分光光度法測定兩種納豆總黃酮的方法研究及含量分析*

李曉艷

（山西省醫藥與生命科學研究院，山西太原030006）

分光光度法測定兩種納豆總黃酮的方法研究及含量分析*

李曉艷**

（山西省醫藥與生命科學研究院，山西太原030006）

采用紫外分光光度法，以蘆丁為標準，對納豆、苦蕎納豆中總黃酮含量進行測定分析。試驗結果顯示，蘆丁在0.0 μg/mL～25.3 μg/mL范圍內線性關系良好（R2=0.999 8），平均回收率為98.94%，RSD為1.42%。納豆中總黃酮含量0.33 g/kg，苦蕎納豆中總黃酮含量0.78 g/kg。結果表明，采用紫外分光光度法可以簡便、快速、準確的測定納豆、苦蕎納豆中總黃酮含量，苦蕎納豆中總黃酮含量比納豆中總黃酮含量高出136%。

紫外分光光度法；納豆；苦蕎納豆；總黃酮；含量測定

納豆是日本傳統的大豆發酵食品，富含蛋白質、脂肪、碳水化合物、各種氨基酸和礦物質等多種營養成分，還含有其他食品中所沒有的各種生物酶，尤其是含有強烈纖溶活性的酶——納豆激酶。納豆對溶解血栓、預防心腦血管疾病有重要的現實意義。傳統納豆放置數天后會產生氨味，保存性差，且很不適合中國人口味，嚴重影響了納豆食品在我國的普及與推廣。為改善納豆風味，提高納豆品質，在傳統納豆中添加一定比例的苦蕎麥組合發酵，研制出苦蕎納豆，其具有較好的食用風味。苦蕎麥是主產于我國四川涼山地區和山西省晉北地區的高原作物。據《本草綱目》記載：苦蕎麥味苦，性平寒，能實腸胃、益氣力、續精神、利耳目，煉五臟渣穢。苦蕎麥主要功效成分為苦蕎黃酮，具有降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗炎、抗衰老、增加人體免疫力的作用。關于苦蕎納豆發酵工藝的研究，國內外雖有報道，但對苦蕎納豆總黃酮的含量分析研究至今尚未見報道。為此，開展該產品保健功效成分總黃酮的分析研究很有必要。

1 材料與儀器

1.1 材料

納豆，自制，150 g/瓶，批號分別為20130611、20130612、20130613；苦蕎納豆，自制，150 g/瓶，批號分別為20130601、20130602、20130603；甲醇，分析純，天津市標準科技有限公司；乙醇，分析純，成都市科龍化工試劑廠；聚酰胺粉，100～200目，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠；苯，分析純，成都市科龍化工試劑廠；蘆丁，中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200306。

1.2儀器

UV757CRT紫外可見分光光度計，上海精科；KQ-250B型超聲波清洗儀，江蘇省昆山市超聲儀器廠；290SCS電子天平，瑞士PRECISA；層析柱，直徑1.0 cm。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備

取供試品適量，研磨搗碎后精密稱取3 g，置于具塞錐形瓶中，加入25 mL乙醇，稱定重量，超聲提取20 min，放冷后再次稱定重量，用乙醇補足失重，搖勻，靜置，精密吸取上清液2 mL于蒸發皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴鍋上揮去乙醇，轉入層析柱。先用20 mL苯洗，棄去苯液，再用甲醇洗脫并定容至25 mL，即得。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取蘆丁對照品5.0 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，即得。

2.3 標準曲線繪制

精密吸取蘆丁對照品溶液：0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。以甲醇為空白，采用分光光度法，于波長360 nm測定吸光度。以質量濃度c（μg/mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，見圖1。求得回歸方程為D=0.023c-0.001，R2=0.999 8，表明蘆丁質量濃度在0.0 μg/mL～25.3 μg/mL范圍內，與吸光度呈良好的線性關系。

圖1 蘆丁標準曲線

2.4 重復性試驗

取同一批苦蕎納豆樣品（批號：20130603）6份，按2.1方法制備供試品溶液，以甲醇為空白，采用分光光度法，于波長360 nm處測定吸光度，計算樣品中總黃酮含量，結果見表1。由表1結果可知，采用該方法提取與檢測，重復性良好。

表1 重復性試驗結果（n=6）

2.5 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min后測定吸光度，結果見表2。由表2結果可知，供試品溶液在90 min內基本穩定。

表2 穩定性試驗結果（n=6）

2.6 加樣回收試驗

精密稱取已知含量的供試品（0.783 g/kg）0.5 g，共5份，精密加入0.401 6 mg蘆丁標準品溶液（0.100 4 mg/mL）4 mL，按照2.1方法制備供試品溶液，記錄吸光度，計算總黃酮含量，結果見表3。由表3結果可知，供試品溶液的制備及測定方法合理可行。

表3 加樣回收試驗結果（n=5）

2.7 樣品測定

取不同批次的苦蕎納豆和納豆，按照2.1的方法制備供試品溶液，依法測定吸光度，計算總黃酮含量，每個批號樣品平行測定2次，結果見表4。

表4 樣品測定結果

3 討論

綜上所述，采用該方法提取、測定苦蕎納豆中總黃酮含量線性良好，穩定性好，重復性和加樣回收試驗結果符合要求，可用于兩種納豆中總黃酮含量測定。

從測定結果來看：苦蕎納豆產品中總黃酮含量比普通納豆產品中提高了136%。眾所周知，納豆是大豆的發酵產物，且大豆中含有豐富的黃酮類化合物，具有多種生理活性。苦蕎納豆產品中不僅富含納豆的營養成分，而且富含大豆異黃酮和苦蕎黃酮，兩種黃酮的生理效應具有疊加作用。因此，大力開發本產品可更有效地為國民提供一種風味可口、保健功效顯著的健康食品，同時也為企業制定該產品的質量標準提供了科學依據。

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表7 穩定劑復配正交試驗方差分析

3 結論

通過正交試驗確定糙米豆奶配方為：大豆9.0%、酶解糙米粉3.0%、白砂糖6.0%、棕櫚油1.5%，可獲得口感良好，香甜適口的糙米豆奶。其最佳復配穩定劑成分為：微晶纖維素0.30%、卡拉膠0.013%、聚甘油脂肪酸酯0.100%、磷脂0.10%，該復配穩定劑能有效控制產品分層及沉淀現象，并且對控制產品脂肪上浮效果良好。

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Study on spectrophotometric determ ination and analysis of flavonids in nattos*

LI Xiao-yan**
（Shanxi institute ofmedicine and life science，Shanxi Taiyuan 030006，China）

Determination of flavonoids in natto and tartary buckwheat natto by spectrophotometry was developed. Rutin was used as standard for comparison.The calibration curve was linear in the range of 0.0 μg/mL～25.3 μg/mL（R2=0.999 8）.The average recovery was 98.94%，RSD was 1.42%.The content of alavonoids in nattos was 0.33 g/kg，and that of 0.78 g/kg in tartary buckwheat natto.Results showed this method was simple,fast,and accurate to determinate the flavonoids in nattos.

spectrophotometry；natto；tartary buckwheat natto；flavonoids；contents determination

TS207.5+1

A

1673-6044（2014）03-0058-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.03.018

山西省中藥現代化提取分離技術平臺建設（051016-1）。

**李曉艷，女，1980年出生，2004年畢業于山西中醫學院中藥學專業，工程師。

2014-07-31