一種準(zhǔn)確測定靈孢多糖含量的方法

解艷　呂文博

摘 要：目的：建立準(zhǔn)確測定靈孢多糖含量的方法。方法：采用蒽酮硫酸法，紫外分光光度計(jì)在620nm檢測吸收度，以測得的吸收度與其對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)算回歸方程，回歸曲線的相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。對(duì)此方法改進(jìn)，摸索出影響含量結(jié)果不穩(wěn)定的因素，準(zhǔn)確測定含量。結(jié)果：重復(fù)性，精密度均符合規(guī)定。結(jié)論：本方法可用于準(zhǔn)確測定靈孢多糖的含量。

關(guān)鍵詞：靈孢多糖；含量；分析

多糖的含量測定方法有蒽酮硫酸法、苯酚硫酸法、滴定法。靈孢多糖注射液的含量測定方法采用蒽酮硫酸法[1]，采用此法測定含量結(jié)果不穩(wěn)定，重復(fù)性及重現(xiàn)性均較差，通過對(duì)方法中冰水浴溫度、溶液搖勻方式、測定時(shí)間摸索，現(xiàn)方法重復(fù)性，精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果均符合規(guī)定。實(shí)驗(yàn)方法如下。

1 實(shí)驗(yàn)條件

1.1 儀器 TU-1801紫外可見分光光度計(jì)

SK-Ⅰ快速混勻器

1.2 試藥

硫酸（分析純）

批號(hào)：20130129

來源： 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司

蒽酮（分析純）

規(guī)格：25克

批號(hào)：050619

來源： 上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠

D-無水葡萄糖

批號(hào)：110833-200904

來源：中國食品藥品檢定研究院

2 方法

溶液的制備：（1）對(duì)照品溶液的制備：按照對(duì)照品的說明書， 干燥葡萄糖對(duì)照品，取0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的制備：精密量取靈孢多糖溶液（4.5mg/ml）1.5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為供試品溶液。（3）0.2%蒽酮試劑的制備：取蒽酮0.2g，溶于100ml濃硫酸中，蒽酮試劑使用前一小時(shí)配制好，蒽酮試劑放置時(shí)間太久會(huì)變色，影響含量測定。（4）空白對(duì)照溶液：水。（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0和8.0ml，分別置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。精密量取上述對(duì)照品溶液1.0ml，分別置具塞試管中，置冰水浴中，分別加入5.0ml蒽酮試劑，搖勻，各管加完后浸入沸水浴中，加熱1分鐘，加塞。自水浴重新沸騰起，開始記時(shí)，10分鐘后取出，用自來水冷卻，室溫放置10分鐘，立即在620nm的波長處分別測定吸收度，以測得的吸收度與其對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)算回歸方程，回歸曲線的相關(guān)系數(shù)不得低于0.99。

按（5）項(xiàng)下方法，供試品每次四個(gè)管，三次試驗(yàn)含量結(jié)果見表1。

結(jié)果表明：三次試驗(yàn)中，每次四支管平行性較差。試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)采用冰袋加入自來水的方式制備的冰水浴溫度高于零度，加入蒽酮試劑后，蒽酮顏色迅速加深，蒽酮試劑已與多糖反應(yīng)，加入蒽酮后手動(dòng)無法混勻，振搖后仍有分層，對(duì)此方法在這兩點(diǎn)進(jìn)行改進(jìn)：采用加入冰塊的方式，制備冰水浴，測定溫度為零度；采用快速混勻器，幾秒鐘即可混勻。改進(jìn)后：蒽酮試劑加入后，溶液顏色為蒽酮試劑的顏色，無加深。

按（5）項(xiàng)下方法，供試品每次四個(gè)管，三次試驗(yàn)含量結(jié)果見表2。

結(jié)果表明：三次試驗(yàn)中，每次四支管平行性仍較差。供試品測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，吸收值極不穩(wěn)定，上下浮動(dòng)幅度較大，測定結(jié)果不準(zhǔn)確。為保證室溫放置10分鐘后能夠立即測定，將空白對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液的六支管與供試品的四支管分別放入沸水浴中，保證了供試品溶液室溫放置10分鐘后立即測定。

按（5）項(xiàng)下方法，供試品每次四個(gè)管，五次試驗(yàn)含量結(jié)果見表3。

結(jié)果表明：經(jīng)兩次改進(jìn)方法后，五次試驗(yàn)，每次四支管平行性很好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差即變異系數(shù)最大為2.11%，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果較好，五次試驗(yàn)，以每次試驗(yàn)結(jié)果的平均值計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果為1.28%。試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。

3 結(jié)束語

本試驗(yàn)按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)極易忽視冰水浴、搖勻、室溫放置10分鐘立即測定，這三點(diǎn)，對(duì)照品溶液制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線截距應(yīng)趨于零。

參考文獻(xiàn)

[1]化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)[S].靈孢多糖注射液.endprint