酸棗的莖段培養

楊敏

摘 要：以野生酸棗的一年生幼嫩莖段為外植體，以基本培養基和生長調節劑為主要影響因素。通過正交試驗篩選出酸棗莖段初代培養的優化培養基為：WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂 5.8 g/L，并獲得無菌試管苗，這對酸棗的快繁有重要意義。

關鍵詞：酸棗；莖段；組織培養

中圖分類號：G632 文獻標識碼：B 文章編號：1002-7661（2014）02-393-01

酸棗，生長于山坡、山谷、溝邊、路旁，延安酸棗產地范圍為延安市寶塔區、吳旗、志丹等12個縣（區）現轄行政區域及黃龍縣石堡、范家卓子、界頭廟、紅石崖、白馬灘、柏峪、三岔、崾等8個鄉（鎮）現轄行政區域[1]。

酸棗仁能養心、安神、斂汗生津；用于治療神經衰弱、失眠、多夢、盜汗等癥為傳統鎮靜安神良藥[2]；酸棗是作棗樹砧木及育種的原始材料[3]。由于莖段培養是以芽生芽的方式進行繁殖，具有易成功、變異小、繁殖速度快等優點，成為植物組織培養中應用最普遍的方法[4]。

酸棗是一種野生狀態極具開發潛力的果樹資源，但存在發芽率低、長勢弱的缺點。酸棗適應性強，耐旱，根系發達，是一種優良的水土保持樹種[6]。酸棗的栽培化已成發展趨勢，良種苗木快繁迫在眉睫。目前，對于酸棗的研究文獻主要集中在栽培技術、病蟲害防治、貯藏加工等應用技術方面，通過組培快繁優異種質，是達到產業化栽培生產的必由之路。在已有酸棗組培快繁研究中，已經實現了植株再生[7-9]。對棗的組培快繁已有較多報道，但是關于酸棗的組培快繁研究的還很少，而關于酸棗的莖段培養的更少[5-7]。

本試驗主要以酸棗莖段為材料，通過組織培養技術，期望建立酸棗莖段的培養系統，為建立其組培快繁及育種奠定基礎。

一、材料與方法

1、材料

于本年度3-4月份采回一年生帶腋芽的酸棗莖段作為試驗材料。

2、試驗方法

（1）試驗設計

按常規方法配制滅菌備用。正交設計表頭見表1。

表1 L16（45）正交試驗因素水平表頭設計

水平 因素

基培（A） 6-BA（B，mg/l） NAA（C，mg/l） IBA（D，mg/l）

1 MS 0.5 0 0

2 CY4 1.0 0.2 0.2

3 WPM 1.5 0.3 0.3

4 MS 2.0 0.4 0.4

（2）外植體的選擇和預處理 采集健康酸棗植株上一年生莖段，用流水沖洗10-15min，以0.1%的洗潔精浸泡30min后，用自來水反復沖洗干凈，再用15%的巴氏消毒液浸泡15min后用蒸餾水沖洗3-4遍，每15-20個莖段放入盛有3/4V蒸餾水的小燒杯（V<500mL）中進行水培發芽，待水培芽長至2-3cm左右剪下作外植體，確保每個外植體帶有一個腋芽。

（3）外植體的消毒與接種 設計兩種消毒方法：（1） 75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min；（2） 75%C2H5OH 90s + 0.1% HgCl2 10min。再將外植體隨機接種于各設計培養基中，每種處理接種50瓶。

（4）培養與調查方法 接種好的外植體然后放入培養室培養，培養溫度為24-27℃，相對濕度為60%-70%，光照強度為1500-2000 Lx，光照時間為12 h.d-1。培養至25d調查其培養結果，以污染率、存活率、萌發率作為衡量指標。

二、結果與分析

1、不同的消毒處理對污染率和成活率的影響

通過對外植體進行不同消毒時間表明，用75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min的消毒方法極顯著優于用75%C2H5OH 90s +0.1% HgCl210min的消毒方法，而且用前者的消毒方法使外植體的平均成活率（87.3%）極顯著高于用后者的消毒方法的外植體的平均成活率（42.7%）。

2、不同類型的外植體對成活率的影響

通過對水培芽的莖段和無水培芽的莖段分別進行培養，水培芽的莖段的平均存活率（86%）顯著高于無水培芽的莖段的存活率（30%），污染率（10%）和褐化率（4%）顯著低于無水培芽莖段的污染率（46%）和褐化率（24%）。

3、各因素對莖段培養的影響

通過極差分析顯示，各因子萌發率的極差（R）分別為基培24.5，6-BA 23，NAA 6.5，IBA 14.3，對莖段培養萌發率的影響主次順序為：基本培養基-6-BA-IBA-NAA。

經過多重比較q檢驗分析篩選出酸棗莖段初代培養的優化培養基為：A3B4C3D2，即WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂5.8 g/L。

三、討論

實驗結果表明，通常選取三月份的帶菌少的幼嫩莖段更適合酸棗快繁材料。用75%C2H5OH 75s+0.1%HgCl2 8min的消毒方法顯著優于用75%C2H5OH 90s+0.1%HgCl210min的消毒方法，消毒時間不同結果也不同。

通過正交設計篩選出的酸棗莖段初代培養（見圖1、2）的優化培養基為：WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂5.8 g/L。生長調節物質的種類和配比水平也與自身需求有關，所以選了6-BA 2.0mg/L+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L的激素水平。

圖1 WPM+6-BA1.5mg/L+IBA0.2mg/L下培養15天的酸棗莖段

圖2 WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L下培養15天的酸棗莖段

參考文獻：

[1] 中國果業信息網. 2008，（25）：1.

[2] 四川醫學院主編.中草藥學.北京： 人民衛生出版社.