DC-CIK治療血液腫瘤的研究進展

張慧敏 高習(xí)華 劉清池

由于環(huán)境污染、電離輻射及食品農(nóng)藥殘留等因素，血液腫瘤發(fā)病率逐年上升。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)如分子生物學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展以及人們對血液腫瘤發(fā)病機制認識的不斷深入，生物治療孕育而生，并有望成為繼化療、造血干細胞移植后治療血液腫瘤的又一有力武器。其中以DC-CIK為基礎(chǔ)的細胞免疫治療，成為國內(nèi)外研究的熱點，已廣泛用于多系統(tǒng)腫瘤的治療，本文就DC-CIK治療血液腫瘤的研究現(xiàn)狀做一綜述。

1 細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(cytokine induced killer cells，CIK)

CIK細胞最早是Schmidt-wolf等［1］于1991年發(fā)現(xiàn)在外周血淋巴細胞中加入 IFN-γ、IL-2、CD3McAb，可培養(yǎng)出大量CD3和CD56雙陽性的細胞毒T淋巴細胞。CIK細胞具有增殖能力強、殺瘤活性高、殺瘤譜廣及非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤等特點，能廣泛殺傷自體、異體以及耐藥腫瘤細胞的作用［2，3］。其效應(yīng)細胞CD3+CD56+細胞在正常人外周血中僅占1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)后可迅速增至1 000倍以上。

2 樹突狀細胞(dendritic cells，DC)

DC細胞是體內(nèi)最重要的、功能最強的抗原提呈細胞，腫瘤患者因免疫功能缺陷不能有效提呈腫瘤抗原，DC可以有效的誘導(dǎo)靜止T細胞的增殖和應(yīng)答，促進細胞毒性T淋巴細胞和輔助性T淋巴細胞的生成，是機體免疫應(yīng)答的啟動者和參與者［4］。成熟的DC可通過MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子及表面標志白細胞分化抗原CD1分子途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細胞的免疫逃逸機制［5］。

3 DC-CIK細胞的協(xié)同抗腫瘤作用

實驗表明，DC-CIK共培養(yǎng)的抗腫瘤效應(yīng)明顯高于單純CIK細胞或DC細胞［6］。DC-CIK細胞的抗腫瘤機制:(1)CIK細胞在體內(nèi)受某些淋巴因子作用后，可以釋放大量具有細胞毒性的胞質(zhì)顆粒，直接破壞腫瘤細胞。(2)DC-CIK細胞可以分泌多種細胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-2等)，不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，還可以通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細胞。(3)CIK細胞有抗凋亡基因表達的作用，CIK細胞表達FasL，通過與腫瘤細胞膜表達的Fas結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡［7］，并且能對腫瘤細胞持久地發(fā)揮作用。

4 DC-CIK治療血液腫瘤的基礎(chǔ)和臨床研究

DC-CIK作為一種新的過繼免疫細胞療法可以修復(fù)宿主受損的免疫系統(tǒng)、提高患者自身抗腫瘤細胞能力，從而有效地清除微小殘留病(MRD)［8］，預(yù)防血液腫瘤復(fù)發(fā)。

4.1 DC-CIK在急性白血病(AL)中的研究 白血病干細胞(LSC)對傳統(tǒng)的放、化療均不敏感且存在多藥耐藥，成為白血病復(fù)發(fā)的主要根源。張陽等［9］實驗研究表明:DC-CIK可誘導(dǎo)急性髓細胞白血病細胞株KG-1a細胞凋亡，并對其中LSC(CD34+CD38－CD123+)有殺傷作用，與CIK組、DC-CIK組比較，尤以抗原負載的DC-CIK組(Ag-DC-CIK)LSC比例降低顯著。在國外一個Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗中，5例化療后獲得完全緩解(CR)的急性髓系白血病(AML)患者接受抗原負載DC細胞輸注治療后4例觀察到明顯的抗白血病T細胞反應(yīng)。2例患者已維持CR超過12個月［10］。國內(nèi)學(xué)者觀察中藥配合DC-CIK治療20例CR期急性白血病患者，標志基因轉(zhuǎn)陰、達分子生物學(xué)緩解4例，微小殘留白血病轉(zhuǎn)陰性者3例;治療后3年持續(xù)CR率為75%，中位CR期25個月［11］。輸注后除5例出現(xiàn)一過性發(fā)熱外無其他嚴重不良反應(yīng)。鄧琦等［12］臨床觀察34例CR的AL患者接受DC、CIK治療，治療結(jié)束后均處于血液學(xué)和遺傳學(xué)緩解狀態(tài)，T細胞亞群、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ 等細胞因子水平、微小殘留病灶檢測取得滿意結(jié)果，且DC、CIK治療同時可促進化療后骨髓造血功能的恢復(fù)。周東風(fēng)等［13］觀察了47例CR的AL患兒接受DC-CIK治療61例次，44例患兒持續(xù)完全緩解(CCR)，CCR率達93.62%，治療前MRD陽性的9例，8例治療后轉(zhuǎn)陰。23例次出現(xiàn)發(fā)熱，10例次出現(xiàn)皮疹，無其他不良反應(yīng)。劉清池等［14］將48例形態(tài)學(xué)達完全緩解、未達分子生物學(xué)完全緩解的AL患者分成單獨化療組及化療聯(lián)合DC-CIK組，研究結(jié)果顯示:聯(lián)合組微小殘留白血病清除率及3年以上CCR率明顯提高，CD4+/CD8+比值顯著上升，未見嚴重不良反應(yīng)。

4.2 DC-CIK在慢性粒細胞白血病(CML)中的研究王鴻鵠等［15］將CML患者外周血單個核細胞來源的DC在體外用CML細胞凍融抗原(CLA)致敏，再與CML患者的 CIK細胞共同培養(yǎng)，應(yīng)用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法觀察其對自身CML細胞、K562細胞和人淋巴瘤Raji細胞的殺傷活性(CIK+CLA-DC組)，與未致敏的DC+CIK(CIK+DC組)，CIK組及CIK+CLA組進行比較。結(jié)果表明:CIK+CLA-DC組殺傷活性最強。CIK+CLA-DC組對自身CML細胞的殺傷活性明顯高于對K562細胞和Raji細胞的殺傷活性。CLA抗原致敏DC介導(dǎo)的細胞毒作用具有較強的特異性。

4.3 DC-CIK在造血干細胞移植(HSCT)后的研究Introna等［16］對接受異基因 HSCT后的患者(4例AML、3例霍奇金淋巴瘤、2 例 MDS、1 例 CML、1例ALL)輸注不同量的供者來源的CIK細胞，6例疾病進展，3例完全緩解，1例部分緩解，1例病情穩(wěn)定，可見，異體CIK細胞應(yīng)用于臨床具有可行性。蘇毅等［17］觀察初治AML CR1期、接受自體HSCT聯(lián)合負載自體白血病抗原的DC-CIK細胞治療的患者32名，對照組:同期未采用DC-CIK細胞治療的AML CR1期移植患者21例，實驗組患者CD3+CD8+和CD3+CD56+細胞比例較對照組均有所上調(diào)，分泌IFN-γ的水平較對照組明顯升高，除一過性發(fā)熱、寒顫外，無其他不良反應(yīng)。自體HSCT后經(jīng)DC-CIK細胞輸注，3年的總生存率為75.0%(24/32)，較同期未使用負載白血病抗原DCCIK細胞的自體HSCT患者的生存率47.6%明顯提高。龔奕等［18］采用自體外周血移植聯(lián)合自身白血病細胞凍融抗原負載的DC-CIK輸注治療50例AML，與既往只接受自體外周血移植但未輸注DC-CIK的52例患者進行比較分析，除4例在輸注過程中出現(xiàn)一過性畏寒發(fā)熱反應(yīng)外其余均未出現(xiàn)不適反應(yīng)。隨訪6～24個月，輸注DC-CIK組患者總體生存率、無病生存率均高于同期未輸注DC-CIK組。薛重重等［19］應(yīng)用DCCIK細胞免疫治療自體HSCT后完全緩解血液腫瘤患者12例，7例仍完全緩解(CR)，中位CR期18(5～32)個月，2例為非常好的部分緩解(VGPR)或疾病穩(wěn)定(SD)，3例復(fù)發(fā)或疾病進展，其中1例復(fù)發(fā)死亡。證明DC-CIK細胞治療有助于清除移植后微小殘留病和提高患者生存率。

4.4 DC-CIK在多發(fā)性骨髓瘤(MM)中的研究 Mar-ten等［20］觀察負載了腫瘤特異性抗原的DC-CIK細胞對多發(fā)性骨髓瘤細胞的殺傷能力大大增強。羅云等［21］用LDH釋放法檢測:異基因CIK細胞及骨髓瘤細胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK細胞均對骨髓瘤U266細胞有殺傷活性，且在相同效靶比時后者比前者殺傷活性更強。Lin等［22］給予1例71歲伴有肺癌的MM患者CIK過繼治療，治療后患者免疫功能改善，生命質(zhì)量提高，MM和肺癌病灶長期穩(wěn)定，體現(xiàn)了良好的療效。

4.5 DC-CIK在淋巴瘤中的研究 艾麗梅等［23］在DC-CIK抗淋巴瘤細胞免疫效應(yīng)研究中，分為DC、DCT、CIK和DC-CIK四組，DC-CIK組細胞因子IL-12、IL-17 和 IFN-γ 分泌量、CD8+、CD3+/CD56+細胞及對人淋巴瘤細胞株Raji殺傷活性均較其他三組強，得出結(jié)論:DC-CIK細胞抗淋巴瘤免疫效應(yīng)與分泌大量的細胞因子和產(chǎn)生細胞毒性細胞有關(guān)。在臨床應(yīng)用中，Leemhuis等［24］對9例接受自體HSCT后復(fù)發(fā)的非霍奇金淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤患者進行自體CIK細胞治療，結(jié)果顯示，2例病情穩(wěn)定，2例獲得部分緩解，也進一步證實CIK細胞體外擴增的可行性及輸注安全性。孫薏等［25］用負載自身腫瘤裂解物的DC-CIK治療9例復(fù)發(fā)難治性非霍奇金淋巴瘤患者，5例影像學(xué)復(fù)查顯示腫瘤較治療前明顯縮小，除一過性發(fā)熱、畏寒外未見其他不良反應(yīng)。9例患者隨訪時間6～18個月，中位隨訪時間11個月。

DC與CIK共培養(yǎng)后，提高了細胞的增殖速度、殺傷活性及特異性，DC-CIK在惡性血液病治療中具有廣泛的應(yīng)用前景，除發(fā)熱外無其它明顯毒副作用，但作為一種新的免疫治療手段，仍存在很多問題需要更加深入的研究，如DC-CIK的最佳培養(yǎng)技術(shù)、應(yīng)用劑量、回輸途徑、免疫監(jiān)測指標、臨床療效評價指標及聯(lián)合應(yīng)用最佳組合等尚待進一步探討、規(guī)范和統(tǒng)一。

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