正交試驗優選鼻敏寧顆粒提取工藝

李躍輝 凌艷君 朱 沛 王 銀 彭 宇 易延逵

1.湖南省中醫藥研究院楊永華名老中醫藥專家傳承工作室，湖南長沙410006；2.南方醫科大學中醫藥學院，廣東廣州510515

正交試驗優選鼻敏寧顆粒提取工藝

李躍輝1凌艷君1朱 沛1王 銀1彭 宇1易延逵2

1.湖南省中醫藥研究院楊永華名老中醫藥專家傳承工作室，湖南長沙410006；2.南方醫科大學中醫藥學院，廣東廣州510515

目的優選鼻敏寧顆粒水提取工藝。方法采用L9（3）4正交試驗法，以浸膏得率、黃芪甲苷提取量為指標，對加水量、煎煮時間、煎煮次數進行優選。結果最佳提取工藝為藥材加水煎煮兩次，第1次加8倍量水，煎煮2 h，第2次6倍量水，煎煮1.5 h。結論優選的工藝合理，重復性好，樣品質量穩定。

鼻敏寧顆粒；正交試驗；水提取工藝；黃芪甲苷

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鼻敏寧顆粒處方系湖南省中醫藥研究院附屬醫院五官科主任醫師的經驗方，由黃芪、辛夷、赤芍等組成，臨床以湯劑入藥，用于外感風寒誘發的變應性鼻炎，癥見鼻癢、噴嚏連連、繼流清涕、鼻塞不通、嗅覺減退、易患感冒、反復不愈，或有自汗等。因其一直以來患者反應療效顯著，未見不良反應，擬在原湯劑應用療效確切的基礎上，通過提取、濃縮、干燥等工藝，制備成醫療機構制劑，以顆粒劑用于臨床，達到既能保持湯劑吸收較快、作用迅速的特點，又克服湯劑臨用時煎煮不便、服用量大、易霉敗變質等缺點，為臨床變應性鼻炎患者提供新的用藥選擇[1]。方中黃芪為君藥，本研究以浸膏得率及黃芪甲苷提取量為考查指標，采用正交試驗對加水量、提取次數、提取時間進行優選[2]，為提取工藝的確定提供依據[1-2]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀；Alltech3300蒸發光散射檢測器；Lichrospher C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm，江蘇漢邦科技有限公司）；T-214分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；HHS-4S型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（上海市南陽儀器有限公司）；101-2AB型電熱鼓風干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪、辛夷、赤芍等藥材均由湖南海川醫藥有限公司提供，經鑒定均符合《中國藥典》2010年版一部各藥味項下規定。黃芪甲苷對照品（批號：110781-200613，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用）；水為重蒸餾水，乙腈等為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 煎煮次數的選擇

按處方配比稱取黃芪、細辛等藥味，共105 g藥材，加水煎煮2次，第1次加8倍水，煎煮2 h，第2、3次均加6倍水，煎煮1.5 h，濾過，分別測定第1、2次與第3次煎煮的浸膏得率與黃芪甲苷提取量。試驗結果表明，以浸膏得率為考查指標，煎煮3次，浸膏得率為2.62%，黃芪甲苷提取量為0.81mg，第3次煎煮所占比例為9.77%；以黃芪甲苷提取量為考查指標，第3次煎煮所占比例為8.32%；說明2次煎煮已基本提取完全，故選擇煎煮2次的工藝。

2.2 正交試驗設計

試驗以飲片投料，根據預試結果結合筆者經驗，選擇浸膏得率與黃芪甲苷提取量為考察指標，對加水量（A）、煎煮時間（B）、煎煮次數（C）等條件進行優選，采用L9（34）正交表進行設計，其因素水平見表1。

表1 因素水平

2.3 浸膏得率測定[3]

按處方配比稱取各藥味（共105 g），按正交表設定方案進行煎煮，濾過，濾液合并，濃縮，定容至一定體積。精密吸取20 m L，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻0.5 h，迅速稱重，計算浸膏得率。

2.4 黃芪甲苷提取量測定[4-6]

2.4.1 色譜條件Lichrospher色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（35∶65）為流動相；蒸發光散射檢測器漂移管溫度為45℃，氣流量為1.5 L/min，增益為4。

2.4.2 供試品溶液的制備取“2.3”項下已定容的濾液，減壓濃縮，真空干燥得9份干膏，精密稱定重量。取干膏約1 g，精密稱定，加甲醇60 mL，加熱回流1 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內徑為1.5 cm，柱高為12 cm），以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 對照品溶液的制備取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。

2.4.4 系統適用性試驗分別精密吸取對照品溶液5、15μL，供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算。理論塔板數按黃芪甲苷峰計不低于4000，黃芪甲苷色譜峰與相鄰峰之間分離度大于1.5。結果見表2。

表2 正交試驗設計及結果

將正交試驗結果進行方差分析，結果見表3、4。

表3 浸膏得率方差分析

表4 黃芪甲苷提取量方差分析

3 討論

3.1 考察指標的選擇

變應性鼻炎屬祖國醫學中“鼻鼽”的討論范疇，一般多認為是由于肺脾腎陽氣不足或感風邪所致[7-8]。肺通竅于鼻，肺氣虛則鼻易受邪，如《靈樞·脈度篇》曰：“肺氣通于鼻，肺和則鼻能知香臭矣”，風寒束肺，肺氣不宣，每見鼻塞流涕，嗅覺失靈[9]。鼻敏寧處方即以補肺散寒，通竅止流為法組方，方中以黃芪補肺氣[10]，細辛性辛溫，能散寒祛風，通鼻竅，二者共為本方君藥[11]。黃芪主要含皂苷與多糖類成分，具有提高免疫功能的作用[12]，故選擇黃芪甲苷作為考察指標之一。

3.2 方差分析

對表3數據進行處理，由直觀分析可知，以浸膏得率為評價指標，A因素K1＞K3＞K2，B因素的K3＞K2＞K1，C因素的K1＞K2＞K3，即最佳提取工藝條件為A1B3C1。方差分析表明，A因素的影響差異無統計學意義（P＞0.05）；B因素的影響差異有統計學意義（P＜0.05）；C因素的影響差異有高度統計學意義（P＜0.01）。以黃芪甲苷提取量為評價指標時，A因素的K1＞K3＞K2，B因素的K3＞K2＞K1，C因素的K1＞K2＞K3，即最佳提取工藝條件為A1B3C1。方差分析表明，A因素的影響差異無統計學意義（P＞0.05）；B、C兩因素的影響差異有統計學意義（P＜0.05）。

3.3 最佳工藝確定

綜合浸膏得率與黃芪甲苷提取量兩個指標進行分析，A因素的影響均無顯著性差異，從節能省時考慮，擬選擇A3；B、C兩因素二個評價指標均以B3、C1結果為最佳。故確定最佳工藝為A3B3C1，即黃芪等藥味加水煎煮2次，第1次加8倍量水，煎煮2 h，第2次加6倍量水，煎煮1.5 h。

3.4 正交驗證試驗

由于所選方案A3B3C1未包括在正交設計9次試驗方案中，故對其進行驗證試驗。取與正交試驗用同批藥材，按方案A3B3C1要求的工藝條件及上述的實驗方法進行提取，測定浸膏得率與黃芪甲苷提取量，結果浸膏得率平均為24.12%，黃芪甲苷提取量為8.96mg，黃芪甲苷提取轉移率達59.6%，說明優選工藝基本合理。

3.5 生產考察

為了考查工藝的穩定性，按工藝優選結果進行了三批中試樣品的制備，投料量為20倍制劑處方量，并按制定質量標準（草案）的規定對其進行了檢測，結果成品得率在90%以上；性狀、檢查、含量測定等各項指標測定均符合規定；穩定性考察各項指標基本穩定。

[1]孫學惠，陳宇峰，吳瓊，等.正交試驗優選黃芪桂枝五物湯提取工藝研究[J].山西醫藥雜志，2013，42（5）：486-488.

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[3]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：283-284.

[4]陳驍勇，葛玉松.HPLC-ELDS法測定參芪五味子片中黃芪甲苷和酸棗仁皂苷A的含量[J].中國藥師，2012，15（12）：1743-1745.

[5]梁瑾，封士蘭.黃芪藥材的高效液相色譜指紋圖譜及主要成分的含量測定方法研究進展[J].西北藥學雜志，2012，9，27（5）：490-493.

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[9]徐春英，劉靜.中醫辨證治療變應性鼻炎的臨床療效觀察[J].中國中西醫結合雜志，2013，33（6）：852-853.

[10]王蘭娣，黃蕓.大劑量生黃芪治療變應性鼻炎臨床觀察[J].光明中醫，2013，28（1）：193-194.

[11]鄭文彬.中醫辨證治療過敏性鼻炎的療效[J].求醫問藥，2013，11（6）：23.

[12]鄭虎占，董澤宏，佘靖，等.中藥現代研究與應用[M].北京：學苑出版社，1998：3886.

Optim ization of extraction process for Bim inning Granule by orthogonal test

Ob jective To optimize the aqueous extraction process of Biminning Granule.M ethods The extraction rate and amount of astragaloside extraction as indexes,the water addition,decocting duration,times for decoction were optimized by L9(3)4orthogonal test.Results The optimal extraction processwas preferred as decocting twice,which was described as follows:in the first time,8 times of water addition of the granule for 2 h cooking and 6 times of water addition of the granule lasting 1.5 h in the second time.Conclusion The optimized process is reasonable with good repeatability and stable quality in samples.

Bimining Granule;Orthogonal test;Aqueous extraction process;Astragaloside

TQ461

A

1673-7210（2014）01（b）-0114-03

2013-11-07本文編輯：衛軻）

湖南省中醫藥科研計劃項目（編號2010057）。

李躍輝（1978-），女，湖南益陽人，碩士研究生，副研究員，主要從事中藥制劑與分析方面的工作。

易延逵（1975-），男，湖南懷化人，博士研究生，副教授，主要從事藥物新劑型、新技術方面的研究工作。