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新改良PCR/LDR/毛細管電泳技術產前診斷胎兒β-地中海貧血的可行性研究

2014-04-01 01:38:40廖茜易萍鄭英如俞麗麗鐘小林黃寅虎韓磊朱玉娟李力
解放軍醫學雜志 2014年3期
關鍵詞:血漿檢測

廖茜,易萍,鄭英如,俞麗麗,鐘小林,黃寅虎,韓磊,朱玉娟,李力

傳統獲取胎兒遺傳信息進行的產前診斷技術為有創性操作[1-4],對胎兒及母體均存在潛在的損傷,以致其臨床推廣及應用受到一定程度的限制[5]。自Lo等[6]發現母體循環中存在游離胎兒DNA(cell-free fetal nucleic acids,cffDNA)后,利用孕婦外周血中的cffDNA進行無創產前診斷(noninvasive prenatal diagnosis,NIPD)取得了飛躍性的進展。但胎兒DNA在孕婦血漿總DNA中所占比例甚微,其檢測受到較大限制。點突變檢測是目前DNA分子診斷的主要研究內容,但其技術要求高,尤其是低豐度DNA檢測技術要求更甚,故需探尋一種高靈敏度和高特異性的方法。

我們在前期實驗中以雌激素受體α的單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點(c.454-397T>C)、β-地中海貧血常見的2種單核苷酸突變[IVS-Ⅱ-654(C→T)、CD17(A→T)]作為研究對象,利用聚合酶鏈反應(PCR)/連接酶檢測反應(LDR)結合毛細管電泳技術對血漿胎兒DNA實驗模型進行檢測,發現該技術對低豐度基因突變的檢測靈敏度可達到1:10 000,初步證明其可滿足母體血漿胎兒DNA點突變檢測的要求[7]。但該方法需純化PCR產物,然后將純化的產物用于下一步的LDR反應,純化過程中可能出現污染,影響實驗結果。因此,我們在前期實驗基礎上進行了改良,擬直接將PCR產物應用于LDR檢測,以達到簡化步驟、減少污染的目的。本研究以β-地中海貧血CD17(A→T)突變作為研究對象,探索LDR技術結合毛細管電泳檢測母體血漿中胎兒父系DNA點突變的可行性,以期為胎兒單基因遺傳性疾病的無創產前診斷尋求一種新的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血液標本 β-地中海貧血外周血標本:由大坪醫院檢驗科提供,EDTA抗凝。……

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