HPLC法測(cè)定復(fù)方參花搽劑中苦參堿的含量

高 云，鄭祝華

（1.泰安市中心醫(yī)院，山東泰安271000；2.乳山市中醫(yī)院兒科，山東乳山264500）

HPLC法測(cè)定復(fù)方參花搽劑中苦參堿的含量

高 云1，鄭祝華2

（1.泰安市中心醫(yī)院，山東泰安271000；2.乳山市中醫(yī)院兒科，山東乳山264500）

目的建立用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方參花搽劑中苦參堿含量的方法。方法色譜柱為Econobase C18柱，柱溫為28℃，流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸（20∶80），流速為1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果苦參堿在1.038～20.76μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 4），平均回收率為99.35%，重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD為1.95%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

高效液相色譜；復(fù)方參花搽劑；苦參堿；含量測(cè)定

復(fù)方參花搽劑由苦參、金銀花、黃柏、白鮮皮、蛇床子等八味藥材組成，為我院自制制劑，有清熱燥濕、抗菌止癢之功效，臨床上可用于治療蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、皮膚瘙癢癥、皮癬等多種皮膚病。參考相關(guān)文獻(xiàn)［1～5］，本實(shí)驗(yàn)選擇苦參堿作為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中君藥苦參的含量進(jìn)行研究，其結(jié)果可為該制劑建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（日產(chǎn)島津LC20AT），BP211D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；苦參堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110805－200508，供含量測(cè)定用），乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。復(fù)方參花搽劑（泰安市中心醫(yī)院，批號(hào)：20130805，20130816，20130830）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Econobase C18（4.6 mm× 150 mm，5μm）；柱溫：28℃；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸（20∶80）；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20μL；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm［6］。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)不低于5 000，主色譜峰與相鄰其他色譜峰的分離度不小于2。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照品貯備液，冰箱4℃低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 供試品溶液的制備 精密量取復(fù)方參花搽劑10 mL，用氨試液調(diào)pH值至9～10，三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，合并3次提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙夂筠D(zhuǎn)移至1 mL容量瓶中定容到刻度，溶液經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過(guò)后備用，即得供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例，稱(chēng)取苦參以外的中藥材適量，模擬制劑的制備工藝制成不含苦參的陰性對(duì)照樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備不含苦參藥材的陰性對(duì)照品溶液。

2.5 系統(tǒng)實(shí)用性試驗(yàn) 取對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照溶液注入色譜儀中，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜中，與對(duì)照品溶液在同一位置有相同的色譜峰出現(xiàn)，陰性對(duì)照溶液在同一位置無(wú)干擾峰出現(xiàn)，處方中其他組分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 復(fù)方參花搽劑HPLC色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察 精密量取苦參堿對(duì)照品貯備液0.1、0.3、0.5、1、2 mL，置于100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配成系列濃度的溶液。經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，以苦參堿對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以苦參堿對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，苦參堿在1.038～20.76μg ·mL－1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y＝14 922.80X－11 460，其相關(guān)系數(shù)r＝0.999 4。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 吸取同一濃度的苦參堿對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得苦參堿峰面積，以峰面積計(jì)算苦參堿的精密度，其RSD為1.97%，小于3%，結(jié)果顯示儀器的精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 從同一批樣品取樣5份，按照“2.3”項(xiàng)下制備得供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20μL，記錄苦參堿峰面積，RSD計(jì)算結(jié)果為1.95%，表明重現(xiàn)性較好。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 吸取同一供試品溶液分別在0、 2、4、8、16 h進(jìn)樣20μL，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以苦參堿峰面積計(jì)算，其RSD為1.63%，表明穩(wěn)定性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知苦參堿含量一半的復(fù)方參花搽劑樣品（批號(hào)：20130816）9份，分別精密加入高（70%）、中（50%）、低（30%）3種質(zhì)量濃度的苦參堿對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析。平均加樣回收率為99.35%，RSD為2.52%，在95%～105%的方法可行區(qū)間范圍內(nèi)，符合含量測(cè)定的要求，說(shuō)明該檢測(cè)方法具有良好的準(zhǔn)確度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦參堿回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.11 樣品含量測(cè)定 分別取批號(hào)為20130805、20130816、20130830的3批復(fù)方參花搽劑樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，在上述HPLC條件下進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

苦參為復(fù)方參花搽劑的君藥，苦參堿系苦參中含量較高的生物堿，對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌等均有明顯的抑制作用［7］，故將苦參堿的含量作為該制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定該制劑含量。

經(jīng)對(duì)比不同檢測(cè)波長(zhǎng)下色譜峰的強(qiáng)度和分離度，確認(rèn)該制劑中苦參堿在210 nm檢測(cè)波長(zhǎng)有最大吸收，且干擾峰少，樣品峰能達(dá)到很好分離，保留時(shí)間為15.6 min左右，據(jù)此選擇210 nm作為測(cè)定苦參堿的檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相的選擇上曾使用不同配比乙腈－0.1%磷酸，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙腈－0.1%磷酸（20∶80）可以有效改善苦參堿峰形，抑制峰拖尾，理論塔板數(shù)符合相關(guān)要求，因此流動(dòng)相選擇乙腈－0.1%磷酸（20∶80）。

本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方參花搽劑的質(zhì)量控制。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：725.

［2］許乾麗，茅向軍，鮑家科.HPLC法測(cè)定復(fù)方梔子噴霧劑中苦參堿和氧化苦參堿的含量［J］.中國(guó)藥事，2009，23（3）：281－283.

［3］付秀娟，陳曉亮，朱大勝.HPLC法測(cè)定利咽靈合劑中苦參堿的含量［J］.中國(guó)藥師，2009，12（10）：1420－1422.

［4］劉瓊.高效液相色譜法測(cè)定五柏參洗液中苦參堿的含量中［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（30）：451－453.

［5］張立慶，張娜.HPLC法測(cè)定子花潔膚搽劑中苦參堿的含量［J］.齊魯藥事，2012，31（1）：15－16.

［6］李明松，許青.高效液相色譜法測(cè)定苦參中苦參堿的含量［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，22（5）：19－20.

［7］佘永紅，李璞，周順.HPLC法測(cè)定地錦草灌腸液中苦參堿的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，16（11）：90－91.

Determ ination ofmatrine in Compound Shenhua Liniment by HPLC

GAO Yun1，ZHENG Zhu-hua2
（1.Taian Central Hospital，Taian 271000，China；2.Department of Pediatrics，Rushan Traditional Chinese Medicine Hospital，Rushan 264500，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination ofmatrine in Compound Shenhua Liniment.MethodsThe column：Econobase C18，column temperature：28℃，Themobile phase：acetonitrile－0.1%phosphate（20∶80），the flow rate：1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 210 nm.ResultsThe linear range ofmatrine was 1.038～20.76μg·mL－1（r＝0.999 4），the average recovery was 99.35%，the RSD of repeatability test was 1.95%.ConclusionThemethod was simple and fast，the results were accurate and reproducible.

HPLC；Compound Shenhua Liniment；Matrine；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）09－0519－003

高云，女，主管藥師，研究方向：醫(yī)院制劑，E－mail：gaoyun_2008＠126.com