HPLC測定痛風貼中姜黃素的含量

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(長春中醫藥大學，長春 130117)

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·方藥研究·

HPLC測定痛風貼中姜黃素的含量

苗艷平，王丹，廉冬雪，張小東，王沛*

(長春中醫藥大學，長春 130117)

目的 建立痛風貼制劑的質量控制標準。方法 采用高效液相色譜法(HPLC)測定姜黃素的含量，色譜柱：Agilent C18色譜柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流動相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；檢測波長：428 nm,柱溫：(30±2) ℃。結果 姜黃素在0.025～0.150 μg范圍內與峰面積線性關系良好，平均回收率為99.7%，RSD為0.7%。結論 該試驗方法操作簡單，提取物性質穩定，重復性好，檢測結果準確、可信，可為痛風貼制劑質量控制提供科學依據。

痛風貼；姜黃素；高效液相色譜法

痛風貼制劑是以姜黃、萆 、木瓜、烏藥等為主要原料藥制成的純中藥復方制劑，具有活血化瘀，消腫止痛，排除血尿酸，疏風通絡等功效。本文研究采用HPLC測定痛風貼中姜黃素的含量，進一步完善該制劑質量標準研究。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器 LCC-10AT型高效液相色譜設備，期中包含LC-10AT輸液泵設備、LC-15C輸液泵、SPD-10AV紫外可見檢測儀器、色譜工作站；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋；AL204電子天平；KQ-250型超聲波處理器。

1.2 試劑 甲醇色譜純，冰醋酸優級純,乙腈色譜純,其余化學試劑均為分析純。

1.3 藥品 姜黃素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號A2K8-8GZG，規格約20 mg)；姜黃購自吉林大藥房，經長春中醫藥大學鑒定教研室鑒定為藥典所載正品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Agilent C18色譜柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流動相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；檢測波長：428 nm，柱溫：(30±2)℃；理論塔板數按姜黃素峰計算，不低于4 000。

2.2 試液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取姜黃素對照品適量，加乙腈-4%醋酸(48∶52)溶解并制成每1 mL含姜黃素10 μg的溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為對照溶液[1]。

2.2.2 供試品溶液的制備 取復方藥材適量，研成細粉，取粉末約1 g，精密稱定，置實驗燒瓶中，精密吸入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取30 min，稱定重量，再用甲醇補足回餾提取損失的重量，搖勻，濾過，初濾液另器盛裝，再接取續濾液，精密吸取續濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液[2]。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 取除姜黃以外的其他藥材，按藥典要求制備陰性對照品,按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液[3]。

2.3 系統適應性實驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，按2.1項下色譜條件分別進樣20 μL。結果：陰性樣品色譜在姜黃素相應的位置上無吸收峰，表明陰性樣品對測定無干擾。

2.4 線性關系試驗 分別吸取對照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL注入液相色譜設備，測定。以標準品姜黃素的進樣量(X)為橫坐標，以測試設備所獲峰面積(A)為縱坐標[4]，進行數理統計的線性回歸處理，得回歸方程：Y=7 7750X112 510(r=0.999 8)。結果表明，姜黃素在0.02～0.15 μg范圍內與測試設備所獲峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 精密吸取姜黃素對照品溶液10 μL，按上述色譜條件連續進樣6次,測定姜黃素峰面積的RSD為0.90%。實驗結果表明所用實驗儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液20 μL，室溫放置，分別于0、1、2、3、6 h進樣，測定其姜黃素面積積分值，峰面積的RSD為1.87%。實驗表明所制供試品室溫放置6 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批復方樣品粉末，按上述方法制備供試品實驗溶液，按上述色譜條件，測定其姜黃素含量，連續測定6次。結果平均質量含量為1.086%,RSD為1.47%。表明本品含量測定方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 采用加樣回收率測定法[5],分別取已知含量的供試品粉末共9分，分別加入姜黃素對照溶液(0.1 mg/mL)4、5、6 mL各3分，分別按上述方法制備供試品溶液[6]。各取20 μL注入液相色譜儀器中,記錄實驗結果，同時計算回收率。結果平均回收率為99.7%，RSD為0.74%[7]。

2.9 樣品含量測定 精密量取上述所制供試品溶液20 μL，注入同一臺液相色譜儀器，按外標法測定，以峰面積計算，結果測得制劑中姜黃素含量為1.035%。

3 小結

通過對試驗過程的多方考察和驗證，經過科學的數理統計學方法的校驗等的研究，筆者確定，本試驗儀器和方法的精密度良好，試驗方法操作簡單，提取物性質穩定，質量檢測方法和結果準確、可信。

[1]鄧航,陳薇,黃桂紅,等.HPLC法測定姜黃素明膠微球中姜黃素的含量[J].華夏醫學,2011,24(2):125-127.

[2]畢曉黎,孫冬梅,羅文匯,等.HPLC法同時測定復方姜黃微囊中姜黃素和胡椒堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(2):20-22.

[3]李富賢,楊亮,米彩峰.HPLC測定骨傷黃藥散中姜黃素含量[J].中外醫療,2010(30):118-119.

[4]楊以平,張師愚.HPLC法同時測定如意金黃散中大黃素、姜黃素、小檗堿的含量[J].遼寧中醫藥大學學報,2012,14(9):213-214.

[5]斯俊英.HPLC法測定如意金黃軟膏中姜黃素的含量[J].海峽藥學,2011,23(6):70-72.

[6]張立新,易翠華.RP-HPLC法測定四味姜黃膠囊中姜黃素的含量[J].中國藥事,2010,24(2):170-181.

[7]王巖,陳洪濤,盧方正,等.HPLC法測定四味姜黃湯散中姜黃素的含量[J].中國藥劑學雜志,2011(5):15-16.

DeterminationofCurcuminContentinGoutpatchbyHPLC

MIAO Yanpin,WANG Dan,LI Dongxue,ZHANG Xiaodong,WANG Pei*

(Changchun university of Chinese medicine,Changchun 130117,China)

ObjectiveTo establish Gout-patch quality control standards.MethodsUsing HPLC to determine the content of curcumin,chromatographic column:Agilent C18 chromatographic column (46 mm×250 mm,5 Micron);Mobile phase:acetonitrile and 4% acetic acid (48:52);wavelength by detection:428 nm and column temperature:(30±2)℃.ResultsCurcumin has a good linear relationship with peak area in the scope of 0.025 ug～0.025 ug.The average recovery was 99.67% and RSD was 0.74%.ConclusionThe test method operation is simple and the properties of extractives are stable.It has good repeatability.The detection results are accurate and credible which can provide scientific basis for a Gout-patch quality control.

gout-paste;curcumin;HPLC

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.01.008

吉林省中醫藥管理局中藥研究課題(2012-049)。

苗艷平(1971-)，女，大學本科，實驗師。研究方向：藥代動力學與質量標準研究。

] 王 沛，教授，碩士研究生導師，電話：13578701293，電子信箱:wapa1988@163.com。

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2095-6258(2014)01-0020-03

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