板藍根中多糖的分離以及高效液相色譜分析

陸廣馬

(百色食品藥品檢驗所，廣西 百色 533000)

多糖是一類天然高分子化合物，廣泛存在于動物細胞膜、植物和微生物細胞壁中[1]。多糖用作藥物始于上個世紀40年代，隨著化學和生物學的發展和分離技術的提高，對糖類的研究再次成為人們關注的焦點。板藍根是我國最常見也是最著名的中藥之一，我國學者對其報道較多，主要有抗病毒、抗炎、清除氧自由基、免疫調節等作用[2-3]。當前對糖類的分析方法主要是以色譜技術為基礎的方法，另外是非色譜法——酶學方法。盡管酶學方法非常靈敏和具有很高的特異性，但易受到樣品中污染物引起的干擾。因此相比較而言，色譜技術在當前得到廣范使用[4]。本文運用高效液相色譜法檢測板藍根中的葡萄糖。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

板藍根藥材采集于江蘇省連云港市灌南縣板藍根藥材生產基地，粉碎后過40目篩備用。色譜工作站為Metrohm IC-Net、超聲波清洗器、隔膜真空泵、旋轉蒸發器RE.52A、78-1型磁力加熱攪拌器、恒溫箱、電爐、磁力攪拌器、恒溫水浴鍋、真空干燥箱、超純水系統、電子天平、萬能粉碎機。

試劑:葡萄糖標樣購于Sigma公司，NaOH購自天津市瑞金特化學品有限公司，80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、乙醚、冰乙酸、丙酮均為重慶川東化工(集團)公司生產。

1.2 板藍根多糖提取

取一定量的板藍根粉末，加入五倍量80%乙醇，回流2h，抽濾，殘渣烘干。稱取脫脂后板藍根粉末5.0g，用10倍量水超聲提取(40℃，100W，30min)，提取后離心取樣。

1.3 標準葡萄糖溶液配制

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖標準品100mg，置入100mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度搖勻待用。

1.4 色譜分析

分離柱:METROSEP CARB1(150mm ×4.0mm);淋洗液:6mmol/L NaOH溶液，再生液:200mmol/L NaOH;流速:1.0mL/min，進樣量:20μL，柱溫:32℃。

1.5 標準曲線繪制

在優化的色譜條件下，分析標準溶液，得到葡萄糖線性回歸方程為:Y=41.56X+20.06，r=0.9996，葡萄糖的最低檢測限為0.125mg/L。

2 結果

2.1 提取分析結果

超聲提取得到粗多糖，得率為95.78%，顯示了良好的效果。

2.2 重現性試驗

按照上述優化后的色譜條件，用20 mg/L的葡萄糖連續進樣5次，得到葡萄糖的峰高測定值的相對標準偏差(RSD)為 5.80%，保留時間的相對標準偏差 RSD為2.10%。

2.3 加標回收率試驗

移取2.5mL 1000mg/L葡萄糖儲備液，定容。移取板藍根粗多糖水解液5mL，加入50.0mg/L葡萄糖標準溶液1mL，并用1mol/L乙酸溶液定容至10mL，色譜分析計算加標回收率。結果顯示樣品的加標回收率為 95.9%～96.3%，均高于 95.5% 。見表 1。

2.4 樣品檢測實驗

將板藍根水解液用玻塞漏斗減壓抽濾，得到的濾液按照上述優化后的色譜條件進行色譜分析，樣品在前6min內均有系統峰出現，確定樣品中含有葡萄糖，并定量檢測出200mg樣品中含葡萄糖0.1069mg。

3 討論

當前板藍根應用比較廣泛，報道也比較多。研究認為板藍根70%乙醇提取液對二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用，可降低內毒素刺激小鼠巨噬細胞株引起的相關活性，抑制炎癥反應相關基因的表達。板藍根中含吲哚、嘌呤、嘧啶類成分，因此其可以發揮清熱解毒的作用[5-6]。

糖類是自然界中存在最多的有機化合物，也是重要的生物高分子化合物和信息物質。現在人們逐漸將微波、超聲波、酶法等應用于藥用植物中多糖成分的提取[7]。多糖的提取是根據多糖溶于水或酸、堿、鹽溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有機溶劑的特點，從不同材料中提取。我們超聲提取得到了粗多糖，得率為95.78%，顯示了良好的提取效果。同時在檢測中我們發現，在冷水浸提條件下，多糖的提取含量低;在沸水浸提條件下，雖然得到粗多糖含量很高，但單糖的含量降低。在溫水浸提條件下所得的單糖含量最高，可廣泛應用于日常生產研究。

在多糖的檢測中，常用方法包括高效液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法、高效毛細管電泳法等。氣相色譜法分析需要較煩瑣的樣品前處理過程，液相色譜法需先通過柱前衍生，毛細管電泳法缺乏直接的檢測信號等，離子色譜法費用比較高。高效液相色譜法具有簡單、快速、靈敏度高、結果準確等突出優點，對多糖的分析具有一定的參考及實際應用價值[8]。

總之，本文建立了中藥中多糖的分離以及高效液相色譜分析方法，可作為中藥中多糖提取方法的參考。

[1]徐晗，方建國，劉云海.板藍根最新研究進展[J].中草藥，2003，4(34):10-11.

[2]劉依，韓魯佳.微波技術在板藍根多糖提取中的應用[J].中國農業大學學報，2002，7(2):27.

[3]袁強，袁弘.文蛤多糖對小鼠調節血糖和抗應激功能的影響[J].中國現代應用藥學雜志，2007，24(2):113-114.

[4]張元琳，顧小紅，李德遠，等.當歸多糖對亞急性輻射損傷小鼠的防護作用研究[J].食品科學，2007，28(2):305-308.

[5]吳瓊，鄭成，寧正祥，等.堿溶性銀耳粗多糖的提取及其清除自由基作用的研究[J].食品科學，2007，28(6):153-155.

[6]劉貝貝，李小定，潭正林，等.菜籽餅粕中多糖的酸提取工藝優化[J].農業工程學報，2006，22(11):213-216.

[7]謝紅旗，周春山，杜邵龍，等.酶法提取、超濾分離香菇多糖新工藝研究[J].食品科學，2007，28(4):217-219.

[8]TOMMASO RI CATALDI，MASSIMILIANO ANGELOTTI，GIULIANA BIANCO.Determination of mono-and disaccharides in milk and milk products by high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection[J].Analytica Chimica Acta，2003，485(2):43-49.