HPLC法測定鹽酸舍曲林片的有關物質

常艷波

（四川省食品藥品檢驗檢測院，四川成都611731）

HPLC法測定鹽酸舍曲林片的有關物質

常艷波

（四川省食品藥品檢驗檢測院，四川成都611731）

目的建立高效液相色譜法檢測鹽酸舍曲林片中有關物質的方法。方法采用Waters Symmetry C18色譜柱，以含有磷酸、磷酸二氫鉀溶液和乙腈的不同比例的混合液為流動相進行梯度洗脫，流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為210 nm，柱溫為25℃，進樣量為20μL。結果有關物質與鹽酸舍曲林主成分色譜峰分離良好。結論該方法操作簡便、重復性好、專屬性強，可作為鹽酸舍曲林片質量控制方法。

鹽酸舍曲林；高效液相色譜法；有關物質

鹽酸舍曲林（sertraline hydrochloride），化學名為（1S－順式）－4－（3，4－二氯苯基）－1，2，3，4－四氫－N－甲基－1－萘胺鹽酸鹽，是一種5－羥色胺再攝取抑制劑，主要用于治療或預防抑郁癥與強迫癥。目前，對于鹽酸舍曲林有關物質的報道為數不多［1～9］，如毛細管電泳法［7］、加壓毛細管電色譜法［8］等，主要為鹽酸舍曲林異構體的分離測定，本文主要考察了鹽酸舍曲林的工藝雜質，參考英國藥典，采用反相高效液相色譜（RP－HPLC）法分離鹽酸舍曲林片中的2種已知雜質及其他未知雜質，對其進行質量控制，從而為鹽酸舍曲林片的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

Waters 2695系列高效液相色譜儀，包括Waters 2489紫外檢測器，Empower2色譜工作站。鹽酸舍曲林對照品（中檢所，批號：100702－200401）；雜質C對照品（EP－7.0，批號：120828）；雜質E對照品（Ep－7.0，批號：Y0001285）；鹽酸舍曲林片（廠家A批號：1272017；廠家B批號：130201、130202、130203）。磷酸二氫鉀、磷酸為分析純；乙腈為色譜純；水為純化水。

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18（4.6mm ×250mm，5μm）；柱溫：25℃；流速：1.0mL·min－1；檢測波長：210 nm。進樣量：20μL。流動相A：0.272%磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調節pH值至3.0；流動相B：乙腈，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

2.2 溶液的制備

2.2.1 系統適用性試驗溶液 取鹽酸舍曲林對照品和雜質C對照品適量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀釋制成含鹽酸舍曲林2.5 mg·mL－1、雜質C 20 μg·mL－1的混合溶液，作為系統適用性試驗溶液。

2.2.2 供試品溶液 取鹽酸舍曲林片9片，置200 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）150 mL，振搖使完全崩散，超聲處理5 min，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，制成含鹽酸舍曲林2.5mg·mL－1的溶液，濾過，取續濾液（前5 mL濾液棄去），作為供試品溶液。

2.2.3 對照品溶液 精密量取供試品溶液1 mL，置500 mL量瓶中，加乙腈－水（3∶7）稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（1）；精密量取對照溶液（1）5 mL，置10 mL量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液（2）；另精密稱取雜質E適量，用乙腈－水（3∶7）溶解并稀釋制成10μg·mL－1的溶液，作為對照品溶液。

3 實驗結果

3.1 系統適用性試驗結果 取系統適用性試驗溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質C的出峰時間應為12～17 min，鹽酸舍曲林應在30 min內出峰，鹽酸舍曲林峰和雜質C峰的分離度不得小于1.5，結果見圖1。

圖1 鹽酸舍曲林片系統適用性試驗溶液HPLC色譜圖1.雜質C；2.鹽酸舍曲林

3.2 雜質限度標準的制訂 供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰，與雜質C保留時間一致的雜質峰面積不得大于對照溶液（1）主峰面積的4倍（0.8%），與雜質E保留時間一致的雜質峰面積不得大于對照品溶液主峰面積（0.4%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積（0.2%），總雜質（除雜質C峰外）不得大于對照溶液（1）主峰面積的7.5倍（1.5%）。小于對照溶液（2）主峰面積的雜質峰不計（0.1%）。

3.3 檢測限定量限 精密稱取雜質C、雜質E對照品適量，加乙腈－水（3∶7）制成對照品溶液，通過逐級稀釋，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。信噪比（S／N）約為10時的進樣量即為定量限，信噪比（S／N）約為3時的進樣量即為檢測限。

結果表明：雜質C與雜質E的檢測限分別為1.30、0.70 ng；定量限分別為3.92、2.10 ng。當供試品溶液中鹽酸舍曲林濃度為2.5 mg·mL－1、進樣量為20μL時，其絕對進樣量為50 000 ng，該進樣量約為雜質C檢測限的38 000倍，即約0.003%的雜質量可被檢出；是雜質E檢測限的70 000倍，即約0.002%的雜質量可被檢出，遠低于雜質限度要求，該方法靈敏度高，能充分保證有效檢出樣品中雜質。

3.4 專屬性試驗 取鹽酸舍曲林片9片及鹽酸舍曲林原料約500 mg分別進行酸、堿、氧化、高溫、光照破壞實驗，同時取輔料、未破壞供試品及原料按照上述色譜條件進行實驗。結果表明經酸、堿、氧化、高溫、強光條件破壞的樣品，在選擇的色譜條件下，樣品主峰、已知雜質和強降解產物均能有效分離，表明本方法能夠有效的檢查鹽酸舍曲林片中的有關物質。破壞性試驗圖譜見圖2～7。

圖2 輔料空白

圖3 酸破壞原料

圖4 堿破壞原料

3.5 精密度試驗 精密量取雜質C，雜質E對照品溶液及“2.2”項下對照溶液（1）各20μL，注入液相色譜儀，分別連續進樣6次，記錄色譜圖，考察精密度，結果各溶液色譜圖中主峰面積RSD（n＝6）分別為0.13%、0.19%、0.28%，表明試驗精密度良好。

圖5 氧破壞原料

圖6 高溫破壞原料

圖7 光破壞原料

3.6 線性關系 分別取雜質C、雜質E對照品適量，分別用乙腈－水（3∶7）溶解并逐級稀釋制成濃度系列溶液，精密量取各溶液20μL，分別注入液相色譜儀，按照上述色譜條件檢測，記錄色譜圖，以峰面積對濃度線性回歸，試驗結果表明，雜質C在0.980 0～39.20μg·mL－1范圍內，線性關系良好；雜質E在1.05～21.04μg·mL－1范圍內，線性關系良好。

3.7 穩定性試驗 取雜質C，雜質E對照品溶液及“2.2”項下供試品溶液、對照溶液（1）室溫放置（20～25℃，遮光），按上述色譜條件，分別于0、1、2、4、8 h進行檢測，考察穩定性，結果表明，上述各測定溶液在室溫條件放置（20～25℃，遮光）8 h，雜質含量無變化，穩定性良好。

3.8 重復性試驗 取鹽酸舍曲林片供試品（130201），按照上述方法平行制備6份供試品溶液，分別進行有關物質檢測。結果表明，6份供試品溶液已知雜質含量、未知雜質含量和總雜質含量結果均無顯著差異（RSD≤1.0%），雜質個數一致，重復性良好。

3.9 耐用性試驗 按上述色譜條件，在其他條件不變的情況下，分別將流速改變為（1.0±0.1）mL·min－1，柱溫在20～35℃范圍內改變，更換Waters Symmtry C18（4.6 mm×250 mm，5μm），Kromasil C18（4.6 mm ×250 mm，5μm），Chromsil ODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）對取供試品溶液，進行考察，結果顯示，在上述流速和柱溫的條件下，結果均能滿足系統適用性要求，但僅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能滿足系統適用性要求。

3.10 樣品有關物質檢查 取鹽酸舍曲林片（市售，廠家A批號：1272017；廠家B批號：130201、130202、130203）樣品，按照上述有關物質檢查方法檢查，結果見表2。

表2 樣品的有關物質檢查結果

4 討論

4.1 專屬性試驗結果表明氧化、光照條件對雜質C影響較大，其余條件影響相對較小。

4.2 耐用性試驗 本文采用3種色譜柱，對供試品溶液進行了考察，結果僅Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）能滿足系統適用性要求，原因為該方法系統適用性對雜質和主成分的出峰時間及之間的分離度有明確且較嚴格的要求，故在擬定該方法時必須規定色譜柱為Waters Symmtry C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

4.4 方法的優化 英國藥典（BP2013）中舍曲林片有關物質檢查項下規定，系統適用性溶液色譜圖每次均需與BP參考圖譜比對，要求“基本一致”，而中國藥典及中檢院的對照品均不提供參考圖譜，且BP雜質對照品價格昂貴、購買不易，給實際操作帶來不便，故本研究根據BP參考圖譜對系統適用性試驗的要求，對方法進行了優化：取鹽酸舍曲林對照品和雜質C對照品適量，用溶劑A溶解并稀釋制成含鹽酸舍曲林2.5 mg·mL－1、含雜質C 20μg·mL－1的混合溶液，作為系統適用性試驗溶液，雜質C的出峰時間應為12～17 min，鹽酸舍曲林應在30 min內出峰，鹽酸舍曲林峰和雜質C峰的分離度不得小于1.5。

①鹽酸舍曲林與雜質C的濃度：按照供試品溶液濃度及雜質C限度（不得大于0.8%）配制系統適用性溶液，結果該溶液的色譜圖中，鹽酸舍曲林峰與雜質C峰的保留時間，雜質C的峰響應值與BP參考圖譜中相應峰基本一致。

②鹽酸舍曲林峰的保留時間：流動相系統在0～30 min為高極性的等度洗脫，使雜質及主成分有效分離，自30min起有機相的比例升高，使低極性的雜質得以洗脫，主成分鹽酸舍曲林在30min內出峰，保證了其他雜質在50min的梯度洗脫中被有效檢出。

③雜質C的保留時間：BP參照圖譜中雜質C的出峰時間約為14 min，為了保證系統適用性試驗與BP的一致性，結合耐用性試驗結果，將雜質C的保留時間定為12～17 min。

④分離度：為保證鹽酸舍曲林峰和雜質C峰有效分離，規定二者的離度不得小于1.5。

結果表明，優化后的系統適用性試驗與原BP方法無明顯差異，為保證檢查的準確和簡便。

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Determ ination of related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets by HPLC

CHANG Yan-bo
（Sichuan Institute for Food and Drug Control，Chengdu 611731，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Sertraline Hydrochloride Tablets.M ethodsA gradient elution was carried out on a Waters Symmetry C18column with mixture of phosphoric acid and potassium dihydrogen phosphate solution and acetonitrile asmobile phase，and the flow ratewas1.0 mL ·min－1.The detection wavelength was 210 nm，the column temperature was 25℃，and the injection volume was 20μL.Resu ltsThe relevant substances were well separated from the chief agent.ConclusionThe method was simple，repeatable and specific，and can be used for the quality control of Sertraline Hydrochloride Tablets.

Sertraline hydrochloride；HPLC；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）10－0578－004

常艷波，碩士，主管藥師，研究方向：藥品質量控制，E－mail：chang.y.b＠163.com