Cx43在骨肉瘤組織中的表達及臨床意義

高 飛，李 偉,于明克

(中國人民解放軍第251醫院 1急診科， 2病理科，河北 張家口 075000)

細胞的存活與功能的發揮是靠細胞與細胞之間的間隙連接來實現的，這種連接通過神經、激素等信號構成正負反饋系統，進而有序精確地調控生長發育、新陳代謝等活動。資料顯示，多種惡性腫瘤組織中，細胞間隙連接蛋白43(connexin 43，Cx43)普遍存在低表達或不表達，如胰腺癌、肺癌、胃癌等[1-3]。但Cx43在骨肉瘤組織中的相關研究未見報道，本研究采用免疫組織化學(EnVisionTM)法檢測骨肉瘤組織中Cx43表達的情況，并探討其發病機制及對生物學行為的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇中國人民解放軍第251醫院2007年2月至2013年2月收治的骨肉瘤患者70例，并經臨床病理診斷為骨肉瘤，且僅收集發生在長骨的骨肉瘤標本，因為發生在其他部位(如頜骨、骨盆、脊柱等)的腫瘤無法完全切除會影響實驗的合理性。骨肉瘤患者中男38例、女32例，年齡10～39(20±2)歲，≥20歲者14例，<20歲者56例；腫瘤直徑≥7 cm者36例，<7 cm者34例；骨肉瘤組織學類型[4]：成骨型、成軟骨型、成纖維型，分別為55例、10例和5例。分期根據國際分期標準執行：Ⅰ期與Ⅱ期共34例，Ⅲ期與Ⅳ期共36例。肺組織轉移者28例，無遠處轉移者42例。癌細胞增值指數(Ki-67)≥75%者51例，<75%者19例。所有患者均為首次住院治療。同時隨機取距骨肉瘤0.3 cm處組織30例作為對照組。

1.2主要試劑與方法 Cx43即用型兔抗人單克隆抗體及其配套試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。免疫組織化學采用EnVisionTM兩步法：石蠟標本制成4 μm切片,60 ℃烤片1 h；常規二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化；微波-枸櫞酸抗原修復；3% H2O2作用10 min滅活內源性過氧化物酶；非免疫動物血清封閉液室溫孵育10 min，阻斷非特異性著色；滴加Cx43抗體，室溫下孵育2 h； 室溫下二抗聚合物增強劑孵育30 min；室溫下三抗酶標抗鼠/兔聚合物孵育30 min；DAB顯色；蘇木素復染，二甲苯透明，中性樹膠封片。陽性對照為已知陽性切片，陰性對照用PBS代替一抗。

1.3結果判斷 Cx43以細胞質或細胞膜出現棕黃色、棕褐色或淡黃色染色為陽性。根據在5個以上高倍鏡視野下，陽性細胞所占比例計數：1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%。染色強度：淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐或棕褐色為3分。兩者計分相乘>1分為陽性[5]。

1.4統計學方法 應用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計數資料用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1Cx43在骨肉瘤、骨肉瘤旁組織中的表達 Cx43在骨肉瘤細胞著色以胞質為主，骨肉瘤旁細胞著色以胞膜為主；骨肉瘤組織和骨肉瘤旁組織的陽性率比較差異有統計學意義(χ2=47.75，P<0.01)(表1)。

表1 Cx43在骨肉瘤、骨肉瘤旁組織中表達的比較

2.2Cx43的表達與骨肉瘤臨床病理因素的關系 在骨肉瘤臨床病理因素中，Cx43的表達與腫瘤大小、臨床分期、肺轉移、增殖指數(Ki-67)有關，差異均有統計學意義(P<0.05)，但與年齡、性別、組織學類型無關，差異無統計學意義(P>0.05)(表2)。

表2 Cx43的表達與骨肉瘤臨床病理因素的關系

3 討 論

細胞之間的連接包括緊密連接、橋粒、間隙連接，而間隙連接由間隙連接蛋白所構成[6]，并通過細胞間隙連接通訊進行細胞間的信息和能量物質交換，進而調控細胞的增殖和分化、內環境穩定、新陳代謝等生理過程。Cx43是Cx家族中重要的間隙連接蛋白，因其編碼相對分子質量為43×103的單肽而得名。資料顯示，Cx43在心肌組織、卵巢顆粒細胞、上皮細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞等多種組織表達[7]，而在惡性腫瘤組織中呈現表達缺失或低表達[2-3,7-8]。本研究結果顯示，Cx43在骨肉瘤組織中的表達遠遠低于骨肉瘤旁組織，可見Cx43的低表達參與了骨肉瘤的發生。進一步分析發現，Cx43在骨肉瘤組織中的表達與性別、組織學類型無關，差異無統計學意義，但與年齡、腫瘤大小、臨床分期、肺轉移及增殖活性(Ki-67)有關，表明Cx43在骨肉瘤中表達越低，其轉移性越大，臨床分期越高，因而，其可間接反映患者的病情狀態。增殖指數Ki-67是衡量細胞增生活性的重要指標，其在正常組織中無表達或低表達，而在惡性腫瘤組織中則強表達，且其表達越強，瘤細胞浸潤、轉移的概率越大[9]。本研究顯示，在增殖指數Ki-67高表達組中Cx43呈現低表達，兩者表達趨勢不一致，因而推測Cx43的高表達有可能會抑制腫瘤細胞的增殖活性，進而影響瘤細胞浸潤轉移。資料顯示，轉染Cx43基因的腺細胞通過提高其Cx43基因及蛋白表達水平，改善細胞間隙連接通訊功能，進而引起其侵襲性及增殖活性降低[10]。孫志華等[11]研究Cx43在卵巢癌中的表達時發現，卵巢癌細胞Cx43的表達量均顯著少于正常卵巢細胞，且耐藥組顯著少于敏感組，差異有統計學意義。

總之，Cx43在骨肉瘤組織中呈現低或無表達，其表達水平在一定程度上影響瘤細胞的生物學特性，因而臨床有必要檢測其在組織中的狀態，以利于綜合判斷病情及指導臨床用藥等。然而，如何提高患者Cx43的表達水平及其安全性還需進一步探討。

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