HPLC法測定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量

劉 峰

（日照市藥品檢驗所，山東日照276800）

HPLC法測定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量

劉 峰

（日照市藥品檢驗所，山東日照276800）

目的建立高效液相色譜法測定天麻眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的含量。方法色譜柱為ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相為乙腈－0.1%磷酸溶液，檢測波長為223 nm，柱溫為30℃，流速為1 mL· min－1。結果天麻素和芍藥苷的線性范圍分別是0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，平均加樣回收率分別為為98.3%，96.7%。結論該方法簡便、準確、重復性好，可用于天麻素眩暈寧合劑中天麻素和芍藥苷的定量測定。

天麻眩暈寧合劑；天麻素；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

天麻眩暈寧合劑屬于國家中藥保護品種，具有祛痰定眩、和胃止嘔的功效；臨床用于眩暈、惡心、嘔吐、舌淡、苔白滑等癥，尤適用于美尼爾氏綜合征。由天麻、白芍、半夏、甘草等十二味中藥組方而成。天麻、白芍為天麻眩暈寧合劑的主藥之一，天麻臨床上用于頭痛眩暈，肢體麻木，小兒驚風，癲癇，抽搐，破傷風等；白芍具有平抑肝陽，養血收陰之功效。本實驗參考文獻［1～4］采用HPLC法同時測定天麻素和芍藥苷，為控制天麻眩暈寧合劑的質量提供可靠、準確快速的方法。

1 儀器與試藥

LC－20ATVP高效液相色譜儀（日本島津公司）；Agilent1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；XS105DU電子天平（瑞士，梅特勒－托利多）；Millipore超純水儀（美國Millipore公司）。天麻素對照品，芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110807－200205，110736－200527）；乙腈為色譜純，甲醇、磷酸均為分析純；天麻眩暈寧合劑購自日照真誠大藥房有限公司天津路藥店（陜西中醫學院制藥廠，批號：130624、130702、130711、130729）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液；檢測波長：223 nm；柱溫：30℃；流速：1 mL·min－1；進樣量：20μL；天麻素、芍藥苷的保留時間分別為：8.25、12.568 min。流動相梯度洗脫條件見表1，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥后的天麻素對照品10.20 mg、芍藥苷對照品36.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超聲（300W，40 kHz）20 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

表1 流動相梯度洗脫順序

圖1 HPLC色譜圖

2.3 供試品溶液的制備 取本品，搖勻，精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇超聲（300 W，40 kHz）20 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 空白試驗 按天麻眩暈寧合劑制備方法制成缺天麻、白芍的陰性對照品，再按“2.3”項下供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液，并按上述色譜條件進行檢測。結果在天麻素、芍藥苷對照品相同保留時間處無干擾峰出現，表明處方中其他藥味對天麻素、芍藥苷的測定無干擾。

2.5 線性關系考察 精密吸取“2.2”項下溶液，0.5、1、2.5、5、10、20 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，連同天麻素、芍藥苷對照品溶液一并進樣20μL進行測定。以峰面積（Y）對進樣量（X）進行線性回歸，得回歸方程為：天麻素Y＝1 152X－124.32，r＝0.999 6；芍藥苷Y＝15 921.1X－654.2，r＝0.999 2

線性范圍：天麻素、芍藥苷分別為0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg，表明線性關系良好。

2.6 穩定性試驗 取樣品按“2.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別在0、5、10、15、20、25 h測定，結果顯示，在25 h內測定供試品溶液中天麻素、芍藥苷峰面積的RSD為0.85%，0.79%，表明該方法穩定性良好。

2.7 重復性試驗 精密量取同一批號的樣品6份（每份3 mL），按“2.3”項下方法制備溶液并進行測定。結果天麻素的平均值為0.433 8 mg·mL－1，RSD為0.92%，芍藥苷的平均值為1.462 0 mg·mL－1，RSD為0.95%。

2.8 精密度試驗 取對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次測定，計算天麻素、芍藥苷峰面積的RSD為0.62%、0.38%。

2.9 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，精密量取已知含量的樣品6份（批號為130624，測得天麻素、芍藥苷含量為0.433 8 mg·mL－1和1.462 mg·mL－1）各5 mL，分別準確加入天麻素對照品溶液0.157 mg ·mL－1、芍藥苷對照品溶液0.574 5 mg·mL－1各10 mL，按“2.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.1”項下方法進行測定，用外標法計算含量及加樣回收率，天麻素、芍藥苷的平均回收率（n＝6）為98.3%，RSD為0.46%和96.7%，RSD為0.73%，結果見表2、3。

表2 天麻素回收率試驗

表3 芍藥苷回收率試驗

2.10 樣品測定 取4個批號天麻眩暈寧合劑，按“2.3”項下方法制成供試品溶液并按上述色譜條件測定峰面積，按外標法計算樣品的含量，結果見表4。

表4 樣品測定結果（n＝4）

2.11 耐用性試驗 試驗考察了不同儀器和色譜柱對樣品含量的影響，采用3根不同品牌的色譜柱Hypersil C18柱，Shimadzu VP－ODSC18柱，Agilent HC－C18柱，規格均為4.6 mm×250 mm，5μm，分別在2臺不同的儀器上，按照上述色譜條件進行試驗，結果見表5。

表5 不同儀器和色譜柱測得的樣品含量

3 討論

3.1 質量標準的提高 天麻眩暈寧合劑是一種治療美尼爾氏癥有效的中成藥，原標準僅對鉤藤，陳皮進行了定性鑒別，文獻［2］報道中對天麻進行了含量測定，其他藥材未進行控制，容易給不法分子偷工減料，制造假劣藥品帶來可乘之機，本方法可以對其中含有的有效成分天麻、白芍進行定性鑒別和定量含量測定。

3.2 檢測波長的選擇 HPLC法測定天麻素、芍藥苷的含量，需選擇適當的檢測波長。筆者通過試驗，取“2.2”項下天麻素對照品、芍藥苷對照品溶液，采用雙光束分光光度法在200～350 nm處掃描，天麻素對照品在221 nm處有最大吸收，芍藥苷對照品在230 nm波長有最大吸收，本試驗選取223 nm作為檢測波長取得滿意效果。

3.3 流動相的選擇 在選用流動相時，參考文獻［3～6］報道分別使用甲醇－0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液（28∶72）、甲醇－水－冰醋酸（23∶75∶2）等進行試驗，分離效果都不理想，改用以乙腈－0.1%磷酸溶液作梯度洗脫，分離度達到了2.0，可以用來測定。

［1］趙成.HPLC法測定天麻眩暈寧合劑中天麻素的含量［J］.安徽醫藥，2008，12（1）：23－24.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：54－55.

［3］桂雙英，朱友，徐衡.婦康寶口服液的質量標準研究［J］.安徽中醫學院學報，2004，23（3）：47－49

［4］吳基威，朱銳金.高效液相色譜法測定茴桂婦炎膠囊中芍藥苷的含量［J］.中國中醫藥信息雜志，2010，17（11）：43.

［5］唐富麗，秦郁文.HPLC法測定逍遙合劑中芍藥苷的含量［J］.齊魯藥事，2011，30（4）：202－203

［6］趙輝，武曉紅，蒲曉輝.HPLC法同時測定天舒膠囊中阿魏酸和天麻素［J］.中成藥，2014，36（1）：111－114.

Determ ination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning M ixture by HPLC

LIU Feng
（Rizhao Institute for Drug Control，Rizhao 276800，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.MethodsThe optimum HPLC condition was as follows：Hypersil C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm），mobile phase：actonitrile－0.1%phosphoric acid solution，detection wavelength：223 nm，column temperature：30℃，flow rate：1 mLmin－1.ResultsTherewere good linearity between peak areas and injection quantity of gastrodin and paeoniflorin within the range of0.020 4～0.816μg，0.073～2.92μg.The average recoverywas98.3%for gastrodin，96.7% for paeoniflorin.ConclusionThe HPLCmeasurementwas reasonable，stable and accurate.Themethod could detect gastrodin and paeoniflorin in Tianma Xuanyunning Mixture.

Tianma Xuanyunning Mixture；Gastrodin；Paeoniflorin；HPLC；Determination

R927.2

：A

2095－5375（2014）07－0386－003

劉峰，男，副主任醫師，研究方向：藥品檢驗，E－mail：liufeng7663＠163.com。