澤漆中總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化研究

王 磊 王天杰 董媛媛 張俊利 李玉賢

（河南中醫(yī)學院藥學院，河南 鄭州 450046）

澤漆中總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化研究

王 磊 王天杰 董媛媛 張俊利 李玉賢

（河南中醫(yī)學院藥學院，河南 鄭州 450046）

目的 研究澤漆總黃酮超聲提取法的最佳提取工藝，在此基礎上采用分光光度法測定不同部位總黃酮的含量。方法 正交設計試驗尋找超聲提取法提取澤漆總黃酮的最佳工藝條件，以蘆丁為考察指標，通過分光光度法對澤漆不同部位總黃酮含量進行精密測定。結果乙醇濃度50%，物料比1∶25，超聲提取時間20 min，超聲提取溫度60 ℃為最佳提取工藝。澤漆葉中總黃酮含量最高，根次之，莖最低。結論 優(yōu)選的澤漆總黃酮提取工藝方法，簡便易行，快速靈敏，實驗結果準確可靠。

澤漆；總黃酮；含量；分光光度法；提取工藝

澤漆是一味產地廣泛的大戟科大戟屬一年生或兩年生的全草本植物澤漆的干燥全草。別名貓眼兒草，五燈頭，五朵云，一把傘，九頭獅子草，燈臺草，奶漿草等。主要生于山坡，荒野，田邊及河岸邊，分布于除新疆西藏以外的全國各地。藥物資源較為豐富。澤漆始載于《神農本草經》，作為一種以全草入藥的民間常用藥物。據《中藥大辭典》記載，其性微寒。味辛，苦，有小毒。入肺、大腸、小腸、脾經。具有利水消腫，消痰退熱，散結，殺蟲，止癢，解毒等功效。澤漆主要化學成分含有二萜酯類，黃酮類，酚酸類，甾醇類，氨基酸及天然油脂等物質，并含有多種以槲皮素為苷元的黃酮苷[1-8]。黃酮類化合物是廣泛存在于植物界的一大類化合物，有抗氧化，抗衰老，清除體內自由基及增加機體免疫力，降血脂，降血壓，抑制血小板聚集及血栓形成的作用[9-10]。超聲提取法提取黃酮類物質是目前比較科學有效的方法[11]。其原理是利用超聲波在液體中產生“空穴作用”，而該產生的沖擊波和射流可以有效破壞植物細胞和細胞膜結構，從而提高細胞內容物通過細胞膜的穿透能力，一定程度上有助于黃酮類化合物的釋放與溶出，而且超聲波使提取液不斷振蕩，有助于溶質擴散，同時超聲波的熱效應對原料有水浴作用。

1 實驗儀器與試劑

1.1 實驗儀器：KQ-100E型超聲波清洗器，721型可見分光光度計，F(xiàn)W80型高速萬能粉碎機，DZKW-D型星宇電熱恒溫水浴鍋，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司），HZ-D循環(huán)水式真空泵，標準配套磨口玻璃儀器。

1.2 實驗試劑：澤漆樣品于2012年5月采自河南（樣品經風干，粉碎，保存在塑料袋中備用），蘆丁對照品（中國藥品生物制品鑒定所），氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，乙醇等實驗所用試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 黃酮的定性鑒別：依次做了紫外光下顯色反應，濃氨水反應，三氯化鋁反應，乙酸鎂反應，鹽酸-鎂粉反應均顯陽性反應，可得出澤漆提取物中含有黃酮。

2.2 蘆丁對照品標準曲線的繪制[12]：①對照品標準溶液的配制：精密稱量120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品12.8 mg，置于50 mL干燥燒杯中，用60%乙醇溶液溶解，冷卻至室溫，并定容至100 mL的容量瓶中，振蕩均勻，則配制得到濃度為0.0128 mg/mL的蘆丁對照品標準溶液，備用。②吸收波長的確定：準確量取蘆丁對照品標準溶液1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液4 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置5 min后，加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，放置5 min后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，再用60%乙醇溶液定容。放置10 min后在400～600 nm波長測定吸光度，確定最大吸收波長為510 nm。③蘆丁對照品溶液標準曲線的繪制：精密量取蘆丁對照品標準溶液0、1、2、3、4、5 mL，分別置于六支10 mL容量瓶中，依次加入60%乙醇溶液5、4、3、2、1、0mL，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，搖蕩均勻，最后用60%乙醇溶液定容。靜置10 min后于510 nm處測量吸光度，試劑1為空白參照液，以蘆丁對照品標準溶液的質量濃度為橫坐標（mg/mL），吸光度為縱坐標，進行線性回歸分析，繪制蘆丁對照品溶液濃度與吸光度標準曲線.說明蘆丁對照品標準溶液濃度與吸光度之間有良好的線性關系。

2.3 澤漆總黃酮超聲提取正交試驗設計：澤漆總黃酮的提取，受多種因素的影響，每個因素包含著不同的水平，為了尋求最優(yōu)化的提取條件，就必需對各種因素及各因素的不同水平進行試驗，通過分析，確定各因素的最好水平和主要因素，以找出最佳工藝方案。

①因素水平表：本研究的因素為乙醇濃度（A），提取時間（B），物料比（C），提取溫度（D）試驗因素設計見表1。②正交試驗設計表L16(44)及試驗結果：本實驗按正交試驗設計表L16(44)進行試驗，以吸光度值為考察指標進行提取優(yōu)化試驗，結果見表2。由實驗得：四因素對澤漆超聲提取所得總黃酮含量的影響大小依次為：乙醇濃度（A），物料比（C），提取溫度（D），提取時間（B）。最佳提取工藝組合為A4B1C3D4，即提取澤漆總黃酮的最佳提取工藝條件：乙醇溶液濃度60%，物料比1∶25，提取時間20 min，提取溫度60 ℃。③正交試驗方差分析：由方差分析結果見表3，得出：A是主要因素，C和D是重要因素，B影響不大，所以選取最短提取時間20 min。

3 討 論

澤漆總黃酮的提取實驗中，一定范圍內隨溫度的升高澤漆總黃酮的提取率增大。溫度過高可能會導致黃酮類化合物結構被氧化而被破壞，導致其提取率下降。溫度過低，對黃酮類化合物有一定的保護作用，但其提取不徹底，提取率低。

在優(yōu)化實驗中，發(fā)現(xiàn)隨著乙醇濃度的升高，提取液中會有白色絮狀物的出現(xiàn)，對吸光度有一定的貢獻，也就使得真正有黃酮類化合物引起的顏色變化較小，所以乙醇提取澤漆中總黃酮時，乙醇濃度逐漸升高，黃酮類化合物的溶解度也增大，之后呈現(xiàn)下降趨勢可能是隨著乙醇濃度的增大，一些醇溶性雜質，色素，親脂性強的等成分溶出量增大，這些成分與黃酮類化合物競爭同乙醇-水分子結合，從而使黃酮類化合物的提取率下降。

在進行藥材提取時，一般情況下溶劑用量與提取量呈現(xiàn)正相關，但過大的物料比會造成溶劑和能源的浪費，并給后續(xù)工作帶來麻煩。所以一個科學，合理，高效的物料比對于藥材的提取十分重要。

表1 試驗因素水平表

表2 澤漆超聲提取工藝的正交試驗表

表3 正交設計實驗方差分析表

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[9] 曹緯國,劉志勤.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].西北植物學報,2003,23(12):2241-2247.

[10] 劉仲則.中草藥黃酮類化合物心血管活性成分概述[J].中草藥, 2005,18(3):37.

[11] 鄔方寧.超聲提取技術在現(xiàn)代中藥中的應用[J].中草藥,2007,39 (2):315-316.

[12] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:北京化學工業(yè)出版社,2005:246-247.

R282.710.2

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1671-8194（2014）33-0062-02

河南中醫(yī)學院大學生創(chuàng)新學習項目（YXCX【2012】5；CXXM【2012】04）