用EP6-A2方法驗證比色法檢測血清超氧化物歧化酶

齊發梅，李金龍，齊占斌

(1、甘肅省人民醫院，甘肅 蘭州 730000；2、寧夏醫科大學，寧夏 銀川 075000；3、甘肅中醫學院；甘肅 蘭州730000)

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一類廣泛存在于生物體內的金屬酶，是清除超氧陰離子自由基使細胞免受損害的一種重要的抗氧化酶，對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用。因此了解機體內SOD水平變化對于判斷體內自由基的產生與清除平衡狀態有著重要意義。線性范圍是試劑盒的重要性能指標之一。線性范圍窄的試劑盒在臨床上的應用就會受到限制，滿足不了實驗室及臨床需求[1]。EP6-A2文件是CLSI在EP6-A文件的基礎上制定出來的，EP6-A2方法操作簡便，適合于臨床常規實驗室人員評價線性，是目前最好評價線性的方法[2]。本文采用EP6-A2方法，對比色法測定超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒線性范圍進行驗證，有利于比色法測定SOD方法的推廣應用，保證檢測結果的準確性、方法的可行性，從而更好的為臨床服務。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1樣品 試劑廠商提供的質控液，濃度250U/ml

1.1 .2儀器 OLMPUSAU2700全自動生化分析儀。

1.1 .3試劑 血清SOD檢測試劑盒是福建福緣生物科技有限公司生產的雙試劑試劑盒。試劑盒采用鄰苯三酚自氧化法(PAM)，顯色反應強度與SOD的活性呈正相關關系。

1.1 .4分析軟件 SPSS 11.5統計軟件包。

1.2 方法

1.2 .1配制試驗樣本 按表1配置。

表1 配制方法

1.2 .2試驗測試 將上述 6個試驗樣本按1-6的

順序測定一次，再按隨機順序測定第二次(實驗操作嚴格按照SOP文件進行，室內質控在控)。

1.2 .3離群值檢測 以理論濃度為X軸、測定濃度為y軸繪制散點圖，檢查是否存在非常明顯的非線性；并通過目視判斷試驗數據有無明顯的離群點。然后計算SDr。

1.2 .4回歸分析 使用SPSS11.5軟件對數據進行回歸分析，將測定數據分別擬合一次、二次和三次多項式如表2。計算每個非線性系數斜率的標準差，判斷非線性系數與0之間有的差異是否有統計學意義(t檢驗)。

1.2 .5計算線性偏差 當最適多項式為二次或三次多項式時，需計算每個濃度點處的線性偏差。公式為DLi=p(Xi)-p'(Xi)。式中X的取值范圍為 X1…X6；p'(Xi)為一次回歸多項式在點 Xi處的計算值。

2 結果

2.1 對6個試驗樣本進行SOD測定，結果見表3。

2.2 離群值檢測 首先繪制散點圖，繪制檢測結果散點圖見圖1。由圖1可知本研究12個數據中沒有數據明顯的離群點。可以進行下一步數據處理。

表2 回歸方程類型

表3 6個實驗樣本測定的SOD濃度(U/m l)

圖1 檢測結果散點圖

2.3 計算SDr剔除第一組試驗樣本數據，計算得到SDr=0.43%。小于實驗室5%的允許誤差，結果可以線性評價。

2.4 回歸分析 具體結果見表4。

表4 SOD線性驗證的回歸分析結果

由表4可知，非線性系數即二次回歸多項式的b2、三次回歸多項式的b2以及b3與“0”之間的差異無統計學意義(P>0.05)，拒絕二次及三次多項式，最適合的多項式為一次多項式，不需要計算DLi。最適方程為Y=1.0161X-0.0054。符合線性，線性范圍0~250 U/ml。

3 討論

線性是反映方法性能評價的重要指標之一，在某種意義上，線性范圍越寬，該試劑盒就越方便用于臨床，但每一種試劑都有其一定的線性范圍，線性范圍內的結果才具有可靠性。本文按EP6-A2文件要求[3-5]對鄰苯三酚自氧化法試劑盒進行了驗證，結果為散點圖未見離群點與明顯的非線性，計算得到的SDr為0.43%小于實驗室允許誤差5%。對試驗數據進行回歸分析，結果顯示，二次多項式模型的非線性系數b2，或三次多項式模型的b2或b3中任一個與“0”比較，均無顯著差異(P>0.05)，最適合的多項式為一次多項式，為Y=1.0161X-0.0054。符合線性，線性范圍0~250U/m l，與試劑盒提供的線性范圍相符合，所以，該試劑盒可以滿足臨床需求。另外，鄰苯三酚比色法測定SOD試劑盒與以往試劑相比，具有試劑穩定、標本用量少、準確度和精密度高等優點[6]，試劑盒即可測定血清樣本也可測定血漿樣本，而且可用于全自動生化分析儀、操作簡便快捷等優點，適合各級醫院使用，是一種理想的、值得推廣應用的檢測SOD試劑。

[1]馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].第2版,上海:上海科學技術文獻出版社,2007:39-50.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003.

[3]呂賽平,鄒學森.定量檢測系統線性評價方法——EP6-A法[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(3):303-334.

[4]呂賽平,劉琴,鄒學森.應用EP6-A2方法驗證血糖試劑盒的線性范圍[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(1):45-46,59.

[5]趙彩虹.超敏C反應蛋白試劑盒線性范圍的驗證[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(15):1819-1821.

[6]張忠,高靜,董振南,等.比色法測定超氧化物歧化酶的臨床評價及其應用研究[J].標記免疫分析與臨床,2011,18(2):105-107.