IGF-1、Survivin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及相關(guān)性分析

龐 蕾，胡海霞，李 偉※

(1.尚義縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 尚義 076750； 2.中國人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

宮頸癌是第二位最常見的女性惡性腫瘤，其以鱗狀細胞癌最常見，占60%～80%[1]。腫瘤細胞的形成是細胞失控性、無限性增殖的表現(xiàn)，這一過程是多種細胞因子、多種基因共同參與的結(jié)果。胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)被認為與組織細胞的增殖、分化、凋亡關(guān)系密切，而生存蛋白(Survivin)是迄今發(fā)現(xiàn)的作用最強的凋亡抑制因子[2-3]，但兩者在宮頸鱗狀細胞癌組織中的研究少見。本研究主要探討IGF-1、Survivin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及其與宮頸鱗狀細胞癌的臨床病理特征的關(guān)系和兩者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2009年1月至2012年2月尚義縣醫(yī)院收治的經(jīng)臨床病理醫(yī)師診斷為宮頸鱗狀細胞癌的患者75例、宮頸上皮內(nèi)瘤變患者35例、慢性宮頸炎患者30例，將其不同疾病列為三組。宮頸鱗狀細胞癌患者年齡29～66(47±1)歲，年齡<47歲者49例，≥47歲者26例；腫瘤直徑<3 cm者6例，≥3 cm者69例；宮頸上皮內(nèi)瘤變患者年齡27～59(41±2)歲。慢性宮頸炎患者年齡26～57(40±4)歲。組織學類型分類[4]：角化型20例、非角化型50例、小細胞型5例。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年修訂的宮頸腫瘤TNM分期標準：Ⅰ期11例，Ⅱ期19例，Ⅲ期25例，Ⅳ期20例。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者54例，無轉(zhuǎn)移者21例。遠處轉(zhuǎn)移者25例，無遠處轉(zhuǎn)移者50例。癌細胞增殖指數(shù)(Ki-67)≥75%者68例，<75%者7例；癌細胞p53陽性者61例，陰性者14例。所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1.2主要試劑和方法 即用型鼠抗人IGF-1單克隆抗體、即用型兔抗人Survivin多克隆抗體及相關(guān)配套試劑均由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供。染色采用免疫組織化學法(EnVisionTM)，步驟參照檢測試劑盒說明書進行。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3判斷標準 IGF-1著色以細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色為陽性，應用陽性細胞百分比法進行結(jié)果整理。陰性：陽性細胞<1%；弱陽性(+)：陽性細胞2%～25%；中度陽性(++)：陽性細胞26%～50%；強陽性(+++)：陽性細胞>51%[5]。Survivin以細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒染色為陽性，顯微鏡下隨機選擇10個有代表性的視野，計算陽性細胞占鏡下細胞的百分比，其比值>10%為陽性表達[6]。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1IGF-1、Survivin在宮頸病變組織中的表達 IGF-1在慢性宮頸炎組織的胞質(zhì)和胞核中均未著色，顯示為陰性(圖1，見封三)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、宮頸鱗狀細胞癌組織病變中的腫瘤細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，顯示為陽性(圖2、3，見封三)。Survivin在慢性宮頸炎組織無胞質(zhì)著色，顯示為陰性(圖4，見封三)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、宮頸鱗狀細胞癌組織病變中的腫瘤細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，顯示為陽性(圖5、6，見封三)。IGF-1在宮頸鱗狀細胞癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織中陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，IGF-1在宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性表達率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和慢性宮頸炎組(χ2=3.89，P<0.05；χ2=25.67，P<0.01)。Survivin在宮頸鱗狀細胞癌組織宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織中陽性表達率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，Survivin在宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性表達率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織(χ2=6.40，P<0.05；χ2=22.46，P<0.01)(表1)。

圖1 圖2 圖3

圖4 圖5 圖6

表1 IGF-1、Survivin在宮頸病變組織中的陽性表達 [例(%)]

2.2IGF-1、Survivin的表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理因素的關(guān)系 在宮頸鱗狀細胞癌相關(guān)臨床病理因素中，IGF-1的表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處臟器轉(zhuǎn)移、FIGO分期有關(guān)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與年齡、組織學類型、增殖指數(shù)(Ki-67)、p53無關(guān)，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Survivin的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處臟器轉(zhuǎn)移、FIGO分期、p53有關(guān)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與腫瘤大小、年齡、組織學類型、增殖指數(shù)(Ki-67)無關(guān)，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(表2)。

表2 IGF-1、Survivin的陽性表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理因素的關(guān)系 [n=75，例(%)]

2.3宮頸鱗狀細胞癌組織中IGF-1與Survivin表達的相關(guān)性 在75例宮頸鱗狀細胞癌組織中，IGF-1陽性而Survivin陰性者3例，IGF-1陰性而Survivin陽性者5例，兩者均為陽性、陰性者分別為40例、27例，經(jīng)Spearman相關(guān)性檢驗分析顯示，兩者呈顯著正相關(guān)(rs= 0.78，P<0.01)(表3)。

表3 宮頸鱗狀細胞癌組織中IGF-1與Survivin表達的相關(guān)性 (例)

3 討 論

IGF-1是IGFs家族的成員之一，主要由肝細胞合成、分泌，肝外組織也可分泌IGF-1，主要功能有降血糖、促物質(zhì)代謝、促進細胞分裂及細胞增殖等。唐泓波等[7]研究IGF-1基因缺失小鼠(LID小鼠)乳腺癌模型發(fā)現(xiàn)，LID小鼠與正常小鼠相比，腫瘤潛伏期延長、發(fā)生率降低、瘤體生長緩慢、腫瘤細胞凋亡比例升高，提示血清低IGF-1對乳腺癌的發(fā)生有抑制作用。也有資料顯示，男性血清中IGF-1水平升高可提示發(fā)展成前列腺癌的風險升高[8]。本研究資料顯示，IGF-1在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達率分別為3.33%、37.14%、57.33%，表明IGF-1的表達隨著宮頸病變的發(fā)展而不斷的升高，推測IGF-1的高表達預示著宮頸癌發(fā)生的可能性增大。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，IGF-1的陽性表達率與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處臟器轉(zhuǎn)移有關(guān)。IGF-1蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組或遠處臟器轉(zhuǎn)移組中的表達顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組或遠處臟器轉(zhuǎn)移組，顯示IGF-1的高表達預示著腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性增大。

人類Survivin基因位于染色體17q25，全長14.7 kb，由3個內(nèi)含子和4個外顯子組成，其編碼產(chǎn)生的蛋白由142個氨基酸組成。在正常狀態(tài)下，Survivin僅在少數(shù)組織中表達，如胎盤、胚胎、睪丸、胸腺等。但在病理狀態(tài)下，Survivin過表達于乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、食管癌等多種惡性腫瘤組織中，且Survivin在惡性病變組織中的表達遠遠高于良性病變組織，其過度表達被認為是惡性度增高及預后不良的重要指標[9-11]。本研究結(jié)果表明，Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達率分別為6.67%、31.43%、60.00%，隨著宮頸病變嚴重程度的升高Survivin的表達逐漸增高，進一步證實Survivin參與了宮頸病變的演變過程。在宮頸鱗狀細胞癌臨床病理因素中，Survivin的陽性表達與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處臟器轉(zhuǎn)移、p53有關(guān)，說明Survivin在癌組織中表達越強，癌細胞的生存能力越高，進而為癌細胞浸潤轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件，其機制可能是與Survivin有效地維持微小血管網(wǎng)的結(jié)構(gòu)，抑制胱天蛋白酶的凋亡，促進血管內(nèi)皮生長因子的內(nèi)皮細胞保護功能有關(guān)。

本研究Spearman相關(guān)性檢驗分析顯示，IGF-1與Survivin在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達呈正相關(guān)，提示兩者存在一定程度的相互協(xié)調(diào)作用，共同促進了腫瘤細胞抗凋亡的能力，但兩者相互作用的機制或信號通路以及與腫瘤細胞耐藥的關(guān)系還有待進一步研究。總之，IGF-1、Survivin在宮頸癌中表達越高，則預示著癌細胞浸潤轉(zhuǎn)移的能力越強。

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