HPLC測定不同產地貝母中貝母辛的含量

鄒和平，彭騰，寇俊闖，王小琴，禹亞杰

·品種品質·

HPLC測定不同產地貝母中貝母辛的含量

鄒和平1，彭騰2，寇俊闖2，王小琴2，禹亞杰2

目的：對8種不同產地貝母中貝母辛的含量進行測定。方法：采用Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)色譜柱，流動相為乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL/min；柱溫：27℃；檢測波長：205nm。測定了8種不同產地貝母中貝母辛的含量。結果：不同產地貝母中貝母辛含量有一定的差異，其中新疆貝母含量最高為0.02734%，伊犁貝母和康定貝母含量次之，其他5種貝母含量較少。結論：本方法靈敏度高，而且簡便、準確、重現性好，可用于貝母的內在質量控制。

貝母；貝母辛；高效液相色譜法

貝母為百合科貝母屬（Fritillaria）多種植物的鱗莖，是我國具有悠久使用歷史的傳統中藥，味苦、性寒，有清熱潤肺、化痰止咳、散結等功能，用于熱咳嗽，咯痰帶血，瘰疬腫毒[1]。在我國貝母的原植物種類繁多，據《中國植物志》記載，我國產20 種和2變種，全國各省區多有分布，近年來通過調查及分類學研究，我國貝母屬植物己超過50種（變種）。但其治療疾病的用途不一樣，價值也有高低之分[2]。

近年來我國對各種貝母化學成分的研究陸續有報道，到目前為止己從貝母屬植物中先后分離出97種生物堿，弄清了73 種生物堿的化學結構，其中異構體生物堿就有55 種[3]。同時現代藥理學研究表明，貝母生物堿是其止咳、化痰和平喘等作用的有效成分[4]。而貝母辛(Peimisine)，是百合科貝母屬貝母中的有效化學成分之一，研究表明它可以作用于M受體，松弛平滑肌以達到平喘的作用[5]；而通過抑制血管緊張素而達到降壓的作用[6]。此外貝母辛還具有預防肝纖維化作用[7]。因此，貝母辛的含量測定對于評價藥材質量、保證用藥安全及控制制劑質量都有著重要意義。經文獻檢索發現針對貝母辛的研究領域多在結構的確定[8,9]。而對貝母辛的含量測定尚未見報道。本實驗采用高效液相色譜法，針對不同產地的貝母進行含量測定。結果表明，本方法靈敏度高，而且簡便、準確、重現性好。

1 試藥與儀器

1.1 實驗樣品

貝母樣品來源見表1。

表1 8種貝母及其產地

1.2 實驗試劑

貝母辛對照品（購于Sigma公司）；乙腈（色譜純）；氨水、甲醇、乙腈、二乙胺等試劑均為分析純。

1.3 實驗儀器

高效液相色譜儀（北京清博華科技有限公司，LC2000型，P1010 10 mL分析輸液泵，UV1000D雙波長紫外可見檢測器）；真空干燥箱（BE-ZK-27L，東莞貝爾試驗設備有限公司）；數顯恒溫水浴鍋(XMTB-02810207,浙江余姚工業儀表二廠)；電子分析天平(MINQIAO,FA2004N)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250mm，E76575)；HS2000色譜工作站；流動相：乙腈:0.2%二乙胺水溶液=40:60；流速：1.00mL﹒min-1；柱溫：27 ℃；檢測波長：205 nm；按貝母辛峰計算，理論塔板數在3000以上。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取貝母辛對照品適量于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得0.25 mg﹒mL-1的貝母素辛對照品溶液，備用(4℃下保存)。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取貝母樣品粉末(過四號篩) 2 g，置燒瓶中，加濃氨試液4 mL浸潤1小時，精密加入甲醇溶液40 mL，混勻，置85℃水浴中加熱回流2小時，放冷，濾過，置250 mL燒瓶中用旋轉蒸發儀蒸干，殘渣加甲醇溶液溶解，定容至5 mL，0.22 μm濾膜濾過，備用。

2.4 標準曲線的制備

精密量取貝母辛對照品溶液2.0 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl依次測定，以峰面積積分值自然對數為縱坐標，進樣量自然對數為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=16779X-6695.8，R2=0.9993。

圖1 貝母辛的標準曲線

2.5 方法學考察

2.5.1精密度試驗 取貝母辛對照品溶液進樣10 μl，按上述條件進行測定，重復6次，貝母辛峰面積積分值計算RSD=0.74%(n=6)，表明該方法精密度良好。2.5.2 重復性試驗 同批樣品，照供試品制備方法制備5份，各進10 μl，進樣檢測，結果RSD=1.8%，表明該方法重現性良好。

2.5.3穩定性試驗 取供試品溶液于0、2、4、6、8 h測定，結果表明供試品溶液在8 h內穩定性良好，RSD為2.3%。

2.5.4加樣回收率試驗 取已測得質量分數的貝母樣品0.2～0.3g，精密稱定，分別加入一定量的貝母辛對照品溶液，同供試品溶液的制備項下操作，制備供試溶液并測定，計算回收率，得貝母辛平均回收率為104.04%，RSD為4.04%(n=5)。

2.6 樣品的測定

按供試品溶液項下制備樣品溶液，取10 μl進樣，測定貝母辛的含量見表2。

表2 不同品種和不同產地貝母中貝母辛的含量

結果表明: 不同產地貝母中貝母辛含量有一定的差異，其中新疆貝母含量最高為0.02734%，伊犁貝母和康定貝母含量次之，其他5種貝母含量較少，其中梭砂貝母中貝母辛含量最低。

3 討論

從色譜圖上看，8種不同產地的貝母在此分離條件下，不僅貝母辛能夠很好地被指認，色譜圖上的其他成分的色譜峰也很好，因此，這種方法有待于繼續研究考察，進一步來確認其他的色譜峰，從而為貝母的成分研究及定量分析方法提供新的依據。

本實驗對10個不同產地平貝母樣品進行了測定，結果表明，不同產地貝母中貝母辛含量存在較大差異，因此應當注意產地與藥材質量的關系。此外，本實驗的測定結果為貝母辛的進一步提取分離研究也提供了可靠的依據。

[1] 徐薦琦,徐薦瑋.貝母的研究綜述[J].求醫問藥,2013,11(2): 319.

[2] 翟榮紅.貝母的品種區別與性狀鑒別[J].甘肅中醫,2009,22 (6):62.

[3] 韓靜.中藥貝母多樣性研究及質量考察[D].甘肅:蘭州大學, 2009.

[4] 張鵬,徐仿周,吳繼洲.貝母及其復方制劑中生物堿含量測定方法[J].醫藥導報,2004,23(4):261.

[5] 趙益,朱衛豐,劉紅寧,等.貝母辛平喘作用及機制研究 [J].中草藥,2009,40(4):597.

[6] Ping Li, Jing-Jing An. Puqienine E:An angiotensin converting enzyme inhibitory steroidal alkaloid from Fritillaria puqiensis[J]. Fitoterapia,2010,81:149.

[7] 劉琚,徐選福,郭傳勇,等.貝母辛對肝纖維化大鼠肝組織α—SMA表達的影響[J].中國中醫急癥,2013,22(8):1274.

[8] R.Shakirow,R.N.Nuriddinov.Alkaloid of Petilium Edumdi[J]. KSimiya Primdnykh Soedinenii,1965,l(6):384．

[9] 王鋒鵬,張格,唐心曜,等.貝母辛的結構修正[J].藥學學報, 1992,27(4):273．

（責任編輯： 胡慧玲）

Determination of peimisine in Beimu from different growing areas by HPLC

ZOU He-ping1, PENG Teng2, KOU Junchuang2, WANG Xiao-qin2, YU Ya-jie2//(1. Chongqing Taiji Group, Chongqing 401147;2. Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To determine the content of peimisine in 8 kinds of Beimu from different growing areas.Method:The separation was performed on a Kromasil C18(4．6 mm×250mm) column，and the mobile phase was consisted of methanol and 0.2% diethylamine solution. The fow rate was 1.00 mL﹒min-1.Temperature was 27 ℃.The UV detection wavelength was 205 nm.Result:Peimisine contents were different in different Beimu. Beimu from Xinjiang had the highest content of peimisine (0.02734%). The content of peimisine in Beimu from Yili and Kangding took the second place. The other 5 kinds of Beimu had less peimisine.Conclusion:The method is simple，accurate and can be used to control the internal quality of Beimu.

Beimu；Peimisine；HPLC

R 284

A

1674-926X(2014)03-002-02

1.太極集團有限公司，重慶 401147；2.成都中醫藥大學藥學院 教育部中藥材標準化重點實驗室中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

鄒和平，長期從事藥品生產與質量管理工作Tel:18602394688 Email:zouheping2008@126.com

彭騰，男，博士，副教授，主要從事中藥活性成分的篩選及物質基礎研究Tel:13880376673 Email:pengteng1973@sina.com

2013-11-27