川東獐牙菜中苦龍苷含量測(cè)定研究＊

(重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶 400050)

川東獐牙菜 Swertia davidi Franch.又名水靈芝，屬龍膽科獐牙菜屬植物，為民間傳統(tǒng)中草藥，主要化學(xué)成分有環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類和酮類，臨床用于治療黃疸型肝炎、痢疾等[1]。徐康平等[2－3]報(bào)道了測(cè)定川東獐牙菜中多種成分含量的高效液相色譜法及其藥材指紋圖譜研究，筆者在此基礎(chǔ)上建立了川東獐牙菜中苦龍苷的含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括Waters 1525型二元泵，Waters 2487型紫外檢測(cè)器;Breeze液相色譜工作站。苦龍苷對(duì)照品(本試驗(yàn)室自制，經(jīng)紫外、紅外、質(zhì)譜和NMR光譜鑒定為苦龍苷，含量為99.75%);川東獐牙菜藥材(購(gòu)于重慶市桐君閣藥材市場(chǎng)，由重慶理工大學(xué)傅善權(quán)副主任技師鑒定為龍膽科獐牙菜屬植物川東獐牙菜 Swertia davidi Franch.);甲醇為色譜純，水為三蒸水，并經(jīng) 0.45 μm濾膜濾過(guò)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[4－5]

色譜柱:Hypersil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(50∶50);檢測(cè)波長(zhǎng):227 nm;流速:1 mL/min;柱溫:室溫。在此色譜條件下，對(duì)照品溶液與供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取一定量苦龍苷對(duì)照品，用甲醇溶解，使其質(zhì)量濃度為0.33 g/L，用 0.45 μm 濾膜濾過(guò)，即得對(duì)照品溶液。稱取粉碎的川東獐牙菜全草1.0 g，加10 mL甲醇，超聲處理30 min，濾過(guò)，收集濾液，濾渣加8 mL甲醇，超聲處理30 min，同法提取2次，收集、合并濾液，吸取濾液1 mL，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 2，4，6，8，10，12 μL，測(cè)定峰面積。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得苦龍苷回歸方程 Y=3×106X－320 473，r=0.999 6(n=6)。結(jié)果表明，苦龍苷進(jìn)樣量在0.33～3.96 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)量峰面積。結(jié)果的 RSD=0.90%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液 10 μL，分別在 0，2，4，8，16，24 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定苦龍苷的峰面積。結(jié)果的 RSD=0.89%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品，按供試品溶液制備方法配制6份溶液，分別進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定苦龍苷含量。結(jié)果的 RSD=1.20%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn):取同一樣品9份，分別按高、中、低3個(gè)量級(jí)加入苦龍苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，進(jìn)樣10 μL測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦龍苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取不同批號(hào)的3批川東獐牙菜藥材，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進(jìn)樣10 μL(n=3)，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為100105，100122，100123的3批藥材中，每100 g藥材分別含苦龍苷 0.324，0.341，0.332 g(n=3)。

3 討論

取對(duì)照品溶液在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果苦龍苷在227 nm波長(zhǎng)處有一特征吸收峰，因此選擇227 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。試驗(yàn)中比較了回流、超聲、冷浸3種提取方法，其中超聲提取法操作方便，短時(shí)間即可獲得滿意效果;還考察了氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇5種溶劑，以甲醇超聲提取效果為好。

[1]全國(guó)中草藥匯編編寫組.全國(guó)中草藥匯編(下冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1975:388.

[2]徐康平，李福雙，譚健兵，等.高效液相色譜法測(cè)定川東獐牙菜中多種成分的含量[J].藥物分析雜志，2005，25(1):14－16.

[3]徐康平，李福雙，譚健兵，等.川東獐牙菜藥材的HPLC指紋圖譜初步研究[J]. 中南藥學(xué)，2004，2(1):10.

[4]紀(jì)蘭菊，保 怡，陳桂琛，等.15種獐牙菜屬植物中主要藥用成分的高效液相色譜測(cè)定[J].西北植物學(xué)報(bào)，2004，24(7):1 298－1 302.

[5]鄭一敏，周 惠，胥秀英，等.HPLC法測(cè)定川東獐牙菜1，8－二羥基－3，7－二甲氧基酮含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17(20):17－18.