熒光PCR技術與直接涂片法對淋球菌檢測的臨床應用分析

李新善，胡燕玲，羅明

(1、江西省臨床檢驗中心，江西 南昌 330006；2、南昌市男科醫院，江西 南昌 330008)

性傳播疾病是當今社會上廣泛流行的傳染病，其中以淋病居多，其病原菌為淋病奈瑟菌(簡稱淋球菌)，也是我國最常見的性傳播疾病之一。淋病的診斷主要是病史、臨床癥狀及實驗室檢查，在此環節中，實驗室檢測對疾病的診斷、治療和有效控制等具有十分重要的作用。目前，實驗室檢查主要有直接涂片革蘭染色、聚合酶鏈反應(PCR)、分離培養和細菌學鑒定等。上述幾種方法各有優缺點，本資料采用直接涂片革蘭染色、熒光PCR二種方法，對2012年臨床疑似淋病的116例患者進行比較分析，重點對不同臨床癥狀及男、女標本分別采用直接涂片染色和熒光PCR法做檢測對比，現將結果總結如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 68例男性和48例女性病人均來自南昌市男科醫院的門診和住院病例，男性年齡19~70歲，平均年齡39.5歲，女性年齡18~45歲，平均年齡26.8歲。所有病例基本具有以下特征：(1)婚外性交史或其配偶有婚外性交史；(2)不同程度的生殖道癥狀；(3)符合上述二點，有尿道口紅腫、明顯分泌物增多、膿性白帶的判為重癥，僅有尿頻尿急、尿道灼熱刺痛、紅腫程度小、分泌物少的判為輕度。絕大多數病例近期內未使用任何抗生素。

1.2 標本采集 取材由臨床醫生按常規方法操作[1]，男性取尿道分泌物、前列腺液，女性取陰道分泌物、宮頸粘液。立即裝入無菌試管送實驗室，分別進行直接涂片和PCR檢測。

1.3 直接涂片法 將標本拭子在消毒好的玻片上輕輕滾動，待干燥固定后行革蘭染色、鏡檢。以鏡檢中性粒細胞內有革蘭陰性雙球菌為陽性。

1.4 熒光PCR法 試劑盒由上海科華生物技術有限公司提供。擴增儀為上海宏石SLAN全自動擴增儀。PCR檢測方法嚴格按試劑盒操作說明書和實驗室SOP要求進行。淋球菌標準株來源于江西省疾病控制中心，為熒光PCR陽性對照用。

1.5 統計學處理 應用SPSS13.0軟件，數據分析采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

用二種不同方法對116例臨床疑似病例進行檢測，按不同癥狀和男、女分組作對比分析，結果見表1和表2。

表1 不同癥狀二種檢測方法的結果

表2 不同性別二種檢測方法的結果

3 討論

本資料表1和表2結果顯示，熒光PCR法對癥狀輕微患者、女性標本的檢出率高于直接法(P＜0.01)。對于癥狀較重患者、男性標本，二種方法則差異無統計學意義(P＞0.05)。直接涂片法對于癥狀較重患者、男性標本具有較高的陽性檢出率，明顯高于女性標本(P＜0.01)。

從方法學角度，淋病的實驗室診斷由于實驗方法的選擇不同，造成了實驗結果的靈敏度，準確度有所不同[2]。直接涂片法：能快速檢出結果，結果直觀可靠，可使患者節省費用、縮短候診時間、盡早得到治療，但是其陽性檢出率較低，尤其是輕微的女性病例標本受多種主觀和客觀因素的影響，結果判讀非常困難，常會出現假性結果，對檢測者的技術和經驗要求很高[3]。熒光PCR法：具有靈敏度高、特異性強、準確和快速[4]的特點，但是此方法容易出現假陽性結果，對實驗室環境要求高，操作過程中一定要特別仔細認真，嚴格按照PCR標準操作程序操作，應建立有效的防污措施，杜絕殘留污染和樣品間擴增序列交叉污染，實驗全過程必須設立陰陽性對照，嚴防假陽性、假陰性。細菌培養法：淋球菌分離培養和藥敏鑒定是WHO和我國推薦的金標準之一，由于分離培養和細菌學鑒定對標本要求相對高，培養條件苛刻，操做繁瑣，報告時間長難以被患者接受等缺點[5]，該方法的臨床推廣應用受到制約。

綜上所述，目前，淋病的實驗室檢測方法各自有優缺點，單一某種檢測方法無法得到滿意的結果。從116例臨床疑似病例采用直接涂片染色法和熒光PCR[6]法所做的結果表明，同一種方法對不同癥狀、不同性別的陽性率不同，經比較分析得出直接涂片法具有簡便、快捷、直觀的優點，但對女性檢出率較低。熒光PCR法敏感高、特異特異強，能提高檢出率，對女性疑似病例具有較好的補充效果。本文認為，實驗室對疑似病例先后采用直接涂片染色法和熒光PCR法檢測，基本能滿足臨床需要。

[1]張學軍.皮膚性病學[M].第6版.北京:人民衛生出版社,2005:215.

[2]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版．南京：東南大學出版社,2006:778-780.

[3]葉章順.性傳播疾病的實驗室診斷[M].北京：科學出版社，2001：41-44.

[4]熊國亮.臨床聚合酶鏈反應(PCR)測定的質量控制[J].江西醫學檢驗,2002,20(4):241-244.

[5]徐新蓉,馬萍,龔國富.不同癥狀淋球菌感染患者實驗室檢測方法選擇與比較[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(21):2637-2638.

[6]江梅,萬臘根,簡正偉.檢測PML RARα基因的雙重熒光定量PCR方法的建立[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(5):433-436.