反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液的含量

劉淑華

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧朝陽122000

反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液的含量

劉淑華

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧朝陽122000

目的建立反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液含量的方法。方法色譜柱：Kromasil C18（4.6mm× 150 mm，5μm）；流動相：0.005 mol/L磷酸氫二銨溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：248 nm；進樣體積：20μL。結(jié)果鹽酸氨溴索的線性范圍為0.060 04~1.501 00μg（r＝0.9999，n=5）；鹽酸氨溴索注射液的高、中、低3種濃度的平均加樣回收率為99.4%（RSD=0.6%，n=9）。結(jié)論該方法專屬性強、準確、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸氨溴索注射液含量的測定。

反相高效液相色譜法；鹽酸氨溴索注射液；含量測定

鹽酸氨溴索注射液適用于伴有痰液分泌異常或排痰功能不良的急慢性支氣管肺疾病的祛痰治療，尤其是慢性支氣管炎急性發(fā)作喘息型支氣管炎支氣管哮喘等癥[1]，其現(xiàn)行標準為國家食品藥品監(jiān)督管理局標準YBH21062005（屬于單頁試行標準）[2]，采用紫外分光光度法測定鹽酸氨溴索的含量，由于受降解產(chǎn)物的干擾，方法專屬性不強，本研究用反相高效液相色譜法[3]測定，方法專屬性強，準確，重現(xiàn)性好，可用于鹽酸氨溴索注射液含量的測定[4-17]。結(jié)果如下：

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：型號Waters e2695-2489；對照品：鹽酸氨溴索（批號：100599-200502，中檢所）；鹽酸氨溴索注射液（康哲制藥有限公司，批號：20130227、20130411、20130618）；乙腈：色譜純；磷酸、磷酸氫二銨：分析純，水：純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：0.005 mol/L磷酸氫二銨溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；流速：1.0 m L/min；柱溫：室溫；檢測波長：248 nm；進樣體積：20μL；理論塔板數(shù)以鹽酸氨溴索峰計算為8000；拖尾因子：1.04；鹽酸氨溴索與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液精稱鹽酸氨溴索對照品15.01mg，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得150.1μg/mL的溶液。

2.2.2 對照品溶液精取對照品儲備液5mL，置25mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為30.02μg/mL的溶液。

2.2.3 供試品溶液精取供試品適量，加流動相稀釋成30μg/mL的溶液。

2.3 專屬性考察

精取鹽酸氨溴索注射液適量（相當于鹽酸氨溴索1.5 mg），經(jīng)下列條件破壞：A.加鹽酸溶液（1.0 mol/L）5mL破壞20min后，加氫氧化鈉溶液（1.0mol/L）5mL中和；B.加氫氧化鈉溶液（1.0 mol/L）5 m L破壞20 min后，加入鹽酸溶液（1.0 mol/L）5 mL中和；C.160℃加熱2 h破壞；D.紫外光（254、365 nm）照射15 min。分別取上述各破壞產(chǎn)物，轉(zhuǎn)移至50 m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得經(jīng)破壞后的供試品溶液，照“2.1”項下條件進樣。由色譜圖得出：主峰與降解產(chǎn)物峰分離良好（分離度均大于1.5），表明此法專屬性強。見圖1。

圖1 專屬性色譜圖

2.4 線性關(guān)系

精取對照品儲備液1.0、5.0、10.0、20.0mL和25.0mL，分別置50mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣20μL。以進樣量（μg）為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線：Y=29 850.56X-6 348.82，r＝0.9999（n=5），表明：鹽酸氨溴索進樣量在0.060 04~ 1.501 00μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液連續(xù)進樣5次，峰面積的RSD為0.3%。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別經(jīng)室溫放置0、2、4、8、12 h后，進樣，峰面積的RSD為0.4%。表明供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗

取樣品（批號：20130227），按“2.2.3”項下制備供試品溶液5份，照“2.1”項下條件測定，測得含量均值為99.6%，RSD=0.3%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率測定

精取樣品（批號：20130227，100.4%）適量（約相當于鹽酸氨溴索0.75 mg）9份，分為三組，每組分別精密加入對照品儲備液3、5、7 mL（分別約相當于加入鹽酸氨溴索的量為0.4503、0.7505、1.0507 mg），按“2.2.3”項下制備成低、中、高3個濃度的供試品溶液（分別為“2.2.3”項下供試品溶液濃度的80%、100%、120%），照“2.1”項下條件測定加樣回收率。測定結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果（n=9）

2.9 樣品含量測定

取對照品溶液及三批樣品的供試品溶液，按“2.1”項下條件進樣測定，按外標法計算，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果（%）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

以流動相為溶劑，用島津UV-2550型紫外－可見分光光度計測定，鹽酸氨溴索最大吸收波長為248 nm，故定為測定波長。

3.2 流動相的選擇

實驗時曾選甲醇代替流動相中乙腈，但峰型較差，此法的色譜峰型對稱（拖尾因子為1.04），理論塔板數(shù)較高，符合系統(tǒng)適用性的要求；《中國藥典》2010年版二部新增關(guān)于流動相的選擇原則是：應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動相，必須使用時，應(yīng)盡可能選用含較低濃度緩沖液的流動相，曾用高、低兩種磷酸鹽濃度：0.01mol/L（《中國藥典》2010年版方法）、0.005mol/L（本法）進行比較，色譜峰型無明顯差異，故選用較低濃度的磷酸緩沖溶液作為流動相，有利于延長色譜系統(tǒng)的壽命。

3.3 方法專屬性

經(jīng)破壞實驗驗證，鹽酸氨溴索主峰與各降解產(chǎn)物分離良好，能夠排除降解產(chǎn)物的干擾，專屬性強，可有效地控制鹽酸氨溴索注射液的質(zhì)量。

3.4 方法學(xué)考察

本法線性范圍較寬，加樣回收率高，結(jié)果可靠準確，可用于鹽酸氨溴索注射液的含量測定。

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Determ ination of Am broxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC

LIU Shuhua
Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

Objective To establish amethod for the determination of Ambroxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC. Methods The determination was performed on a Kromasil C18column(4.6 mm×150 mm,5μm)with themobile phase consisted of 0.005mol/L diammonium phosphate solution(adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(48∶52) at ambient temperature.The flow rate was 1.0 mL/min.The detective wavelength was 248 nm.The injection volume was 20μL.Resu lts The liner range of Ambroxol Hydrochloride was 0.060 04-1.501 00μg(r＝0.9999,n=5).The average recovery was 99.4%(RSD=0.6%,n=9)for the three different levels of the added amount of Ambroxol Hydrochloride.Conclusion Thismethod is specific,accurate and reproducible.It can be used for determination of Ambroxol Hydrochloride Injection.

RP-HPLC;Ambroxol Hydrochloride Injection;Contentdetermination

R927.2

A

1673-7210（2014）01（b）-0111-03

2013-11-14本文編輯：衛(wèi)軻）

劉淑華（1971-），女，副主任藥師，從事藥品檢驗工作。