珠菌發(fā)生單獨感染，其中臨床報道［8］，非白色念珠菌中以熱帶念珠菌毒力最強，臨床應重視熱帶念珠菌引起的感染。CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基對多菌種的混合感染的鑒別有一定的技術優(yōu)勢，相對于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基對雜菌的抑制作用較強，目前廣泛的應用于臨床念珠菌的鑒別［9］。

念珠菌的耐藥現(xiàn)象逐漸引起臨床的關注，伊曲康唑與氟康唑為臨床常見的三唑類抗真菌藥物，伊曲康唑作用機制為高選擇性地抑制真菌細胞的細胞色素酶，氟康唑作用機制為抑制真菌細胞膜必要成分麥角甾醇合成酶，使麥角甾醇合成受阻，破壞真菌細胞壁的完整性，本研究中氟康唑對白色念珠菌的敏感性優(yōu)于伊曲康唑，可能與臨床伊曲康唑應用較多有關，長期用藥過程中產(chǎn)生的劑量依賴性敏感現(xiàn)象增多，長期大劑量的伊曲康唑治療可引起肝損［10］，臨床應慎重用藥，并注意治療過程的肝功能監(jiān)測，安全用藥。光滑念珠菌與克柔念珠菌對伊曲康唑耐藥較為嚴重，因研究標本較少，仍需繼續(xù)跟蹤觀察，臨床報道［11］：克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥，本研究符合上述觀點，未發(fā)現(xiàn)對氟康唑敏感克柔念珠菌株。

［1］劉 瑩，張曉冬.口腔念珠菌病菌群分布及藥敏試驗和臨床療效分析［J］.中國皮膚性病學雜志，2013，27（4）：364.

［2］劉小平，李建武，樊尚榮，等.臨床常見念珠菌對5種抗真菌藥物的敏感性［J］.中國醫(yī)院感染學雜志，2005，15（6）：671.

［3］吳 穎，劉 偉，萬 哲，等.氟康唑耐藥的白念珠菌對唑類藥物交叉耐藥實驗［J］.中國皮膚性病學雜志，2009，23（3）：148.

［4］陳方淳，林 梅.口腔念珠菌病患者口內菌株的檢出和藥敏性觀察［J］.華西口腔醫(yī)學雜志，2007，25（1）：37.

［5］周曾同，趙 民，朱彩蓮，等.68株臨床分離口腔念珠菌對4種抗真菌藥的體外藥敏實驗結果分析［J］.臨床口腔醫(yī)學雜志，2006，22（3）：178.

［6］張 程，郝 飛，鐘白玉，等.118株口腔致病念珠菌病原學特征及藥敏結果分析［J］.中國真菌學雜志，2009，4（2）：87.

［7］李景媛，孫紅英，章強強.萎縮糜爛型口腔扁平苔蘚患者不同基因型白色念珠菌的藥敏研究［J］.上?？谇会t(yī)學，2011，20（3）：300.

［8］陳臘梅，徐永豪，于秀娟，等.臨床分離161株念珠菌菌種鑒定及氟康唑藥敏試驗分析［J］.中國真菌學雜志，2008，3（3）：138.

［9］黃曉燕，劉海英，王露霞，等.干擾CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基結果的細菌分析［J］.臨床檢驗雜志，2006，24（2）：145.

［10］張 波.氟康唑與伊曲康唑治療口腔白色念珠菌病療效比較［J］.臨床和實驗醫(yī)學雜志，2007，6（1）：83.

［11］陳晉蓉.口腔念珠菌病的臨床用藥［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2013，7（5）：61.