應用EP7-A2方案對唾液酸測定的干擾評價

陳燕敏，芮球紅

應用EP7-A2方案對唾液酸測定的干擾評價

陳燕敏，芮球紅

目的探討美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）EP7-A2文件對唾液酸（SA）檢測試劑盒抗干擾性能進行評價。方法根據CLSI EP7-A2文件，對SA檢測試劑盒進行干擾評價試驗。結果配對差異實驗結果顯示0.03 g/L維生素C、1450 FTU乳糜對SA測定無干擾，342 mol/L游離膽紅素、342mol/L結合膽紅素、5 g/L血紅蛋白對高低濃度SA測定均有干擾。游離膽紅素、結合膽紅素對SA測定可產生線性干擾，血紅蛋白對低濃度SA測定產生線性干擾，高濃度SA測定產生非線性干擾。結論利用外源性的干擾物質，依據EP7-A2文件，應用SPSS軟件進行統計分析和作圖，是一個非常實用的干擾評價方法。

N-乙酰神經氨酸；干擾試驗；EP7-A2文件

唾液酸（SA）存在于人體各種組織，是真核細胞膜上糖蛋白、糖脂的重要部分，參與機體的多種生理功能。在細胞的惡性轉化時起著特殊的作用，其含量與惡性腫瘤細胞的增殖、轉移、浸潤、細胞黏附性降低、腫瘤抗原性及逃避宿主細胞的免疫監視等密切相關，是一種廣泛有效的腫瘤標志物[1]。根據美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI）2005年通過的指南文件EP7-A2《臨床化學干擾試驗—批準指南》[4]，本文對SA檢測試劑盒抗干擾能力進行了評估，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑日立7180全自動生化分析儀：購于日本日立公司；SA檢測試劑盒：購于寧波美康生物科技股份有限公司，批號20130315；游離膽紅素（FBil），批號L9BOL34；結合膽紅素（CBil），批號JH11-5491，均為百靈威公司生產；血紅蛋白（Hb），批號20121203，上海瑞齊生物科技有限公司；維生素C（vit C），批號：SLBC7863V；中/長鏈脂肪乳注射液（C6-C24），批號：80DH066，華瑞制藥有限公司生產。

1.2 實驗方法

1.2.1 配對差異實驗[2-3]

1.2.1.1 樣本準備參考EP7-A2文件，選擇2個濃度的新鮮血清作為基礎樣本。用基礎樣本分別以1∶20比例稀釋5種干擾物貯存液、空白液作測試樣本和對照樣本，稀釋后測試樣本中游離膽紅素、結合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白濃度分別是342mol/L、342mol/L、0.03 g/L、1450 FTU和5 g/L。

1.2.1.2 重復次數的確定計算最大允許干擾值（dmax）/批內標準差（s）比值，查dmax/s與重測次數對應表[2]，得出2個濃度水平重復測定次數。其中s由基礎樣本重復測定10次計算而得；dmax為各項目臨床意義差別標準。本研究設定SA的dmax為基礎樣本均值的10%。

1.2.1.3 干擾效應分析按EP7-A2文件要求以交互順序進行測定，根據EP7-A2文件進行干擾效應分析。將所得數據進行干擾效應的“點估計”，即測試樣本均值和對照樣本均值的差值（dobs）與臨界值（dc）比較，如果點估計dobs≥dc說明存在干擾。

1.2.2 干擾劑量效應實驗[2-3]參考EP7-A2文件，以高濃度樣本（H）和低濃度樣本（L）按比例混合成5個系列濃度樣本，其配置要求方法為L、75%L+25%H、50% L+50%H、25%L+75H、H。按升序-降序-升序順序重復測定3次，根據EP7-A2文件進行劑量效應分析。

1.3 統計方法采用SPSS16.0統計軟件進行統計分析和作圖。

2 結果

2.1 配對差異實驗SA低濃度樣本均值為64.7 mg/dl、s為0.21；高濃度樣本均值為91.5 mg/dl、s為0.19。高、低濃度水平重測次數均為3次。0.03 g/L維生素C、1450 FTU乳糜對SA測定均無干擾；342mol/L游離膽紅素、342mol/L結合膽紅素、5 g/L血紅蛋白對高、低濃度SA檢測有干擾。見表1、2。

2.2 劑量效應實驗游離膽紅素、血紅蛋白對低濃度SA測定可產生線性負干擾，結合膽紅素對低濃度SA測定產生線性正干擾（=0.003+61.08，2=0.9389）；非結合膽紅素和血紅蛋白對低濃度SA測定產生線性負干擾（分別為=－0.0074+57.8，2=0.9334；=－0.24+58.02，2=0.9698）干擾效應結果見封四彩圖14。游離膽紅素、結合膽紅素對高濃度SA測定可產生線性負干擾（分別為=－0.0035+81.6，2=0.9574；=－0.0011+87.352，2=0.9238），血紅蛋白對高濃度SA測定產生非線性干擾（= 0.24692－1.6503+82.551，2=0.9475），干擾效應結果見封四彩圖15。

表1 游離膽紅素、結合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對低濃度SA測定的干擾

表2 游離膽紅素、結合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對高濃度SA測定的干擾

3 討論

SA作為腫瘤的一種非特異性標志物，被廣泛應用于肝癌、肺癌、胃癌、惡性血液病及頭頸鱗狀細胞癌等診斷及鑒別中，也被用作常見惡性腫瘤分期的參考指標及病例治療效果的評價指標[4]。

近年來，干擾物質作為影響臨床化學檢驗結果的一大因素而越來越受到重視。對臨床實驗室來說，分析干擾評價試驗可以驗證和確認干擾聲明，研究明確的干擾物質引起的結果差異[3]。CLSI通過不懈努力和完善后于2005年11月通過了EP7-A2文件，EP7-A2提供了2種分析干擾評價方案：（1）干擾篩選，（2）利用患者樣本作偏倚分析。本研究利用EP7-A2文件“干擾篩選”方法評估臨床常見的干擾物游離膽紅素、結合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對SA試劑測定的影響，初步對其臨床應用抗干擾性能進行評價，結果顯示，342 mol/L游離膽紅素、342 mol/L結合膽紅素和5 g/L血紅蛋白對高低濃度SA測定有干擾。同時根據文件規定，對于經干擾篩查證明對被評價方法有明顯干擾作用的可能干擾物游離膽紅素、結合膽紅素和血紅蛋白，對其在不同濃度下對測定結果的干擾效應進行了評價，5個濃度系列的劑量效應實驗結果顯示，游離膽紅素、結合膽紅素對SA測定可產生線性干擾，血紅蛋白對低濃度SA測定產生線性干

擾，高濃度SA測定產生非線性干擾。檢測試劑的抗干擾物質的能力是對檢測結果質量靠性的保證[5]。利用外源性的干擾物質，依據EP7-A2文件，應用SPSS軟件進行統計分析和作圖，是一個非常實用的干擾評價方法。

[1]Varki A.Sialic acids in human health and disease[J].Trends In Molecular Medicine,2008,14(8):351-60.

[2]Wayne PA.EP7-A Interference Testing in Clinical Chemistry[S].Clinical and Laboratory Standards Institute,2002.

[3]徐建華,何敏,柯培鋒,等.CLSIEP7-A2文件在臨床化學分析干擾試驗中的應用評價[J].檢驗醫學,2010,25(12):97l-974.

[4]劉沛,王舒,李變榮.血清唾液酸在惡性腫瘤診斷中的臨床應用[J].檢驗醫學與臨床,2012(06):687-688.

[5]呂賽平,伍志杰,鄒學森.臨床化學檢驗中干擾物質的篩選[J].江西醫學檢驗,2007, 25(6):610-613.

10.3969/j.issn.1671-0800.2014.11.071

R446

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1671-0800(2014)11-1449-02

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