化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較

張野

鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鐵嶺112000

化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較

張野

鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鐵嶺112000

目的探討化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果。方法選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標(biāo)本90例作為研究對象，通過靈敏性、干擾性和特異性對化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗(yàn)方法進(jìn)行比較，并采用三種試驗(yàn)方法同時對90例大便標(biāo)本進(jìn)行便隱血檢測。結(jié)果聯(lián)合免疫法、化學(xué)法以單克隆抗體法三種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2、20、0.2；化學(xué)法對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)；單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法不受維生素C的干擾，當(dāng)維生素C濃度超過10 mg/mL可引起化學(xué)法的陰性結(jié)果，而對聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測無影響。50例大便標(biāo)本作為健康對照組，22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組，其中，化學(xué)法檢出陽性例數(shù)30例、22例、18例，單克隆抗體法檢出陽性例數(shù)17例、10例、15例，聯(lián)合免疫法檢出陽性例數(shù)25例、22例、18例。結(jié)論聯(lián)合免疫法具有較好的特異性且靈敏度比較高，抗干擾性比較強(qiáng)，具有良好的發(fā)展前景，在臨床上有良好的應(yīng)用價值。

化學(xué)法；單克隆抗體法；聯(lián)合免疫法；便隱血

臨床上，便隱血主要是檢測消化道出血的常規(guī)診斷指標(biāo)，同時也是消化道惡性腫瘤早期診斷的重要篩查指標(biāo)。隨著醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血具有顯著的臨床效果。其中，化學(xué)法以匹拉米洞法為主要檢測方法，但極易受到食物和藥物的影響，發(fā)假陽性反應(yīng)[1]。而單克隆抗體法雖不受食物影響，但血紅蛋白極易產(chǎn)生變性，發(fā)生假陰性反應(yīng)[2]。聯(lián)合免疫法則不受食物和藥物影響，對便隱血的檢測擁有良好的應(yīng)用價值。對此，為了對比分析化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果，現(xiàn)選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標(biāo)本90例作為研究對象。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的大便標(biāo)本90例作為研究對象，通過靈敏性、干擾性和特異性對化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗(yàn)方法進(jìn)行比較，并采用三種試驗(yàn)方法同時對90例大便標(biāo)本進(jìn)行便隱血檢測。其中，50例大便標(biāo)本作為健康對照組，為臨床未診斷有任何消化道疾病的常規(guī)檢測標(biāo)本；22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組；血紅蛋白由正常人血液制成，以人、兔、羊、雞等動物血液制成濃度不同的血紅蛋白和維生素C。其中，前者用于靈敏性試驗(yàn)，后者用于干擾性試驗(yàn)。

1.2 試劑和方法

聯(lián)合免疫法主要以華普曼生物工程有限公司提供的聯(lián)合免疫法診斷試紙，按照說明書操作，結(jié)果判讀參照說明書，單克隆抗體法采用華普曼生物工程有限公司提供的“速而準(zhǔn)”便隱血單克隆抗體試劑盒，嚴(yán)格按照使用說明測定，5 min內(nèi)讀取結(jié)果。兩條紫紅色條帶出現(xiàn)為陽性，一條紫紅色條帶出現(xiàn)為陰性。化學(xué)法采用珠海貝索的貝索大便隱血Ⅱ號試紙進(jìn)行檢測，利用紙卡作為大便檢體的輸送容器，其陽性反應(yīng)最終呈色為紫紅色。

1.3 靈敏性、特異性和干擾性試驗(yàn)

1.3.1 靈敏性試驗(yàn)取已知濃度轉(zhuǎn)鐵蛋白，采用蒸餾水將其稀釋成500、200、100、20、2和0.25種濃度的大便懸浮液，用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法分別對其進(jìn)行測定。

1.3.2 特異性試驗(yàn)用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法這三種方法對500的人、兔、羊、雞血紅蛋白液反應(yīng)。

1.3.3 干擾性試驗(yàn)在含500的大便混懸液中加入4種不同濃度的維生素C，用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法這三種方法對其進(jìn)行測定。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種便隱血試驗(yàn)靈敏性比較

聯(lián)合免疫法、化學(xué)法以單克隆抗體法三種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2、20、0.2。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表1。

表1 三種檢測方法人的血紅蛋白液（μg/mL）

2.2 三種便隱血試驗(yàn)特異性比較

化學(xué)法對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表2

表2 三種檢測方法檢測人和動物的血紅蛋白（μg/mL）

2.3 三種便隱血試驗(yàn)抗干擾性比較

單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法不受維生素C的干擾，當(dāng)維生素C濃度超過10 mg/mL可引起化學(xué)法的陰性結(jié)果，而對聯(lián)合免疫法和單克隆抗體的檢測無影響。其中，“+”為陽性，“-”為陰性，見表3。

表3 三種便隱血試驗(yàn)抗干擾性比較（mg/L）

2.4 三種便隱血試驗(yàn)檢測陽性率比較

50例大便標(biāo)本作為健康對照組，22例診斷為上消化道出血，記為上消化道出血組，18例診斷為下消化道腫瘤性病變，記為下消化道腫瘤性病變組，化學(xué)法檢出陽性例數(shù)30例、22例、18例，單克隆抗體法檢出陽性例數(shù)17例、10例、15例，聯(lián)合免疫法檢出陽性例數(shù)25例、22例、18例。聯(lián)合免疫法檢測陽性率和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），化學(xué)法和單克隆抗體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 三種便隱血試驗(yàn)檢測陽性率比較[n(%)]

3 討論

通常情況下，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測便隱血的方法，主要為了檢測人體血紅蛋白抗原，而聯(lián)合免疫法除了檢測人體血紅蛋白抗原外，還檢測人轉(zhuǎn)鐵蛋白，具有較強(qiáng)的特異性和靈敏性，不會受到食物和藥物等因素的影響，基于這種優(yōu)勢，單克隆抗體和聯(lián)合免疫法兩種檢測方法均被廣泛應(yīng)用于各個醫(yī)院中。但也有不足之處，當(dāng)患者正常生理失血時，很容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果；而單克隆抗體法極易因血紅蛋白變性產(chǎn)生假陰性結(jié)果；化學(xué)法則很容易受到藥物和食物的影響，進(jìn)而產(chǎn)生假陽性結(jié)果。因此，化學(xué)法多以匹拉米洞組為代表，其原理是利用匹拉米洞為呈色指示劑，在酸及過氧化氫溶液作用下，與血紅蛋白作用，產(chǎn)生紫藍(lán)而后呈現(xiàn)紫紅的顏色[3]。但匹拉米洞化學(xué)法跟其他化學(xué)法一樣都是基于過氧化物酶活性的測定[4]，此法不具有特異性，其靈敏度比較低[5]，不易進(jìn)行質(zhì)量管理等問題。所以，聯(lián)合免疫法具有較好的特異性且靈敏度比較高，抗干擾性比較強(qiáng)，具有良好的發(fā)展前景，在臨床上有良好的應(yīng)用價值。

從研究中可以看出，22例上消化道出血組利用聯(lián)合免疫法、化學(xué)法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為100%、98.5%、75.6%，其中聯(lián)合免疫法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。化學(xué)法和單克隆抗體法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而18例下消化道出血利用聯(lián)合免疫法、化學(xué)法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為100%、96.4%、82.5%，化學(xué)法和單克隆抗體法、化學(xué)法與聯(lián)合免疫法之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而對照組采用聯(lián)合免疫法、化學(xué)法和單克隆抗體法檢測陽性率分別為52.8%、65.8%、21.4%。化學(xué)法與單克隆抗體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此可見，聯(lián)合免疫法中的轉(zhuǎn)鐵蛋白在糞便中的穩(wěn)定性高于血紅蛋白，所以同時檢測轉(zhuǎn)鐵蛋白可以減少由于血紅蛋白抗原性消失而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果，提高檢出的精度[6]。而單克隆抗體法利用抗人血紅蛋白或抗人紅細(xì)胞基質(zhì)抗體與膠體金結(jié)合，可檢測微量的血紅蛋白，對人體微量的消化道出血更敏感。而化學(xué)法則受的影響因素較多[7]。所以，三種檢測方法各有其獨(dú)自的適用性[8]。

綜上所述，化學(xué)法快捷方便，但對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng)，靈敏度比較低，而單克隆抗體能夠直接測定人體血紅蛋白，靈敏度比較高，不易受外界因素干擾，但很容易受到血紅蛋白抗原性變化，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。而聯(lián)合免疫法則彌補(bǔ)了以上方法的不足，一旦化學(xué)法和單克隆方法的測定結(jié)果有疑問時，則可以結(jié)合患者實(shí)際病情測定結(jié)果，采用聯(lián)合免疫法作為有效互補(bǔ)，進(jìn)一步提高檢測便隱血的準(zhǔn)確性。

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R446.6

A

1672-5654（2014）12（c）-0183-02

2014-09-25）

張野（1979-），滿族，本科，主管檢驗(yàn)技師，研究方向：臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)。