鼠曲草TLC鑒別及質(zhì)量檢查項目研究

張立慶，曲暢游，李渤文，肖海燕，路立峰

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東威海264210）

鼠曲草TLC鑒別及質(zhì)量檢查項目研究

張立慶，曲暢游，李渤文，肖海燕，路立峰

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東威海264210）

目的建立簡單快捷的鼠曲草藥材質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)。方法通過對3個不同產(chǎn)地的鼠曲草藥材進行TLC鑒別、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、水分以及灰分測定的研究，建立其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果確定了鼠曲草TLC鑒別、水分、灰分和水溶性浸出物、醇溶性浸出物的測定方法，制定了其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論研究結(jié)果表明本研究制定的鼠曲草藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，可為山東省以及其他地區(qū)使用和檢驗提供依據(jù)。

鼠曲草；薄層色譜鑒別；水分檢查；灰分檢查；水溶性浸出物；醇溶性浸出物

鼠曲草最早收錄于《名醫(yī)別錄》中，又名佛耳草，為菊科鼠曲草屬植物鼠曲草（Gnaphalium affine D.Don）的干燥全草。主要分布在亞洲地區(qū)，以我國和朝鮮、菲律賓等地多見。在歷朝古籍書如《本草綱目》、《本草拾遺》、《品匯精要》中均有相關(guān)記載，民間尤其是江浙一帶多以清明節(jié)前后采摘其幼苗，制成飯團等多種食品。具有化痰止咳、祛風(fēng)平喘、除濕止痹之功效。現(xiàn)代研究多著重于其化學(xué)成分與藥理作用，并認(rèn)為鼠曲草具有抗菌抗炎［1］、止咳祛痰［2，3］、保肝［4］、抗氧化作用［5］。目前文獻關(guān)于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究幾乎未見報道［6～9］，本文擬通過對鼠曲草藥材開展TLC鑒別；水溶性浸出物、醇溶性浸出物及水分、灰分等檢測而確定多個檢查項目，進行實驗研究，建立其藥材簡單而快捷的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為山東省以及其他省、自治區(qū)、直轄市等地區(qū)該藥材提供使用和檢驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

電子分析天平（EQP206－4RB型，貴陽涂興電子有限公司）；真空干燥箱（DRP－ZK－3型，蘇州德瑞普烘箱制造有限公司）；恒溫水浴鍋（WHKGT2型，湖北云錦電子有限公司）；馬福爐（RBS6L型，山西華天科技有限公司）；槲皮素對照品（批號為081－9003，中國藥品生物制品檢定所），試驗所用其他試劑均為分析純，水為純化水。

鼠曲草主要購于安徽省亳州市中藥材市場，由山東中醫(yī)藥大學(xué)周鳳琴教授鑒定為菊科鼠曲草（Gnaphalium affine D.Don）的干燥地上部分。

2 方法

2.1 薄層鑒別 在3個250 mL燒瓶中分別加入不同產(chǎn)地適當(dāng)粉碎的鼠曲草粗粉各10 g后再分別注入100 mL 70%乙醇，分別在水浴持續(xù)回流處理4 h后趁熱濾過，濾液分別分次轉(zhuǎn)移至表面皿中，水浴蒸干。殘留物中分別添加少量水充分?jǐn)嚢枞芙夂鬄V過，再分別加入20mL乙酸乙酯置濾液中，輕搖后靜置，等其分層，各樣品分離水層和乙酸乙酯層。再各加入20 mL乙酸乙酯液置水層，各反復(fù)萃取4次后，分別將乙酸乙酯液合并。分別將20 g干燥無水硫酸鈉加入各合并液中，分別濾過，將各濾液分別移至表面皿中，水浴蒸干后室溫放冷。各加入2 mL乙酸乙酯，攪拌，待殘留物溶解后，轉(zhuǎn)移至3個2 mL容量瓶中，定容至刻度，得3個供試品試液。另取2 mL容量瓶加入槲皮素對照品2 mg，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，得對照品溶液。用毛細管取以上溶液各5μL，于Merck硅膠G薄層板上分別點樣，以甲酸－甲苯－乙酸乙酯（0.5∶4∶5）為展開劑展開，取出后晾干，再噴以濃度為2%的AlCl3甲醇溶液于薄層板上，薄層板晾干后置于紫外燈（365 nm）下觀察，供試品與對照品色譜相同位置處顯示相同顏色斑點，見圖1。

圖1 鼠曲草熒光薄層色譜鑒別圖1、2、6、7、11、12.槲皮素對照品；3、8.江蘇樣品；4、9.湖北樣品；5、10.浙江樣品

檢測結(jié)果表明3種不同產(chǎn)地鼠曲草藥材TLC鑒別結(jié)果基本一致。

2.2 水分測定 取3種產(chǎn)地不同的鼠曲草各適量，按照《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅨH水分測定法第一法進行檢測，結(jié)果如表1所示。

表1 水分測定數(shù)據(jù)

樣品檢測結(jié)果顯示藥材含水量在7.72%～8.12%之間。

2.3 灰分測定

2.3.1 總灰分測定 各取3種產(chǎn)地不同的鼠曲草適量，按照《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅨK灰分測定法第一法進行檢測，設(shè)定溫度分別為500、550、600℃，結(jié)果如表2所示。

表2 總灰分測定

2.3.2 酸不溶性灰分測定 各取3種產(chǎn)地不同的鼠曲草適量，根據(jù)《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅨK灰分測定法第二法進行檢測，結(jié)果如表3所示。

表3 酸不溶性灰分測定

結(jié)果顯示在500～600℃范圍內(nèi)，兩項指標(biāo)幾乎不發(fā)生變化。總灰分：最高為18.72%，最低為14.19%；酸不溶性灰分：最高為11.33%，最低為7.68%。

2.4 浸出物測定

2.4.1 水溶性浸出物測定 按《中國藥典》2010版（一部）附錄ⅩA浸出物測定法第一法測定。

測定方法的選擇通過對同一批次鼠曲草采用水作溶劑，冷浸法與熱浸法浸出物含量的考察研究，從而確定適合的水溶性浸出物質(zhì)量控制方法，結(jié)果見表4。

表4 水溶性浸出法選擇

由表4可知，選用熱浸法。

樣品測定：采用熱浸法對3種不同產(chǎn)地的鼠曲草藥材進行檢測，檢測結(jié)果如表5所示。

2.4.2 醇溶性浸出物測定 按《中國藥典》2010版（一部）附錄ⅩA浸出物測定法第二法測定。

表5 熱浸法測定結(jié)果

醇溶性測定方法的選擇采用相同濃度的乙醇作溶劑，對鼠曲草分別用冷浸法與熱浸法測定浸出物含量，從而確定適合的醇溶性浸出物質(zhì)量控制方法，結(jié)果見表6。

表6 醇溶性浸出物測定方法選擇

由表6可知，選用乙醇熱浸法。

乙醇濃度的選擇以浸出物含量為指標(biāo)以同一批藥材為樣品進行檢測，考察不同濃度下的乙醇熱浸漬法，考查最佳乙醇浸出濃度，結(jié)果見表7。

表7 乙醇濃度的確定

由表7可知，采用70%乙醇溶液。

樣品測定取3個不同產(chǎn)地鼠曲草藥材，測定醇溶性浸出物含量，結(jié)果見表8。

表8 醇溶性浸出物測定結(jié)果

3 結(jié)論

本研究旨在對鼠曲草建立一種快捷、簡便的質(zhì)量控制方法，雖然亦可以采用HPLC法對其某一種成分進行測定，但考慮到產(chǎn)地差異、含量差異比較大，且目前無法確定哪一種成分為鼠曲草的主要有效成分，以某一種成分為其含量測定成分有一定的片面性和局限性，也會造成部分地區(qū)鼠曲草質(zhì)量不合格。采用TLC法，只對槲皮素進行定性鑒別，避免了上述缺點。

在TLC鑒別中，本次試驗采用的提取方法設(shè)計合理，提取較完全，雜質(zhì)去除較干凈，效果較好。以甲酸－甲苯－乙酸乙酯（0.5∶4∶5）為展開劑展開后，各成分分離度較好，在紫外燈（365 nm）下檢測，斑點清晰，對檢測結(jié)果基本無干擾。

本文首次使用《中國藥典》方法對鼠曲草藥材進行質(zhì)量控制，相關(guān)文獻未見報道。根據(jù)所測結(jié)果和鼠曲草各地實際差異，建議制定如下質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)：槲皮素TLC鑒別為陽性；水分、總灰分和酸不溶性灰分應(yīng)不超過8.12%、18.72%、11.33%；水溶性浸出物含量和醇浸出物含量不低于13.80%、16.38%。

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Study on TLC identification and quality inspection project of Gnaphalium affine

ZHANG Li-qing，QU Chang-you，LIBo-wen，XIAO Hai-yan，LU Li-feng
（Shandong Drug and Food Vocational College，Weihai264210，China）

ObjectiveTo establish a simple and rapid quality control method and standard for Gnaphalium affine quantification.MethodsSamples from three different regions were studied on TLC identification.Themoisture，ashes，water－soluble and ethanol－soluble extractives of these sampleswere determined to establish the quality control standard.Results Quality control standard was developed by the confirmed indicators：TLC identification，moisture，ash，water－soluble extract and alcohol－soluble extractof Gnaphalium affine.ConclusionThe quality control standard for the Gnaphalium affine established by this research could provide the testing basis for Shandong Province and other regions.

Gnaphalium affine；TLC identification；Moisture test；Ashes test；Water－soluble extractive；Ethanol－soluble extractive

R284.1

A

2095－5375（2014）09－0511－003

山東省食品藥品監(jiān)督管理局2011年立項項目——《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《山東省中藥飲片炮制規(guī)范》（2012年版）標(biāo)準(zhǔn)研究

張立慶，男，講師，研究方向：藥物質(zhì)量控制，E－mail：zlq5068＠163.com