小而密低密度脂蛋白與冠心病關系的研究

周麗娟，韓崇旭

(蘇北人民醫院臨床醫學檢測中心，江蘇 揚州225001)

血清低密度脂蛋白 (Low Density Lipoprotein,LDL)顆粒在大小、密度和脂質組成上具有異質性。根據顆粒相對大小，LDL一般分為A、B兩型，A型為較大顆粒，是大而輕低密度脂蛋白(large,buoyant LDL,lLDL)，顆粒較小的B型即小而密低密度脂蛋白(small,dense low density lipoprotein,sdLDL)，是動脈粥樣硬化發生的強危險因素，與冠心病(coronary heart disease,CHD)的形成密切相關[1-4]。目前，sdLDL作為冠心病危險性指標的研究較少，為了解CHD患者LDL亞組分的分布情況，本文探討血漿sdLDL水平與CHD及其它危險因素的關系，旨在為CHD的防治提供新依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年1月至2011年6月在我院住院CHD患者50例(冠狀動脈造影確診)。對照組：經冠狀動脈造影排除冠心病的住院病人30例；選擇性別、年齡匹配并排除心腦、肝、腎等疾病的健康人30例。

1.2 方法

1.2 .1密度梯度超速離心法制備LDL亞型 取20份正常人混合血清制備LDL亞型，用作2%~16%非變性梯度凝膠電泳的參照物。超速離心制備sdLDL(d=1.044～1.063)，空腹 12h 采血，以 3000 r/min離心10 min，分離得到血清(超速離心機為美國 Beckman Coulter公司，OptimaTML-90K)。KBr調整血清密度為 d=1.044，50，000 r/min離心 18h。離心后除去上層淡黃色脂蛋白與無色中間層，用KBr調整下層液密度為 d=1.063，50，000 r/min 離心 18 h， 用 pH7.4、0.15mol/L NaCl(含 0.3 mmol/L EDTA-Na2)將上層淡黃色脂蛋白透析后備用。相同的方法制備大而輕的LDL(lLDL,密度為1.020~1.044 kg/L)。透析，濃縮，負染經過多媒體彩色病理圖像分析系統作圖像分析處理，電子顯微鏡(日本JEOL 公司，JEM-100S)測定 lLDL、sdLDL 顆粒平均直徑分別為26.3 nm和23.9 nm。

1.2 .2 空腹 12h后采血，0.5 mol/L EDTA-Na2抗凝，30分鐘內以3000 r/min離心分離血漿。采用2%~16%非變性聚丙烯酰胺梯度膠電泳法[5](電泳儀為美國HOEFER，梯度發生器為 Hoefer SG500)。電泳緩沖液為pH 8.3的Tris-硼酸-EDTA緩沖液，加樣緩沖液為0.1%溴酚藍．蔗糖緩沖液，加樣50μl，預電泳施加125V電壓15min，電泳施加200V電壓16h，400V電壓4h，電泳過程在10℃的循環水浴中進行。凝膠用油紅O染色24h，dH2O恢復。掃描時以超速離心法得到的sdLDL與lLDL確定兩組分在膠上的相應位置，掃描并由波峰面積算出sdLDL占總的LDL的相對百分比含量。總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、用羅氏全自動生化分析儀測定。

1.3 統計學處理 計量資料比較用t檢驗，率及例數分布用χ2檢驗，多因素分析用多元逐步回歸和偏回歸分析，全部檢驗用SPSS 11.5軟件運行，P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 冠脈造影陽性組和對照組血漿sdLDL變化，以sdLDL>50%為異常(表1)：與對照組比較，冠造陽性組sdLDL明顯升高(P<0.01)，與冠造陰性組比較：冠造陽性組sd LDL也明顯升高(P<0.01)。

表1 各組sdLDL(x±s)異常率比較

2.2 sdLDL與血脂水平的關系 根據2.1的結果將120份檢測樣本分為兩組：sdLDL異常組與正常組。如表2所示，sdLDL異常組比正常組TG、LDLC、apoB水平均顯著增高，HDL-C水平顯著降低。sdLDL正常組TC水平低于異常組但未達到統計學意義(表 2)。

3 討論

sdLDL易被氧化，促使泡沫細胞形成，與CHD的發生、發展呈高度相關性[6]，Coresh等[7]認為sdLDL常見于CHD發病前數年，與冠心病有明確的關系。檢測sdLDL-C有助于冠狀動脈硬化心血管疾病的早期預測與治療過程中的療效觀察[8-10]。冠造陽性組血清sdLDL明顯高于冠造陰性組與對照組，與相關報道一致。

表2 sdLDL異常組與正常組血脂指標(±s)

表2 sdLDL異常組與正常組血脂指標(±s)

注：與正常組比較：**P<0.01，*P<0.05。

指標 異常組(n=56) 正常組(n=54)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)apoB(g/L)4.56±1.05 1.52±0.53**1.27±0.34*2.68±0.47**0.98±0.28**4.48±0.86 0.98±0.35 1.40±0.24 2.36±0.51 0.74±0.21

既往報道，sdLDL 與 TG、HDL-C、apo-B 具有一定的相關性[11]。結果顯示，sdLDL異常組TG水平增高，HDL-C水平降低，均與正常組存在顯著差異，與 Rizzo等[12]報道高 sdLDL、高 TG、低 HDL-C為“動脈粥樣硬化脂蛋白譜”一致。sdLDL致動脈粥樣硬化作用較強的機制尚不清楚，可能與以下因素有關：顆粒小易透過動脈壁；顆粒表面極性分子減少，與動脈內膜上蛋白聚糖親和力強；apoB等結構改變，不易被受體識別，清除緩慢，滯留時間長，進入動脈壁的機會多；顆粒表面保護層單薄，抗氧化成分少，易被氧化修飾等。

本文結果表明，sdLDL相對獨立于CHD其他危險因素，其檢測作為了解冠心病患者脂蛋白代謝紊亂的新指標，對評價冠心病的危險因素、實現對冠心病的早期檢測預防及有效制定冠心病防治策略具有重大意義。

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