RHOA/ROCK-2信號通路在甲狀腺髓樣癌中的表達及意義

汪穎厚，陳安杰，王斌，楊棟，辛世杰，蔡相軍

（1.中國人民解放軍第202醫院普通外科，沈陽110812；2.中國醫科大學附屬第一醫院血管甲狀腺外科，沈陽110001）

RHOA/ROCK-2信號通路在甲狀腺髓樣癌中的表達及意義

汪穎厚1，陳安杰1，王斌1，楊棟2，辛世杰2，蔡相軍1

（1.中國人民解放軍第202醫院普通外科，沈陽110812；2.中國醫科大學附屬第一醫院血管甲狀腺外科，沈陽110001）

Expression of RHOA/ROCK-2 Signaling Pathway in Medullary Thyroid Carcinoma and Its ClinicalSignificance

采用免疫組織化學染色方法檢測RHOA、ROCK-2蛋白在甲狀腺髓樣癌（MTC）組織及癌旁組織中的表達情況。結果顯示：MTC中RHOA、ROCK-2蛋白表達水平較癌旁甲狀腺組織中明顯增高，二者的表達與患者的性別、年齡及TNM分期無關，而ROCK-2與淋巴結轉移有關。RHOA、ROCK-2的表達可能對MTC的發生和發展有重要作用。

甲狀腺髓樣癌；RHOA；ROCK-2；轉移；免疫組織化學

甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）是甲狀腺癌中比較少見的類型，約占所有甲狀腺惡性腫瘤的4%～10%［1］，屬中度惡性甲狀腺癌。MTC具有多灶性的特點，淋巴結轉移出現較早，且有遺傳傾向，預后一般［2］。近年來甲狀腺癌發病率迅速增加，MTC的發病率也隨之升高［3］，但導致其發生發展的具體機制目前尚未明確。研究表明，RET和RAS原癌基因突變可導致甲狀腺濾泡旁C細胞內外區蛋白構象的改變，誘導細胞增生過度而發生惡變，引發MTC［4］。而細胞的惡性增殖與多種信號通路的異常激活密切相關。RHOA/ROCK-2信號通路受多種上游因子的調控，通過調節其下游NFκB的轉錄活性，在眾多生理及病理過程中發揮作用，尤其在細胞的增殖、骨架重排、遷移和代謝以及血管重塑等方面起著關鍵作用［4，6］。實驗證明，RHOA、ROCK-2蛋白在多種惡性腫瘤中存在過表達，并在其發生、發展及侵襲過程中起重要作用［7］。然而，RHOA/ROCK-2在MTC中的表達及作用目前鮮有報道。本研究擬檢測RHOA、ROCK-2蛋白在MTC中的表達水平，旨在探討RHOA/ROCK-2信號通路是否與MTC的發生、發展存在相關性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源及一般資料：收集中國人民解放軍第202醫院及中國醫科大學附屬第一醫院2008年至2012年術后病理確診為MTC的石蠟樣本30例，包括癌組織及癌旁組織。30例石蠟樣本中，男14例，女14例；年齡24～74歲，中位年齡47歲。依據2013年NCCN標準臨床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期11例。有淋巴結轉移者17例，無淋巴結轉移者13例。

1.1.2 主要試劑：RHOA、ROCK-2多克隆抗體（Santa Cruz公司，美國）均為大鼠抗人抗體，兔抗大鼠二抗（北京中杉金橋公司）；SP法免疫組織化學試劑盒、DAB顯色液（福州邁新公司）。

1.2 方法

組織形態學檢查：取標本中段做4 μm切片，行HE染色及免疫組織化學染色（RHOA抗體稀釋比例為1∶100，ROCK-2抗體稀釋比例為1∶400）。奧林巴斯AX70U、BX61+DP71成像系統采集圖像，在高倍鏡下隨機計數4個視野，以細胞質呈棕黃色為陽性，計算陽性細胞率，以無陽性細胞或陽性細胞＜10%為陰性（-），陽性細胞≥10%為陽性（+）。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 組織學檢查結果

30例MTC及癌旁組織中，RHOA在MTC組織中呈陽性表達27例，陽性表達率90.00%（27/30），ROCK-2在MTC組織中呈陽性表達24例，陽性表達率83.33%（24/30）；癌旁甲狀腺組織中無RHOA陽性表達，陽性表達率為0（0/30），癌旁甲狀腺組織中ROCK-2陽性表達1例，陽性表達率3.33%（1/30）（圖1）。RHOA、ROCK-2在MTC組織中的表達顯著高于癌旁組織（P＜0.01），差異有統計學意義（表1）。

2.2 RHOA、ROCK-2的表達與MTC臨床病理特征的關系

如表2所示：RHOA、ROCK-2的表達均與患者的性別、年齡及TNM分期無關，而ROCK-2與淋巴結轉移有關，差異有統計學意義（P＜0.04）。

3 討論

甲狀腺癌是最常見的內分泌惡性腫瘤，而MTC較少見，其惡性程度明顯高于甲狀腺乳頭狀腺癌（papillary thyroidcarcinoma，PTC）和甲狀腺濾泡狀腺癌（follicular thyroid carcinoma，FTC）［8］。文獻報道，MTC的10年生存率約為80%，而PTC和FTC的10年生存率分別為92%和90%［2］。目前公認的MTC主要發病原因是由RET基因突變引起，大量研究已確認RET基因突變是MTC發病的主要分子病因學基礎［4］，約94%的遺傳性MTC和70%的散發性MTC是由RET基因突變引起。但MTC是否還有其他發病機制，目前尚無定論。惡性腫瘤的發生、發展與組織細胞內的基因變化關系密切，某個或多個基因的缺失或激活都可能造成細胞的惡性增殖。RHOA/ROCK-2信號通路受多種上游因子調控，也可以影響多個下游因子，目前已知該通路與Wnt及Notch等多個經典信號通路存在著極為緊密的關系［9，10］，而國內外已有文獻報道Wnt信號通路與甲狀腺惡性腫瘤的發生發展密切相關［11，12］。RHOA/ROCK-2信號通路一旦被激活，將會影響其下游多種因子，如轉錄因子NFκB、基質金屬蛋白酶（matrixmetallo proteinase，MMP）、金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitor of metallo proteinase，TIMP）等，從而參與腫瘤的發生、發展及浸潤和轉移［13］。

圖1 癌旁組織及MTC HE染色及RHOA、ROCK-2免疫組織化學結果×200

表1 RHOA、ROCK-2在MTC及癌旁組織中的組織學檢查結果分析

表2 RHOA/ROCK-2信號通路與PTC臨床病理特征的關系

目前為止，RHOA/ROCK-2信號通路與MTC發生、發展的相關研究甚少。本研究采用免疫組織化學技術檢測了MTC中RHOA、ROCK-2蛋白的表達情況，并根據免疫組織化學結果評估RHOA、ROCK-2與MTC患者的年齡、性別、腫瘤分期及淋巴結轉移的相關性。免疫組織化學檢測結果發現：30例MTC及癌旁組織中，MTC中RHOA陽性27例（90.00%），ROCK-2陽性24例（83.33%），癌旁甲狀腺組織中RHOA陽性0例（0），癌旁甲狀腺組織中ROCK-2陽性1例（3.33%），RHOA、ROCK-2在MTC中的表達明顯高于癌旁組織。統計學結果顯示：RHOA、ROCK-2的表達均與患者的性別、年齡及TNM分期無關，而ROCK-2的表達與淋巴結轉移有關。

本研究結果證明RHOA、ROCK-2在MTC中表達水平明顯升高，且MTC患者ROCK-2的高表達與腫瘤淋巴結轉移有關。盡管這些結果不能直接證明RHOA/ROCK-2信號通路與MTC的發生、發展存在著必然的聯系，但結合國外及其他領域的相關研究結果［14］，RHOA、ROCK-2極有可能與MTC乃至所有甲狀腺腫瘤的發生和發展存在相關性。本研究例數相對較少，未檢測RET基因的變異情況，而且缺乏RHOA、ROCK-2基因水平的相關研究，今后我們會完善與之相關的基因水平實驗，并在細胞水平上繼續探尋RHOA/ROCK-2信號通路與MTC的增殖、遷移、侵襲等方面的相關性。總之，闡明RHOA/ROCK-2信號通路對MTC發生、發展的作用機制有著重要的醫學價值。

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（編輯 王又冬）

R736.1

A

0248-4646（2014）04-0364-03

汪穎厚（1986-），男，醫師，碩士.

王斌，E-mail：202wangbin@sina.com

2013-12-19

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