溫脾湯對(duì)小鼠缺血腦組織SOD和MDA的影響

吳思思 戴偉娟

溫脾湯由附子、干姜、人參、大黃、甘草組成，作用是溫補(bǔ)脾陽(yáng)，攻下冷積。主治脾陽(yáng)不足，常用于急性單純性腸梗阻或不全梗阻等屬中陽(yáng)虛寒，冷積內(nèi)阻者。臨床多用于治療慢性腎衰竭、潰瘍性結(jié)腸炎、腦缺血缺氧、貧血等病癥。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎制造的腦缺血模型，測(cè)定溫脾湯對(duì)腦組織中MDA和SOD含量的影響，以探討溫脾湯是否對(duì)缺血腦組織有保護(hù)作用。

1 材料

1.1藥物與試劑 草藥：人參、大黃、附子、干姜、甘草，均由濟(jì)寧邦爾中藥飲片有限公司提供。

溫脾湯制備：取上述藥物，先用水浸泡6 h，然后放入500 ml水熬制，煎煮2次，合并兩次的濾液至200 ml。置于冰箱中保存，臨用前搖勻。

丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。超氧化物歧化酶(SOD測(cè)定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。蛋白測(cè)定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。

1.2動(dòng)物 昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，購(gòu)自山東省防疫站實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。

1.3儀器 紫外分光光度劑 UV754N 上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1分組與給藥 昆明種小鼠40只，隨機(jī)分4組：模型組、溫脾湯低、中、高劑量組[灌胃0.4，2.0，10.0 ml/(kg·d)]。模型組灌服同容積的生理鹽水。各小鼠連續(xù)灌胃8 d。

2.2小鼠腦缺血后腦組織勻漿液的制備 末次給藥后1 h，各組在結(jié)扎兩側(cè)頸總動(dòng)脈1.5 h后斷頭，小心剝?nèi)蓚?cè)大腦半球，稱重，按重量∶體積=1∶9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水(4℃)，用組織勻漿器充分勻漿，將勻漿液以3000轉(zhuǎn)/min離心12 min，取上清液。

2.3超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的測(cè)定 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明，測(cè)定蛋白含量，繼而測(cè)定SOD和MDA的含量。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析均應(yīng)用t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定 結(jié)果表明，與模型相比，溫脾湯中、高劑量組小鼠腦組織中SOD含量顯著增高(P<0.01)，溫脾湯低劑量組小鼠腦組織中SOD含量明顯增高(P<0.05)，但不如中、高劑量顯著。見(jiàn)表1。

表1 溫脾湯對(duì)小鼠腦組織SOD含量的影響

注：與模型組比較，aP<0.05，bP<0.01

3.2丙二醛(MDA)測(cè)定 結(jié)果表明，與模型組相比，溫脾湯組小鼠腦組織中MDA含量顯著下降。見(jiàn)表2。

表2 溫脾湯對(duì)小鼠腦組織MDA含量的影響

注：與模型組相比，aP<0.05

4 討論

溫脾湯由人參、大黃、附子、干姜、甘草組成，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其成分或其有效成分對(duì)缺血有保護(hù)作用，但對(duì)復(fù)方湯劑未有明確研究。

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎制造腦缺血模型，測(cè)定溫脾湯對(duì)腦組織中MDA和SOD含量的影響。結(jié)果表明與模型組相比溫脾湯組小鼠腦組織中SOD的含量明顯增加，且有明顯的劑量依賴性(低、中劑量組與模型組比較，P<0.05;高劑量組與模型組比較，P<0.01)。MDA含量顯著下降(給藥組與模型組比較，P<0.05)。

自由基代謝異常是腦缺血再灌注損傷的重要原因，腦缺血時(shí),自由基的生成增加，防御機(jī)制活性降低，造成自由基損傷，腦缺血后，血清中MDA含量明顯升高，說(shuō)明其脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，SOD受到抑制,自由基清除能力降低，兩者呈負(fù)相關(guān)。因此，SOD和MDA的水平直接反映機(jī)體氧自由基的變化。

據(jù)有關(guān)資料報(bào)道，溫脾湯的有效成分有升高SOD和降低MDA含量的作用。呂風(fēng)亞等[1]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大鼠腦缺血再灌注后應(yīng)用人參總皂苷治療可提高腦組織SOD含量，降低MDA的含量。李建生等[2]在研究大黃苷及苷元對(duì)腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響時(shí)指出，大黃苷及苷元能明顯提高大鼠SOD活性，降低MDA含量。宋鐵山等[3]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)甘草總黃酮對(duì)腸缺血再灌注大鼠，能明顯降低血清和腸組織中的MDA的含量，提高體內(nèi)SOD的活性。 孫慧蘭研究四逆湯的實(shí)驗(yàn)[4]發(fā)現(xiàn)附子生物堿、干姜揮發(fā)油及甘草粗提取品都可不同程度地提高心肌缺血/再灌注損傷心肌的SOD活性，降低其MDA含量。閻惠英等[5]用榨出的生姜汁研究對(duì)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)所產(chǎn)生的超氧陰離子自由基有抑制作用，結(jié)果表明姜汁可使小鼠離體血清和肝勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活力顯著增加。 由此可進(jìn)一步證明溫脾湯的各個(gè)組成成分都有升高SOD和降低MDA的作用為本實(shí)驗(yàn)提供了重要依據(jù)。而本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，證明了溫脾湯這種復(fù)方湯劑用于保護(hù)缺血腦組織的可行性。

[1] 呂風(fēng)亞.人參總皂甙對(duì)大鼠腦缺血再灌注后MDA、SOD及細(xì)胞凋亡的影響.腦與神經(jīng)疾病雜志,2005,13(3):189-191.

[2] 李建生,劉敬霞,梁生旺,等.大黃苷及苷元對(duì)腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響.中國(guó)臨床康復(fù),2004,8(34)：7748-7750.

[3] 宋鐵山,李湘楚.甘草總黃酮對(duì)大鼠腸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2004,18(5)：330-331，334.

[4] 孫慧蘭,吳偉康,羅漢川,等.四逆湯有效部位抗心肌缺血/再灌注損傷神經(jīng)酰胺機(jī)制的研究.中成藥,2005,27(12):1429.

[5] 閆慧英,張杰梅,喬曉君.姜和蒜抑制活性氧作用的研究.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1997,13(1):10-12.