HPLC法測定透骨消痛膠囊中芍藥苷的含量

倪立堅，嚴錦賢，鄭笈，劉獻祥

（1.福建中醫藥大學附屬第二人民醫院，福建福州350003；2.福建中醫藥大學，福建福州350122）

透骨消痛膠囊由腫節風、巴戟天、白芍、川芎4味中藥組成，用于治療骨性關節炎（OA）。白芍能滋陰養血，柔肝止痛，與川芎配合，兼顧活血、養血，起到疏肝、柔肝并舉的效果。芍藥苷是白芍中最重要的成分，本實驗通過建立高效液相色譜法測定透骨消痛膠囊中芍藥苷含量的方法，達到控制其質量的目的。

1 儀器與試劑

1.1 儀器1100型安捷倫高效液相色譜儀；超純水器（Mililpore）；超聲波發生器（奧特寶恩斯儀器有限公司）。

1.2 對照品及試劑芍藥苷對照品（中國藥品生物檢定所提供，批號：110736-200424）；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：Novapak C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）（大連依特利科學儀器有限公司裝填）；流動相：甲醇-0.1%甲酸（25∶75）；檢測波長：230 nm；柱溫：室溫；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL（自動進樣）。理論塔板數：按芍藥苷計算不得低于2 000。在以上試驗條件下試驗，采用DAD檢測器檢測，結果表明樣品和對照品光譜圖完全一致，芍藥苷在波長230 nm處有最大吸收，同時參考文獻資料將檢測波長定為230 nm。見圖1。

圖1 芍藥苷光譜圖

2.2 提取方法的選擇

2.2.1 提取溶劑的考察取樣品0.8 g，分別精密加入甲醇、稀乙醇溶劑25 mL超聲處理30 min，取續濾液進樣，測定2種成分的峰質比。結果表明：用稀乙醇提取的2種成分含量較高。見表1。

表1 不同溶劑提取樣品中2種成分的峰質比

2.2.2 提取方法的選擇取樣品0.8 g，精密加入稀乙醇溶劑25 mL分別超聲處理30、45、60 min，及加熱回流30、45、60 min，取續濾液進樣，測定2種成分的峰質比。結果表明：采取回流提取的方法比超聲提取2種成分效果好，回流30 min能將樣品中的2種成分提取完全。見表2。

綜合以上結果，將提取方法定為用稀乙醇回流30 min。

2.3 溶液制備

2.3.1 對照品溶液制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備按2.2.2項下回流法制得供試品溶液。

2.3.3 陰性樣品溶液制備取除白芍外處方中藥，制作空白樣品，并按供試品溶液的制備制得陰性樣品溶液。

2.4 專屬性試驗分別吸取芍藥苷對照品溶液、透骨消痛膠囊供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按2.1項下色譜條件進行測定。陰性樣品溶液在與對照品相應的保留時間處，無色譜峰出現，見圖2～圖4，表明方中其它各味藥材不干擾芍藥苷的測定。

表2 不同提取方法和提取時間測定樣品中芍藥苷峰質比

圖2 芍藥苷對照品

圖3 供試品色譜圖

圖4 白芍陰性樣品色譜圖

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系考察配制不同濃度的芍藥苷對照品溶液，分別精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，相應的進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：y＝15.945x－60.947，r＝0.9999。結果表明：芍藥苷在5.3952～337.2 μg/mL范圍內與峰面積呈現良好的線性關系。

2.5.2 穩定性試驗取同一供試品溶液室溫下放置，分別于0、3、7、10 h進樣，按2.1項下色譜條件測定芍藥苷峰面積，RSD為1.18%。表明供試品溶液在10 h內基本穩定。

2.5.3 重復性試驗精密稱取樣品6份，照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，進行6次平行測定，測得芍藥苷平均含量為4.87 mg/g，RSD為1.27%。表明該方法重復性良好。

2.5.4 回收率試驗取已知含量的同一批號供試品9份，分成3組，采用加樣回收試驗，每組分別精密加入3個不同濃度的芍藥苷對照品，照供試品溶液制備方法制備9份供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算回收率。結果芍藥苷平均回收率為104.3%，RSD為1.68%。表明該方法具有較好的加樣回收率。

3 討論

透骨消痛膠囊是根據劉獻祥教授用于治療骨性關節炎的臨床經驗方研制而成的中藥制劑［1-2］。具有補腎柔肝、活血祛風的功效，用于肝腎虧虛型OA，療效確切［3］。癥見關節隱隱作痛或腫脹，屈伸不利，行走不便，腰部酸軟，舌淡紅苔薄白，脈沉或細。方由巴戟天、杭白芍、川芎等組成。

透骨消痛膠囊是以“腎主骨”、“肝主筋”等中醫理論為指導，針對OA病機及治療認識基礎上組方。以補腎作為治療OA的根本法則并佐以四要：①補腎要養肝，肝腎同源，肝腎同健痹自殲（白芍養血柔肝以助固本）；②補腎要活血；③補腎要止痛，痛解痹自停（白芍能柔肝止痛）；④補腎要祛邪。此外，川芎和白芍兩者合用，活血、養血兼顧，疏肝、柔肝并舉，使其活血而不傷正，疏肝開郁而不損肝陰。

芍藥苷為白芍中最重要的成分，本文通過建立高效液相色譜法測定透骨消痛膠囊中芍藥苷的含量來衡量白芍藥效的主要物質基礎，并進行科學方法考察，結果較為滿意，可以作為透骨消痛膠囊的質量控制標準。

［1］ 林木南，劉獻祥.透骨消痛方治療膝骨性關節炎30例［J］.福建中醫藥，2005，36（4）：15-16.

［2］ 吳追樂，許惠鳳，李西海，等.透骨消痛膠囊含藥血清對軟骨細胞活性的影響［J］.福建中醫藥大學學報，2012，22（4）：24-27.

［3］ 唐勇，姜杰，孟輝，等.補腎益氣行血方治療膝骨性關節炎44例［J］.時珍國醫國藥，2005，16（9）：902-903.