牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷流行病學調(diào)查及防控

王淑娟，王 華，宋曉暉，孫成友，徐天剛，劉春菊，張永強，趙永剛，劉海生，王志亮

（1.中國動物衛(wèi)生與流行病學中心，山東 青島 266032；2.國家奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系，北京 海淀 100093；3.中國動物疫病預防控制中心，北京 朝陽 100125；4.青島農(nóng)業(yè)大學，山東 青島 266109）

牛病毒性腹瀉/黏膜病（BVD/MD）是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）引起的主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反芻動物及豬的一種重要傳染病。臨床上以發(fā)熱、腹瀉、黏膜糜爛、肺炎、蹄葉炎、流產(chǎn)或產(chǎn)畸型胎兒為主要特征。病毒引起的急性疾病稱為牛病毒性腹瀉，引起的慢性持續(xù)性感染稱為黏膜病。該病于1946年由Olafson[1]等在紐約首次發(fā)現(xiàn)。目前已在世界各國普遍存在，尤其養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達的地區(qū)，廣泛存在于歐美等許多養(yǎng)牛發(fā)達國家，給世界各國的畜牧業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失，每年死于此病感染的牛不少于500萬頭，由于其持續(xù)感染等造成的間接損失，也嚴重阻礙了畜牧業(yè)的發(fā)展。1980年以來，我國從西德、美國、加拿大、新西蘭等10多個國家引進奶牛和種牛，因處理不當造成陸續(xù)在20多個省市自治區(qū)檢出此病[2]。本文從牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷、流行病學調(diào)查、防制措施等幾方面進行了概述，希望能為該病的防控提供一些依據(jù)。

1 牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷

牛病毒性腹瀉/黏膜病根據(jù)臨床表現(xiàn)主要分為以下3種類型。黏膜病型是BVDV感染引起的一種最嚴重的臨床類型，發(fā)病率低，死亡率高。該病的潛伏期為7～9 d，主要特征為腹瀉、脫水、白細胞減少及出現(xiàn)臨床癥狀后幾天發(fā)生死亡。主要侵害犢牛和青年牛，發(fā)病突然，病牛體溫升高，當病程進一步發(fā)展時，鼻鏡干燥，表皮剝落，病后幾天鼻鏡、舌、齒齦、腭、口腔黏膜充血并有潰瘍；腹瀉持續(xù)數(shù)周，糞便呈黃色水樣，瓦灰色，惡臭，內(nèi)含大量黏液和氣泡，惡臭，病牛多因脫水死亡；腹瀉型表現(xiàn)為間歇性腹瀉，進行性消瘦，可發(fā)生跛行、球節(jié)部皮膚發(fā)紅腫脹，腹瀉初呈水樣，后內(nèi)含血液和黏液，并常見排出成片的腸黏膜；胎兒感染型表現(xiàn)為懷孕母牛感染后，發(fā)生流產(chǎn)、死胎、木乃伊或胎兒發(fā)生小腦發(fā)育不全、眼睛失明等先天性缺陷。如果病牛出現(xiàn)以上某種臨床癥狀，剖檢之后食道黏膜糜爛。鼻鏡、鼻孔、齒齦、上顎、舌面兩側(cè)及頰黏膜有糜爛及淺潰瘍，食道黏膜、胃黏膜、十二指腸黏膜等有出血條紋，空腸和回腸有點狀或斑狀出血，黏膜呈片狀脫落，全身淋巴結(jié)黑灰色，可以做出初步診斷，但確診需作病原鑒定和血清學檢測。

1.1 病原鑒定 可采取病畜的血液、骨髓、脾、淋巴結(jié)及呼吸道、眼、鼻分泌物等進行病毒分離，或通過電鏡檢查、核酸雜交、RT-PCR、基因芯片技術(shù)、免疫組化等方法進行病原鑒定。

1.2 血清學檢測 用于牛病毒性腹瀉／黏膜病診斷的血清學方法有病毒中和試驗、補體結(jié)合試驗、瓊脂擴散試驗、免疫熒光試驗、ELISA等。常用檢測方法有病毒中和試驗和ELISA，與病毒中和試驗相比，ELISA檢測方法極大的縮短了檢測時間，且具有敏感、簡便、易于標準化等優(yōu)點，是進行血清流行病學調(diào)查的良好方法[3-4]。

2 流行病學調(diào)查

牛病毒性腹瀉／黏膜病的危害之一是由突然發(fā)病死亡、腹瀉、繼發(fā)感染、流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎等造成的直接經(jīng)濟損失；危害之二是除導致動物疾病造成的直接損失外，對生物制品的污染造成的損失也不可輕視。因為生物制品常用到動物源的生物活性材料，如牛血清廣泛用于細胞培養(yǎng)，也是病毒性疫苗生產(chǎn)所使用的重要生物材料之一，細胞培養(yǎng)物中污染BVDV，會污染疫苗、干擾素等生物制品[5]；危害之三是持續(xù)性感染，懷孕牛感染BVDV時，如果不發(fā)生流產(chǎn)、死胎等，其胎兒出生后將呈持續(xù)性感染，對BVDV免疫耐受的犢牛體內(nèi)無BVDV抗體，不易被檢出，但一直帶毒，并通過分泌物向體外排毒，成為同群牛和胎兒感染的重要傳染源。奶牛場一旦發(fā)生該病，將很難根除。鑒于此病的危害嚴重，且分布較廣，因此對我國該病的發(fā)生與流行情況進行調(diào)查十分必要。本研究對來自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地的996份血清進行了BVDV抗體檢測，希望這些數(shù)據(jù)能讓奶牛場對該病引起足夠重視。

2.1 材料與方法

2.1.1 血清 被檢牛血清樣品996份，分別采自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地的l1個奶牛場。

2.1.2 ELISA檢測試劑盒 牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒（INGEZIMBVD）為西班牙Ingenasa公司產(chǎn)品

2.1.3 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱、不同量程微量移液器、酶標儀等。

2.1.4 檢測方法 所有的試劑盒組分在使用之前都必須恢復到室溫。然后嚴格按照西班牙Inge?nasa公司的牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒的說明書進行操作。

2.1.5 結(jié)果判定 按試劑盒說明書所示進行結(jié)果判定。

2.2 結(jié)果 通過對來自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地l1個奶牛場的996份血清樣品進行BVDV抗體檢測，共檢出陽性血清688份，檢出的群陽性率為100%，結(jié)果顯示，這些牛場中都不同程度的存在BVDV的感染，最高陽性率達95.2%，最低陽性率為28.8%，平均陽性率為69.1%，抗體陽性率50%以上的牛場占了72.7%。結(jié)果見表1。

3 討論

據(jù)報道[6]，當已感染的牛免疫機制受到抑制時，無論其體內(nèi)是否存在病毒或抗體，都會向外界排毒，病牛康復后長期帶毒就成為長期的潛在傳染源。因此可以認為，在非免疫牛的血清中檢測出BVDV抗體，就可確認牛體中有BVDV的存在，并有排毒的可能性[7-8]。牛病毒性腹瀉/黏膜病在世界范圍內(nèi)廣泛分布，尤其是養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達國家，根據(jù)各國血清學的調(diào)查，牛群中有高度的感染率。本病常年均可發(fā)生，通常發(fā)生于冬末和春季。新疫區(qū)急性病例多，不論放牧牛或舍飼牛，大牛或小牛均可感染發(fā)病，發(fā)病率通常不高，約為5%，但病死率為90%～100%，發(fā)病牛以6-18個月齡居多；老疫區(qū)則急性病例很少，發(fā)病率和病死率很低，而隱性感染率在50%以上。我國從1980年首次報道也存在該病。楊得勝[9]等2006年對福建省9個地區(qū)大型牛場和散養(yǎng)戶牛進行血清學調(diào)查，總陽性率達92.5%，王文[5]等通過對采自新疆10個地區(qū)(牛群）的875份牛血清進行BVDV抗體檢測，結(jié)果顯示，這些地區(qū)牛群中都不同程度的存在BVDV的感染，最高陽性率達100%，最低陽性率為55%，平均陽性率為86.7%。調(diào)查結(jié)果表明，我國不同地區(qū)廣泛存在該病的發(fā)生。近年中國規(guī)模化奶牛和肉牛養(yǎng)殖業(yè)得到發(fā)展，牛病毒性腹瀉/黏膜病應該引起政府和科研工作者的足夠重視。BVDV的宿主不僅局限于牛羊等反芻動物，豬同樣也是BVDV的宿主，所以對該病的控制也是發(fā)展養(yǎng)豬業(yè)所面臨的問題。

表1 牛血清樣品分布及BVDV抗體檢測

4 防制措施

由于BVD廣泛流行，而且致病機理復雜，給該病的防控帶來很大困難，綜合國內(nèi)外的成功經(jīng)驗，可采用檢疫預防、淘汰持續(xù)性感染動物，進行疫苗接種、對癥治療、提高飼養(yǎng)管理水平等綜合防制措施。

4.1 檢疫 嚴禁從病區(qū)購進牛只。對進口牛應嚴格檢疫，學國內(nèi)及省內(nèi)調(diào)運種牛也要嚴格檢疫，防止疫牛引進，特別是防止引進持續(xù)性感染的種牛。國內(nèi)在進行牛只調(diào)運或交易時，要加強檢疫，防止本病的擴大或蔓延。平時做好檢疫工作，一旦查出陽性牛立即處理。在有條件情況下，發(fā)現(xiàn)病牛撲殺、無害化處理是較理想的辦法。

4.2 免疫接種 目前國外已選育出弱毒株并制成疫苗，接種后免疫持續(xù)時間較長，但有接種反應，孕畜不宜使用。應用弱毒疫苗對斷奶前后數(shù)周內(nèi)牛只進行預防接種。對受威脅較大的牛群應每隔3—5年接種1次，育成母牛和種公牛于配種前再接種1次，多數(shù)牛可獲得終生免疫。也有報道[10]，根據(jù)BVDV與豬瘟病毒的交叉免疫性原理，采用豬瘟兔化組織苗預防黏膜病安全有效，并不斷用于生產(chǎn)實踐。若應用滅活疫苗，可在配種前給牛免疫接種2次。

4.3 治療 本病目前尚無有效療法，只能在加強監(jiān)護、飼養(yǎng)以增強牛機體抵抗力的基礎上，進行對癥治療。應用收斂劑和補液療法可縮短恢復期，減少損失。用抗生素和磺胺類藥物，可減少繼發(fā)性細菌感染。有文獻報道[11]，用2%漂白粉消毒圈舍，清潔場地；0.3%高錳酸鉀溶液清洗口腔和鼻黏膜，更換牛鼻繩；鼻黏膜、口腔及舌糜爛處涂擦碘甘油，3～4次/d，連用5 d；緊急免疫接種豬瘟脾淋苗20～30頭份/頭；肌肉注射黃芪多糖10～20mL，控制繼發(fā)感染；對癥狀嚴重者靜脈滴注葡萄糖生理鹽水、ATP、輔酶A、葡萄糖酸鈣、碳酸氫鈉、維生素C、維生素B、頭孢噻呋鈉等，另加清瘟敗毒散煎水灌服，3次／d，連用5 d。經(jīng)采取以上措施后，發(fā)病牛場的病情得到控制，病牛體溫逐漸恢復正常。

4.4 日常管理 提高飼養(yǎng)管理水平，保證奶牛的健康，增強奶牛的體質(zhì)和提高奶牛的抗病力。定期對飼養(yǎng)工具及其環(huán)境消毒。限制外來人員進入牛場，減少應激作用特別是斷奶及轉(zhuǎn)群時。發(fā)病牛群要做好隔離消毒工作，防止疫情擴散。

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