脂質體降低尼美舒利肝臟毒性的初步研究

劉 聰，陳新梅，袁玉芳

（山東中醫藥大學藥學院，山東濟南250355）

脂質體降低尼美舒利肝臟毒性的初步研究

劉 聰，陳新梅，袁玉芳

（山東中醫藥大學藥學院，山東濟南250355）

目的考察尼美舒利脂質體對肝臟的影響作用。方法小鼠隨機分為生理鹽水對照組、尼美舒利溶液組及尼美舒利脂質體組，各組分別灌胃相應藥物，21 d后處死并檢測小鼠肝臟中ALT和AST活性，同時觀察肝組織病理變化。結果NIM溶液組小鼠與對照組小鼠相比，谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶均明顯升高，分別為（250.11± 31.64），（234.01±29.59），P＜0.01；脂質體組小鼠與溶液組相比，谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶均降低，分別為（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；小鼠肝臟病理切片顯示脂質體組小鼠肝損傷程度明顯低于溶液組小鼠。結論脂質體能顯著降低尼美舒利的肝臟毒性。

尼美舒利；脂質體；肝臟保護

尼美舒利（nimesulide，NIM）是一種新型的非甾體類抗炎藥，因其具有顯著的抗炎、鎮痛和解熱作用而在世界各國內均有應用。但尼美舒利口服血藥濃度波動較大、半衰期較短（t1／2＝3.3 h），需要頻繁服藥，并且由于其肝損傷作用限制了使用［1～3］。本課題的研究以降低NIM的肝毒性及減少其服藥次數為目的將NIM制成脂質體［4］。脂質體系指將藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的微型泡囊體，具靶向性、低毒性、緩釋性等特點，本研究考察了NIM脂質體對肝臟的影響，以期提高NIM臨床用藥的安全性。

1 材料

1.1 儀器 旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；UV－3010紫外分光光度計（日本島津）；JA－2003型電子天平（上海天平儀器廠）；XSP－2C光學顯微鏡（上海長方光學儀器有限公司）；KQ－250E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 ALT試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：C009－1130915）；AST試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：C010－1130911）；總蛋白測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：WO11131009）；尼美舒利原料藥（武漢大華偉業醫藥化工有限公司，批號：XH201301248002，純度99%）；蛋黃卵磷脂（上海太偉藥業有限公司）；膽固醇（南京奧多福尼生物科技有限公司，進口分裝）。

1.3 動物 KM系清潔級小鼠共48只，體重26～32 g，雌雄各半。由山東中醫藥大學實驗動物中心提供，證書編號：SCXK（魯）2013－0003。

2 方法與結果

2.1.1 藥物制備 將尼美舒利原料藥溶于蒸餾水中，制成濃度為2 mg·mL－1的溶液備用；薄膜分散法制備NIM脂質體［4］，NIM含量為2 mg·mL－1。所有灌胃藥物現用現制。

2.1.2 動物分組 試驗動物雌雄各半，隨機分為生理鹽水對照組、NIM溶液組及NIM脂質體組，小鼠飼養于22℃、60%相對濕度的環境中，自由進食和飲水，一周后開始試驗。

2.1.3 試驗數據的測定 小鼠每天灌胃兩次，每次0.4 mL。小鼠連續灌胃21 d后禁食12 h，脊柱脫臼處死，小鼠解剖后取肝臟稱重，計算肝指數（肝指數＝肝臟重量／小鼠體重）；肝臟分兩部分，一部分用來測定肝臟中的谷草轉氨酶（Aspartate transaminase，AST）和谷丙轉氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）的含量，另一部分肝臟作病理切片。試驗數據以±s表示，計量資料用統計分析軟件SPSS 19.0進行單因素方差分析，P＜0.05為差異具統計學意義，結果見表1。

表1 小鼠肝指數及肝臟中ALT、AST含量

由表1可見，對于肝指數，溶液組和脂質體組與對照組之間均無顯著性差異，即尼美舒利脂質體與尼美舒利溶液對小鼠的肝指數均無明顯影響。而對于肝臟中的ALT和AST含量，脂質體組和溶液組分別與正常組比較，具有極顯著性差異；脂質體組與溶液組進行比較，數據亦具有統計學意義。即尼美舒利脂質體與尼美舒利溶液相比，能顯著減少小鼠肝臟內AST和ALT的含量。

2.1.4 肝臟病理切片 小鼠肝臟病理切片后HE染色，鏡下觀察病理改變，結果見圖1。生理鹽水對照組小鼠肝小葉結構清晰，肝索排列規則，肝細胞未見明顯異常；尼美舒利溶液組中肝臟結構紊亂，小葉間界限不清，偶有小灶性炎細胞浸潤并有大片肝組織損傷，其中以空泡變性為主，受損面積超過一半；尼美舒利脂質體組細胞變形明顯減少，且幾乎未見有炎細胞出現。脂質體組和溶液組與對照組比較均有明顯差異。

圖1 各組小鼠肝臟病理切片結果（HE，×200）

3 討論

本研究結果表明，尼美舒利所致急性肝損傷模型中小鼠肝組織內，ALT和AST活性明顯升高。肝細胞明顯變性壞死，表明尼美舒利引起小鼠嚴重的急性肝損傷。尼美舒利脂質體組小鼠與尼美舒利溶液組小鼠相比其肝酶（ALT、AST）活性明顯偏低。而通過對小鼠肝臟的大體觀察、組織學觀察及肝組織的分級評分可以看出，在尼美舒利脂質體組中，肝臟大體病變及肝細胞變性、壞死及炎癥浸潤等病變明顯偏輕，進一步證明了尼美舒利脂質體與尼美舒利溶液相比，尼美舒利脂質體對小鼠肝臟具有預防保護作用。這些結果為尼美舒利制備成脂質體化提供了重要的理論根據。

脂質體降低NIM肝毒性的機理可能是脂質體具囊泡結構，包裹NIM分子，使其緩慢釋藥，從而減少了瞬時NIM濃度過大對肝臟的損傷；另一方面，因為脂質體囊殼中含較多磷脂雙分子層，而被囊殼包裹的NIM分子會迅速分布至脂肪組織中，從而延長NIM分子在肝臟內代謝的時間，因此而降低NIM對于肝臟的損傷。這些推測還需進一步的試驗驗證。

［1］梁玉華，劉勁.19例尼美舒利所致肝臟損害的調查分析［J］.海南醫學，2011，22（19）：34－35.

［2］韓松瑛，劉樹森，玄延花，等.尼美舒利引起嚴重肝損傷致死尸檢1例［J］.臨床與實驗病理學雜志，2008，24（4）：508－509.

［3］傅明健，楊正兵，向丹沙，等.尼美舒利致藥物性肝炎1例［J］.職業衛生與病傷，2002，17（4）：299.

［4］張娜娜，陳新梅，戰旗，等.尼美舒利脂質體的制備及質量評價初步研究［J］.藥學研究，2013，32（11）：651－652，659.

The prelim inary inquiry of liposomes reduce nimesulide liver toxicity

LIU Cong，CHEN Xin-mei，YUAN Yu-fang
（College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

ObjectiveTo explore the influence of nimesulide liposomes to liver.MethodsMethods of test animals were randomly divided into control group，nimesulide solution group and nimesulide liposome group.Each group were orally administered drugs accordingly，21 d after testing animalswere sacrificed and liver tissue ALT and AST activity observed pathological changes in Liver tissue.ResultsThe nimesutide solution group ofmicewas compared with the control group ofmice whose serum aspartate，alanine aminotransferase were significantly increased，respectively（250.11±31.64），（234.01± 29.59），P＜0.01；Mice with liposome and solution mice compared to their aspartate transaminase，alanine aminotransferase were low，respectively（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；Microscopic observation ofmouse liver biopsy，liver damage liposome group ofmice was significantly lower extent.ConclusionLiposomes reduced liver toxicity nimesulide.

Nimesulide；Liposomes；Liver protection

R965

：A

2095－5375（2014）07－0382－003

山東中醫藥大學2014年SRT項目（項目編號：2014144）。本項目于山東中醫藥大學大學生創新創業訓練平臺完成

劉聰，男，研究方向：中藥學，E－mail：DD_liucong＠126.com

陳新梅，女，博士研究生，副教授，研究方向：藥劑學的教學與科研，Tel：13065016189，E－mail：xinmeichen＠126.com