ATM基因單核苷酸多態性與肺癌易感性的關系研究

白露，于洪，王鶴潼，趙玉霞

（1.中國醫科大學附屬第一醫院放療科，沈陽110001；2.遼寧省腫瘤醫院放療科，沈陽110042；3.中國醫科大學附屬第四醫院放療科，沈陽110032）

ATM基因單核苷酸多態性與肺癌易感性的關系研究

白露1，于洪2，王鶴潼3，趙玉霞3

（1.中國醫科大學附屬第一醫院放療科，沈陽110001；2.遼寧省腫瘤醫院放療科，沈陽110042；3.中國醫科大學附屬第四醫院放療科，沈陽110032）

目的研究毛細血管擴張性共濟失調癥突變基因（ATM）上rs373759（ATM126713G/A）位點基因單核苷酸多態性與肺癌易感性之間的關系。方法研究對象為北方地區漢族人群，采用病例對照研究的方法，193例肺癌患者（病例組）來自中國醫科大學附屬第一醫院，對照組211例來自沈陽陸軍總醫院同期就診的非腫瘤患者，按性別、年齡（±5歲）、吸煙狀況與病例頻數匹配。采用Taqman real-time PCR方法進行（ATM126713G/A）單核苷酸多態性的基因分型。SPSS13.0軟件包進行數據分析。χ2檢驗比較人口學特征、相關危險因素暴露及SNP基因型在病例與對照之間分布的差異；單因素和多因素logistic回歸分析計算比值比（OR）及95%可信區間（CI）。結果ATM126713G/A的基因型分布頻率在病例組和對照組之間無統計學差異（P＞0.05），G等位基因攜帶者患肺癌的風險與A等位基因攜帶者患肺癌的風險比較無統計學差異（P＞0.05）。結論本研究未發現北方漢族人群中ATM基因單核苷酸多態性與肺癌易感性相關。

肺癌；ATM基因；單核苷酸多態性；易感性

肺癌是最為常見的惡性腫瘤之一?？偵媛实偷闹饕蚴怯捎?0%的肺癌患者發現時均為晚期。因此，早期診斷和治療是提高肺癌患者存活率的關鍵。除了吸煙是明確的影響因素外，家族遺傳易感性所起的作用也逐漸為人們所重視［1］。近些年，全基因組關聯研究（genome-wide association study，GWAS）就篩選出許多SNP與肺癌易感性相關，如染色體15q24-25上的rs1051730、rs8034191位點，5p15.33區域上的rs402710和rs2736100位點等已經明確與肺癌易感性相關［2～8］。共濟失調毛細血管擴張征突變（ataxia-telangiectasia mutated，ATM）基因屬于DNA修復基因，是一種腫瘤抑制基因，其編碼產物ATM蛋白激酶在DNA損傷修復過程中發揮關鍵作用，多個研究表明其基因的胚系突變或基因多態性可導致個體對多種腫瘤易感［9，10］。雖然目前已經有關于ATM基因單核苷酸多態性與肺癌易感性的研究報道［11］，但由于種族、地理環境等因素的限制仍存在有爭議的結果。本研究擬采用病例-對照方法探討ATM基因rs373759（ATM126713G/A）位點單核苷酸多態性對肺癌發病的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究所有對象為北方地區漢族人群，患者之間、對照之間、患者與對照之間彼此均無親緣關系。病例組來自中國醫科大學附屬第一醫院193例原發性肺癌患者，有明確的病理診斷，其中鱗癌67例，腺癌48例，小細胞肺癌57例，其他21例。對照組來自沈陽陸軍總醫院同期就診的211例非腫瘤患者，按性別、年齡（±5歲）、吸煙狀況與病例頻數匹配。所有研究對象均在2009年9月至2011年12月期間募集。

1.2 研究方法

1.2.1 調查方法：采用統一制定調查表，由2名培訓的調查員對病例及對照進行流行病學調查，調查內容包括每個研究對象詳細的人口學資料、發病年齡、吸煙史、家族患癌史、職業史、手術史、放化療史，組織類型。非吸煙者指終生吸煙少于100支的個體。所有調查資料經過反復檢查、核對和編碼后，用Excel軟件進行數據錄入。外周血標本采集使用枸櫞酸鈉抗凝試管，每人采血約2 mL，在-20℃～-80℃的冰箱中凍存。

1.2.2 實驗方法：集中進行基因組DNA提取，方法采用酚-氯仿法：提取后測OD值確定DNA的原始濃度，再倍比稀釋到30～100 ng/μL的終濃度備用。采用Taqman real-time PCR方法進行ATM基因單核苷酸多態性的基因分型，ATM126713G/A SNP探針信息：探針1：5′dye-VIC，3′dye-MGB等位基因G；探針2：5′dye-FAM，3′dye-MGB，等位基因A。引物Forward序列GCTGAGAGAGAAGGAAAAGTGATGC，引物Reverse序列AATAGGAAAGTCTTAAGCTGGAGAG）在ABI 7500熒光定量PCR儀上進行PCR反應及熒光信號讀取。擴增條件為：95℃預變性10 min；92℃變性30 s，60℃退火以及延伸1 min；共47個循環。以SDS（美國應用生物系統公司）軟件Allelic Discrimination程序進行終點分析，通過檢測不同等位基因所標記的FAM和VIC熒光強度，判斷待測樣本的多態性基因型。

1.3 統計學處理

利用SPSS 13.0軟件進行數據整理分析，所有的統計檢驗均為雙側概率檢驗，以P＜0.05為有統計學差異。以χ2檢驗檢查比較人口學特征、相關危險因素暴露及SNP基因型在病例與對照之間分布的差異；以擬合優度χ2檢驗檢查對照的Hardy-Weinberg分布平衡情況；以單因素和多因素logistic回歸計算比值比（odds ratio，OR）及其95%可信區間（confidence interval，CI）。

2 結果

2.1 病例組和對照組的一般特征比較

病例組與對照組患者的一般特征見表1。所有研究對象相互間無血緣關系，均為遼寧地區人群。病例組中位年齡58歲（27～77歲），男性占78.2%，吸煙占74.1%，對照組43例無法知道吸煙狀態，統計時已排除。2組患者年齡、性別比較無統計學差異（P＞0.05）。

表1 兩組患者一般特征比較Tab.1 Patient characteristics

2.2 2組ATM126713G/A的基因型和等位基因分布檢測結果

對照組在ATM126713G/A的基因型分布頻率經χ2檢驗，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05）。ATM126713G/A的基因型（GG、GA、AA）分布頻率兩組無統計學差異（P=0.830），見表2。應用單因素分析和多因素分析ATM126713G/A位點G/A等位基因攜帶與肺癌的易感性的相關性，結果顯示不同等位基因攜帶者患肺癌的風險無統計學差異（P＞0.05），見表3。

表2 2組ATM126713G/A基因型的分布頻率比較［n（%）］Tab.2 Genotype distribution frequency in two group［n（%）］

表3 2組ATM126713基因型與肺癌易感性的相關性比較Tab.3 Genotype frequencies in lung cancer case group and control groups

3 討論

不同的基因背景可以造成某些疾病不同的易感性，對于人類基因多態性與某些疾病之間關系的研究已成為必然。人類基因多態性已漸漸成為解釋某些疾病在不同人群中有著不同發病率、臨床表現、治療反應及預后的內在機制。肺癌是死亡率很高的疾病，目前還沒有十分有效的治療方法，所以早期篩查和預防尤為重要。易感基因的研究有助于早期發現易感人群并實施預防措施。研究發現，與肺癌易感性密切相關的基因很多，如ras、myc、KRAS2、ATM基因等。其中ATM基因是目前研究較多的與肺癌密切相關的基因［11，12］。

ATM基因位于染色體11q22.3，長度為150 kb，具有66個外顯子，內含子100～11 000 bp。突變分析研究ATM是共濟失調毛細血管擴張征的致病基因［13］。ATM基因能通過間接使細胞周期停止在G1/ S，S和G2/M期來防止DNA的損傷；激活DNA的修復通路；如果DNA的損傷對正常細胞是有害的，那么它就不會被修復，反而可以誘導其凋亡。ATM蛋白對雙鏈斷裂損傷反應和保持遺傳的穩定性、癌癥的易感性方面都有非常重要的作用［14］。因此，如果ATM基因出現功能改變或缺失，會導致細胞周期檢測點和DNA損傷修復的異常、凋亡敏感性增加、染色體不穩定及輻射敏感性增強，從而導致癌癥易感性增加。

ATM基因具有多個SNP位點，Kim等［11］檢測了ATM基因的4個多態性位點，只有IVS62+60G＞A與肺癌易感性相關，A等位基因攜帶者患肺癌風險高于與G等位基因攜帶者。夏文進等［1］對中國肺癌患者和對照組的研究也證實了這一結果。但是基因多態性的研究可能因樣本量、種族、區域的不同存在差異。我們研究了北方漢族人群中肺癌患者ATM基因的rs373759（ATM126713G/A）位點的多態性。該位點作為ATM基因的標簽SNP［15］，可以代表整個基因的單核苷酸多態性位點。本研究結果顯示：ATM126713G/A的基因型分布頻率在肺癌組和對照組之間無統計學差異（P＞0.05），單因素分析和多因素分析結果顯示ATM126713G/A的G等位基因攜帶者患肺癌的風險與A等位基因攜帶者相比無統計學差異（P＞0.05），提示ATM基因多態性在北方漢族人群中與肺癌的易感性可能沒有相關性。

不同的腫瘤研究、不同的研究方法所得出的結論不一致可能與每個研究單位的實驗條件、研究對象的個體數量差異有關。由于ATM基因具有多個SNP位點，進一步選取多個基因位點，對DNA修復基因聯合分析，擴大研究樣本量可能更有利于研究單核苷酸多態性與肺癌易感性的相關性。

［1］夏文進，蘇丹，劉鵬，等.ATM基因單核苷酸多態性與非小細胞肺癌易感性的研究［J］.中國癌癥雜志，2010，20（2）：121-124.

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［3］Hung RJ，McKay JD，Gaborieau V，et al.A susceptibility locus for lung cancer maps to nicotinic acetylcholine receptor subunit genes on 15q25［J］.Nature，2008，452（7187）：633-637.

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［10］魯強，張志磊，鄒存華，等.卵巢上皮性腫瘤組織ATM基因表達缺失及其臨床意義的探討［J］.中華腫瘤防治雜志，2011，18（10）：799-801，804.

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（編輯 武玉欣）

Correlation Study between ATM Gene Single Nucleotide Polymorphismsand Susceptibility to Lung Cancer

BAILu1，YU Hong2，WANG He-tong3，ZHAOYu-xia3
（1.DepartmentofRadiation Oncology，The FirstHospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110001，China；2.DepartmentofRadiation Oncology，Liaoning Cancer and Institute，Shenyang 110042，China；3.DepartmentofRadiation Oncology，The fourth Affiliated Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110032，China）

ObjectiveTo investigate the association ofATMgene rs373759（ATM126713G/A）single nucleotide polymorphism（SNP）with susceptibility to lung cancer.MethodsA hospital-based case-control study was conducted.All subjects were unrelated ethnic Han Chinese in Liaoning province.The case group consisted of 193 diagnosed histologically lung cancer patients and 211 controls were selected from cancer-free patients at the same time.The SNP of rs373759（ATM126713G/A）was analyzed by Taqman real-time PCR method.All statistical analysis were performed with statistical product and service solutions（SPSS）v13.0.Demographic characteristics，risk factors，distribution differences of SNP genotype between case group and controls were analyzed by χ2test.ORand 95%CI were calculated using univariate and multivariate logistic analysis.ResultsThere was no significant relationship in genotype distribution frequency ofATM126713G/A between the case and control group（P＞0.05）.The Allele inATM126713G/A showed no association with lung cancer（P＞0.05）.ConclusionATMgene may not be associated with susceptibility to lung cancerin Han Chinese in North China.

lung cancer；ATMgene；single nucleotide polymorphisms；susceptibility

R730.1

A

0258-4646（2014）12-1121-04

沈陽市科技攻關課題（1091149-9-00）

白露（1983-），女，主治醫師，博士. E-mail：bailudg@163.com

2014-10-09

網絡出版時間：