正交試驗優(yōu)選鼻敏寧顆粒提取工藝

李躍輝 凌艷君 朱 沛 王 銀 彭 宇 易延逵

1.湖南省中醫(yī)藥研究院楊永華名老中醫(yī)藥專家傳承工作室，湖南長沙410006；2.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515

正交試驗優(yōu)選鼻敏寧顆粒提取工藝

李躍輝1凌艷君1朱 沛1王 銀1彭 宇1易延逵2

1.湖南省中醫(yī)藥研究院楊永華名老中醫(yī)藥專家傳承工作室，湖南長沙410006；2.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣東廣州510515

目的優(yōu)選鼻敏寧顆粒水提取工藝。方法采用L9（3）4正交試驗法，以浸膏得率、黃芪甲苷提取量為指標(biāo)，對加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果最佳提取工藝為藥材加水煎煮兩次，第1次加8倍量水，煎煮2 h，第2次6倍量水，煎煮1.5 h。結(jié)論優(yōu)選的工藝合理，重復(fù)性好，樣品質(zhì)量穩(wěn)定。

鼻敏寧顆粒；正交試驗；水提取工藝；黃芪甲苷

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鼻敏寧顆粒處方系湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院五官科主任醫(yī)師的經(jīng)驗方，由黃芪、辛夷、赤芍等組成，臨床以湯劑入藥，用于外感風(fēng)寒誘發(fā)的變應(yīng)性鼻炎，癥見鼻癢、噴嚏連連、繼流清涕、鼻塞不通、嗅覺減退、易患感冒、反復(fù)不愈，或有自汗等。因其一直以來患者反應(yīng)療效顯著，未見不良反應(yīng)，擬在原湯劑應(yīng)用療效確切的基礎(chǔ)上，通過提取、濃縮、干燥等工藝，制備成醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，以顆粒劑用于臨床，達(dá)到既能保持湯劑吸收較快、作用迅速的特點，又克服湯劑臨用時煎煮不便、服用量大、易霉敗變質(zhì)等缺點，為臨床變應(yīng)性鼻炎患者提供新的用藥選擇[1]。方中黃芪為君藥，本研究以浸膏得率及黃芪甲苷提取量為考查指標(biāo)，采用正交試驗對加水量、提取次數(shù)、提取時間進(jìn)行優(yōu)選[2]，為提取工藝的確定提供依據(jù)[1-2]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀；Alltech3300蒸發(fā)光散射檢測器；Lichrospher C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm，江蘇漢邦科技有限公司）；T-214分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；HHS-4S型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（上海市南陽儀器有限公司）；101-2AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪、辛夷、赤芍等藥材均由湖南海川醫(yī)藥有限公司提供，經(jīng)鑒定均符合《中國藥典》2010年版一部各藥味項下規(guī)定。黃芪甲苷對照品（批號：110781-200613，由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用）；水為重蒸餾水，乙腈等為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 煎煮次數(shù)的選擇

按處方配比稱取黃芪、細(xì)辛等藥味，共105 g藥材，加水煎煮2次，第1次加8倍水，煎煮2 h，第2、3次均加6倍水，煎煮1.5 h，濾過，分別測定第1、2次與第3次煎煮的浸膏得率與黃芪甲苷提取量。試驗結(jié)果表明，以浸膏得率為考查指標(biāo)，煎煮3次，浸膏得率為2.62%，黃芪甲苷提取量為0.81mg，第3次煎煮所占比例為9.77%；以黃芪甲苷提取量為考查指標(biāo)，第3次煎煮所占比例為8.32%；說明2次煎煮已基本提取完全，故選擇煎煮2次的工藝。

2.2 正交試驗設(shè)計

試驗以飲片投料，根據(jù)預(yù)試結(jié)果結(jié)合筆者經(jīng)驗，選擇浸膏得率與黃芪甲苷提取量為考察指標(biāo)，對加水量（A）、煎煮時間（B）、煎煮次數(shù)（C）等條件進(jìn)行優(yōu)選，采用L9（34）正交表進(jìn)行設(shè)計，其因素水平見表1。

表1 因素水平

2.3 浸膏得率測定[3]

按處方配比稱取各藥味（共105 g），按正交表設(shè)定方案進(jìn)行煎煮，濾過，濾液合并，濃縮，定容至一定體積。精密吸取20 m L，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻0.5 h，迅速稱重，計算浸膏得率。

2.4 黃芪甲苷提取量測定[4-6]

2.4.1 色譜條件Lichrospher色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（35∶65）為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為45℃，氣流量為1.5 L/min，增益為4。

2.4.2 供試品溶液的制備取“2.3”項下已定容的濾液，減壓濃縮，真空干燥得9份干膏，精密稱定重量。取干膏約1 g，精密稱定，加甲醇60 mL，加熱回流1 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為12 cm），以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 對照品溶液的制備取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。

2.4.4 系統(tǒng)適用性試驗分別精密吸取對照品溶液5、15μL，供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計不低于4000，黃芪甲苷色譜峰與相鄰峰之間分離度大于1.5。結(jié)果見表2。

表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

將正交試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3、4。

表3 浸膏得率方差分析

表4 黃芪甲苷提取量方差分析

3 討論

3.1 考察指標(biāo)的選擇

變應(yīng)性鼻炎屬祖國醫(yī)學(xué)中“鼻鼽”的討論范疇，一般多認(rèn)為是由于肺脾腎陽氣不足或感風(fēng)邪所致[7-8]。肺通竅于鼻，肺氣虛則鼻易受邪，如《靈樞·脈度篇》曰：“肺氣通于鼻，肺和則鼻能知香臭矣”，風(fēng)寒束肺，肺氣不宣，每見鼻塞流涕，嗅覺失靈[9]。鼻敏寧處方即以補肺散寒，通竅止流為法組方，方中以黃芪補肺氣[10]，細(xì)辛性辛溫，能散寒祛風(fēng)，通鼻竅，二者共為本方君藥[11]。黃芪主要含皂苷與多糖類成分，具有提高免疫功能的作用[12]，故選擇黃芪甲苷作為考察指標(biāo)之一。

3.2 方差分析

對表3數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，由直觀分析可知，以浸膏得率為評價指標(biāo)，A因素K1＞K3＞K2，B因素的K3＞K2＞K1，C因素的K1＞K2＞K3，即最佳提取工藝條件為A1B3C1。方差分析表明，A因素的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；B因素的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C因素的影響差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。以黃芪甲苷提取量為評價指標(biāo)時，A因素的K1＞K3＞K2，B因素的K3＞K2＞K1，C因素的K1＞K2＞K3，即最佳提取工藝條件為A1B3C1。方差分析表明，A因素的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；B、C兩因素的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3.3 最佳工藝確定

綜合浸膏得率與黃芪甲苷提取量兩個指標(biāo)進(jìn)行分析，A因素的影響均無顯著性差異，從節(jié)能省時考慮，擬選擇A3；B、C兩因素二個評價指標(biāo)均以B3、C1結(jié)果為最佳。故確定最佳工藝為A3B3C1，即黃芪等藥味加水煎煮2次，第1次加8倍量水，煎煮2 h，第2次加6倍量水，煎煮1.5 h。

3.4 正交驗證試驗

由于所選方案A3B3C1未包括在正交設(shè)計9次試驗方案中，故對其進(jìn)行驗證試驗。取與正交試驗用同批藥材，按方案A3B3C1要求的工藝條件及上述的實驗方法進(jìn)行提取，測定浸膏得率與黃芪甲苷提取量，結(jié)果浸膏得率平均為24.12%，黃芪甲苷提取量為8.96mg，黃芪甲苷提取轉(zhuǎn)移率達(dá)59.6%，說明優(yōu)選工藝基本合理。

3.5 生產(chǎn)考察

為了考查工藝的穩(wěn)定性，按工藝優(yōu)選結(jié)果進(jìn)行了三批中試樣品的制備，投料量為20倍制劑處方量，并按制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案）的規(guī)定對其進(jìn)行了檢測，結(jié)果成品得率在90%以上；性狀、檢查、含量測定等各項指標(biāo)測定均符合規(guī)定；穩(wěn)定性考察各項指標(biāo)基本穩(wěn)定。

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Optim ization of extraction process for Bim inning Granule by orthogonal test

Ob jective To optimize the aqueous extraction process of Biminning Granule.M ethods The extraction rate and amount of astragaloside extraction as indexes,the water addition,decocting duration,times for decoction were optimized by L9(3)4orthogonal test.Results The optimal extraction processwas preferred as decocting twice,which was described as follows:in the first time,8 times of water addition of the granule for 2 h cooking and 6 times of water addition of the granule lasting 1.5 h in the second time.Conclusion The optimized process is reasonable with good repeatability and stable quality in samples.

Bimining Granule;Orthogonal test;Aqueous extraction process;Astragaloside

TQ461

A

1673-7210（2014）01（b）-0114-03

2013-11-07本文編輯：衛(wèi)軻）

湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目（編號2010057）。

李躍輝（1978-），女，湖南益陽人，碩士研究生，副研究員，主要從事中藥制劑與分析方面的工作。

易延逵（1975-），男，湖南懷化人，博士研究生，副教授，主要從事藥物新劑型、新技術(shù)方面的研究工作。