畬藥十二時辰揮發油的GC-MS分析

黃澤豪，郭家欣，沈賢娟

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350108）

十二時辰來源于毛茛科植物重瓣鐵線蓮Clematis florida var.Plena D.Don.，其根（或帶有少量根莖）在福安民間供藥用。據《福安畬醫畬藥》記載，其性溫，味辛，具有通行十二經脈，祛風除濕，活血止痛，理氣通便，解毒等功效［1］，是頗具地方特色的一味民族藥。據考證其最早是以“鐵線牡丹”之名收載于《滇南本草》［2］，但《滇南本草》中所述之功效與《福安畬醫畬藥》中的功效并不完全相同。近年來，該藥不僅在當地廣泛應用，還高價銷往江浙等省區，常常供不應求。不管是從藥用價值還是從市場前景看，十二時辰都是十分值得關注的一味特色畬藥。然而迄今為止，對于十二時辰或其原植物重瓣鐵線蓮的研究都很少見報道，僅見關于重瓣鐵線蓮組織培養的文獻［3-4］，對于十二時辰的化學成分更是一無所知。木文擬對其揮發油組分進行分析，為保證該藥臨床應用的安全有效提供參考。

1 實驗部分

1.1 樣品及揮發油提取供試藥材采集于福建省福安市賽岐鎮高水筧畬族村，由該村駐村干部劉培欽提供，經作者鑒定為毛茛科植物重瓣鐵線蓮Clematis florida var.Plena D.Don.的根及根莖，憑證標本保存于福建中醫藥大學中藥鑒定室。干燥的藥材粉碎得粗粉450 g，室溫下以95%乙醇反復冷浸及超聲提取數次后，減壓回收溶劑，得到浸膏，浸膏懸浮于蒸餾水中，水蒸氣蒸餾，用《中華人民共和國藥典》（2010版）規定的揮發油提取方法提取5 h，以無水硫酸鈉干燥得到揮發油部分。

1.2 儀器及分析條件6890N GC/5975 MS氣相色譜-質譜聯用儀（美國安捷倫公司）；色譜柱為安捷倫DB-1石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進樣口溫度250℃，接口溫度230℃；載氣為氮氣，流速為0.9 mL/min；柱壓為80 kPa，分流比40∶1，進樣量1.0 μL；升溫程序及柱溫如下：60℃（50℃/min）→115℃（1℃/min）→145℃（10℃/min）→230℃，可達到較好分離效果。質譜條件：電子轟擊源EI；電子能量70 eV；雙燈絲，掃描范圍40～400 m/z，掃描間歇1.0 s。峰面積歸一法計算各化合物的相對含量。

1.3 GC-MS測定取供試品溶液1 μL，以分流方式進樣，測得其氣相色譜-質譜總離子流色譜圖。所得各色譜峰經純度檢查，歸一化法測得各峰的相對含量。利用Class 5000色譜軟件及NIST05.L版質譜譜庫進行檢索，并結合圖譜解析對色譜峰進行了鑒定。

2 結果

提取得到揮發油為白色固態，經GC-MS檢測，其總離子流見圖1；經分析得其揮發油的組分構成見表1。共鑒定出了其中的18種化合物，占總萃取物含量的69.62%。主要成分有棕櫚酸（33.46%）、十六酸乙酯（15.93%）、油酸乙酯（4.09%）、棕櫚酸甲酯（2.20%）、亞油酸乙酯（1.73%）、（Z）-6-十八烯酸（1.47%）、正二十一烷（1.37%）、十五烷酸（1.12%）。

圖1 十二時辰揮發油GC-MS總離子流圖

3 討論

鐵線蓮屬植物的揮發油已有較多的研究，如柱果鐵線蓮、粗齒鐵線蓮、青海粉綠鐵線蓮等。與文獻的研究結果比較，幾種鐵線蓮屬植物的揮發性成分較為相似，如東北鐵線蓮果的揮發油主要成分為二十二烷（9.57%）、十六烷酸（8.79%）、13-二烯酸（5.89%）、酞酸二丁酯（5.89%）、十六酸乙酯（5.50%）等［5］。柱果鐵線蓮揮發油的主要成分是亞油酸（29.69%），其次是棕櫚酸（12.37%）等［6］。青海粉綠鐵線蓮的揮發油主要成分為十六酸乙酯（24.06%）、9，12，15-十八三烯酸乙酯（9.75%）、亞油酸乙酯（5.10%）等［7］。粗齒鐵線蓮揮發油主要成分有棕櫚酸（52.75%）、植醇（13.89%）、9（Z），12（Z）-十八碳二烯酸（10.20%）、亞麻酸（7.39%）等［8］。可見，十二時辰的揮發油組分與同屬植物十分相似，以棕櫚酸等脂肪酸或酯類為主。

根據十二時辰的揮發油組分來看，主含棕櫚酸及棕櫚酸甲酯、乙酯等。據《國外醫藥：植物藥分冊》報道，棕櫚酸甲酯治療胃腸功能失調，這可能是其具有治療反胃嘔吐功效［2］的有關成分。

畬醫認為十二時辰味辛，性溫，具有通經活絡、祛風除濕、活血止痛之功效，用于治療跌打損傷、關節腫痛等［1］。中藥藥理研究表明，類似通經活絡、祛風除濕、活血止痛之功效的“辛味藥”多與所含揮發油或其它脂溶性成分有關，或者其起藥效作用的成分為非揮發性成分。當然，鑒于對十二時辰的研究才剛剛開始，其揮發性成分與其藥效的相關性還有待進一步的研究探討。

表1 十二時辰的揮發油組分

［1］ 鐘隱芳.福安畬醫畬藥［M］.福州：海風出版社，2010：109-110.

［2］ 蘭茂.滇南本草［M］.昆明：云南科學技術出版社，2004：675-676.

［3］ 周瓊，張麗瓊，屈國勝，等.重瓣鐵線蓮組織培養研究［J］.陜西農業科學，2008，54（5）：92-93.

［4］ 張濤，周瓊，張麗瓊，等.重瓣鐵線蓮愈傷組織誘導研究［J］.安徽農業科學，2008，36（22）：9402，9542.

［5］ 楊美林，仲崇林，朱惠京，等.東北鐵線蓮果的揮發油化學成分研究［J］.中草藥，1997，28（4）：204.

［6］ 王祥培，黃婕，靳鳳云，等.柱果鐵線蓮揮發油化學成分分析［J］.安徽農業科學，2008，36（25）：10936-10937.

［7］ 劉正信，高海翔，鄭培清，等.粉綠鐵線蓮揮發油成分分析［J］.天然產物研究與開發，2001，13（5）：25-27.

［8］ 張雯，張紅梅，宋龍.粗齒鐵線蓮揮發油化學成分分析［J］.醫學信息，2011，24（3）：1211-1212.