胃癌中HSP70、NF-κB p65的表達及臨床意義

陳宏書，劉丹丹，侯 妍

(1.濰坊市益都中心醫院消化內科，山東 青州 262500； 2.青州市婦幼保健院婦產科，山東 青州 262500)

胃癌作為全球最常見的惡性腫瘤之一，其病死率在惡性腫瘤中居第二位。胃癌的發病由多基因參與、多因素影響、多步驟進行，到目前為止其確切發病機制尚未完全闡明，近年來大量研究認為，細胞凋亡和細胞增殖異常可能在胃癌的發生、發展中發揮重要的作用[1]。熱激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)是一種普遍存在于生物細胞中的高度保守的蛋白質，具有抗細胞凋亡和細胞保護等生物學功能，可能在胃癌細胞增殖的轉錄調控過程中起某種作用[2]。核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)p65屬于真核細胞轉錄因子家族，可能與腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移等有密切關系。本研究采用免疫組織化學法檢測60例胃癌標本中HSP70、NF-κBp65蛋白的表達情況，并分析兩者與胃癌病理特征的關系，探討其在胃癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1材料 收集2011年8月至2012年5月益都中心醫院經病理診斷確診為胃癌并行胃癌根治術的60例胃癌組織標本。其中男44例、女16例，年齡41～79(59.5±3.21)歲。根據WHO分類標準，組織學分型為高分化腺癌17例、中分化腺癌22例、低分化腺癌21例。所有患者術前均未接受任何放化療及免疫治療。另取距胃癌病灶5 cm以上癌周正常的癌旁胃組織，經病理診斷所取癌旁胃組織均未檢測到任何癌細胞。

1.2方法 切除標本后將其置于10%甲醛中經固定、包埋，制作成切片后，經微波抗原修復，用免疫組織化學法監測HSP70、NF-κBp65水平，鼠抗人HSP70抗體、鼠抗人NF-κBp65抗體均購于武漢博士德公司，二氨基聯苯胺顯色試劑盒及二步法所用免疫組織化學檢測試劑均購自北京中杉生物科技有限公司，嚴格按照說明書操作進行。

1.3判定標準 NF-κBp65陽性細胞結果為：胞質出現棕黃色顆粒狀沉淀；HSP70陽性結果為：胞質呈現棕黃染色或胞核出現伴有棕黃顆粒的細胞。光鏡下觀察，HSP70、NF-κBp65著色細胞>10%為陽性[3-4]。

1.4統計學方法 應用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，計數資料采用χ2檢驗，相關性采用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HSP70、NF-κBp65在胃癌和癌旁胃組織中的表達 與癌旁胃組織相比，胃癌組織中NF-κBp65、HSP70陽性表達率均高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)(表1)。

2.2HSP70、NF-κBp65在胃癌中的表達與胃癌病理的關系 組織分化程度越低，HSP70、NF-κBp65陽性表達率越高，且隨腫瘤的浸潤而增高，有淋巴結轉移者比無轉移者高(P<0.05)(表1)。

2.3胃癌組織中NF-κBp65與HSP70表達間的關系 胃癌組織中NF-κBp65和HSP70的表達呈正相關(rs=0.271,P<0.05)(表2)。

3 討 論

目前研究認為，細胞增殖與凋亡不平衡是胃癌形成的病理基礎，胃癌不僅僅是一種細胞增殖和分化異常的疾病,同時也與細胞凋亡的異常有密切的關系，大量凋亡相關因子能夠參與凋亡信號調控，加速胃癌的發生、發展[5]。其中，HSP70、NF-κBp65可能在細胞凋亡通路中起著重要的作用。

表1 NF-κBp65與HSP70的表達與胃癌病理的關系

表2 胃癌組織中NF-κBp65與HSP70表達間的關系

NF-κB是一類能夠特異地識別并結合DNA的蛋白二聚體轉錄因子，當細胞受到細胞內、外的各種刺激時，NF-κB可發生磷酸化和泛素化后失活，并使NF-κB釋放、激活后進入細胞核內，與靶基因上的順式調節元件κB位點發生特異性結合，調控一系列抗凋亡基因和促生長基因的表達[6]。國內外研究證實[7-8]，NF-κB信號通路是目前癌癥治療中很有研究價值的干預靶點。本研究結果顯示，胃癌組NF-κBp65的陽性率顯著高于癌旁組織，且其表達與胃癌浸潤深度、分化程度及淋巴結轉移等有相關性，這與Sasaki等[9]研究結果大致相同，提示NF-κBp65可能在胃癌的發生、發展中發揮著重要作用，對胃癌的治療及預后有一定的指導意義。目前，對于NF-κB在胃癌中的作用機制尚不明確，可能與NF-κB參與細胞凋亡的調控有關，NF-κB活化后可上調抑凋亡蛋白的表達進而抑制細胞凋亡，并能通過抑制Jun氨基末端激酶的活性抑制凋亡。

HSP是一類高度保守的蛋白質，由于其具有提高細胞對應激耐受性等生物功能，故又稱為應激蛋白。HSP70作為HSP家族中重要一員，在維持細胞結構穩定方面發揮著至關重要的作用。已有實驗證實，HSP70在某些腫瘤組織中的表達與在正常組織中的表達不同[10]。HSP70作為分子伴侶能夠提供結合蛋白，協同參與抗原加工、遞呈等過程，在機體的抗感染免疫、自身免疫，特別是在腫瘤免疫中發揮著重要作用。同時，HSP70作為分子伴侶，還能夠與原癌基因和抑癌基因直接作用，從而調控腫瘤細胞的增殖。本研究證實，HSP70在胃癌和癌旁胃組織中均有表達，胃癌組織HSP70陽性表達率顯著高于癌旁組織，且隨腫瘤浸潤程度加重，陽性率升高。這與吳永梅等[11]的研究結果一致，推測HSP70可能是作為一種重要的基因參與胃癌細胞增殖的過程，HSP70 可通過與多種原癌基因及抑癌基因相互作用，從而調節腫瘤細胞的增殖。此外，由于癌細胞較正常細胞中變性蛋白含量明顯增多，機體細胞需要合成更多HSP來應對此種變化，故使HSP70呈現高表達。

本研究發現，HSP7及NF-κBp65在胃癌組織中呈明顯正相關(P<0.05)，提示HSP7與 NF-κBp65均參與了胃癌的發生、發展過程，而HSP70可能參與了NF-κBp65的激活物IKK復合體的組成，進而引起NF-κBp65的轉錄增強，兩者的關系還需進一步研究。

綜上所述，HSP7及NF-κBp65在胃癌組織中特異性高表達，可能在胃癌的發生、發展中發揮了重要的作用，兩者相互協同抑制腫瘤細胞凋亡可能是其中機制之一。聯合檢測HSP7及NF-κBp65可能有助于評估胃癌的轉移及預后，對胃癌的臨床診治提供一定的依據。

[1] 陳美霓,許靜洪,趙菊梅.HSP抑制劑17-AAG對胃癌SGC-7901細胞生長周期和凋亡的影響[J].南方醫科大學學報,2013,33(2):271-275.

[2] McConnell KW,Fox AC,Clark AT,etal.The role of heat shock protein 70 in mediating age-dependent mortality in sepsis[J].J Immunol,2011,186(6):3718-3725.

[3] Schmid RM,Adler G.NF-kappaB/rel/IkappaB: implications in gastrointestinal diseases[J]. Gastroenterology,2000,118(6):1208-1228.

[4] Weinberger SR,Dalmasso EA,Fung ET.Current achievements using Protein Chip Array technology[J]. Curr Opin Chem Biol,2002,6(1):86-91.

[5] Cory S,Huanng DC,Adams JM.The Bel-2 family:roles in cell survival and oneogenesis[J].Oneogene,2003,22(53):8590-8607.

[6] 王韶華,崔東來,謝永強，等.環氧合酶-2,核因子-κB異常表達與胃癌關系的探討[J].北京醫學, 2006，28(2)：84-86.

[7] Hillman GG,Kucuk O,Joiner MC,etal.Potentiation of radiation-induced cell killing by genistein in prostate cancer[J].J Nutr,2004,134(5):1258-1259.

[8] 張永勝,王志強,賈淑.PCNA與NF-κBp65在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].醫學綜述,2012,18(7):1083-1085.

[9] Sasaki N，Morisaki T，Hashizume K，etal.Nuclear factor-kappa Bp65(RelA) translation factor is constitutively activated in human gastric carcinoma tissue[J].Clin Cancer Res,2001,7(12):4136-4142.

[10] Doubrovin M,Che JT,Serganova I,etal.Monitoring the induction of heat shock factor 1/heat shock protein 70 expression following 17-allylamino-demethoxygel danamycin treatment by positronemission tomography and optical reporter gene imaging[J].Mol Imaging, 2012,11(1):67-76.

[11] 吳永梅,居來提,謝會忠.慢性萎縮性胃炎熱休克蛋白70(HSP70)表達的相關研究[J].中國現代醫學雜志,2010,20(2):179-182,195.