Livin與caspase-3蛋白在胃腺癌組織中的表達及臨床意義

王亞東，楊留才

(1.阜寧縣人民醫院普外科，江蘇 阜寧 224400； 2.鹽城衛生職業技術學院，江蘇 鹽城 224005)

胃癌是我國最常見的消化系統惡性腫瘤，其主要的病理類型是胃腺癌，其發病率僅次于肺癌居所有惡性腫瘤的第二位。最近的研究表明，胃癌的發病率逐年上升，對人們的生命健康造成了很大的威脅[1]。研究顯示,胃癌患者的組織學類型、病理分化、轉移等臨床指標與腫瘤組織中不同基因的表達密切相關,對胃癌患者預后地評估具有很大的臨床參考價值[2]。其中，生存蛋白(livin)是凋亡抑制蛋白家族成員之一，主要在乳腺癌[3]、食管癌[4]等實體腫瘤中高表達，通過抑制胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9等凋亡因子的活性來發揮其阻斷細胞凋亡過程的生理功能[5]。Caspase-3是caspase家族中最重要的凋亡執行者，其主要的功能是負責水解大量底物蛋白[6]。同時caspase-3也是細胞凋亡通路下游最重要的效應分子，凋亡通路一旦激活就會引起caspase-3級聯反應并使其活化，最終引起細胞凋亡[7]。本研究通過免疫組織化學染色的方法研究livin與caspase-3在胃腺癌癌組織中的表達情況，并且探討兩者在胃腺癌的臨床診斷和預后中的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2010年1月至2012年6月在阜寧縣人民醫院普外科就診進行手術治療，并且經過病理診斷確診為胃癌的蠟塊標本114例作為胃癌組，其中男68例、女46例，年齡39～74(47.2±6.6)歲；按照年齡進行分類，年齡<60歲者71例，年齡≥60歲者43例；按照國際抗癌聯盟臨床分期標準對胃癌患者進行分期，Ⅰ期23例，Ⅱ期27例，Ⅲ期36例，Ⅳ期28例；病理診斷為高分化27例，中分化47例，低分化30例，未分化10例；術后病理診斷確認有淋巴結轉移71例，無淋巴結轉移43例，所有胃癌患者在進行手術之前均未經過化療等治療措施。標本均采用4%多聚甲醛進行固定，常規石蠟包埋切片，切片厚度為5 μm。另外，取病理診斷為正常胃黏膜的蠟塊標本46例作為對照組，標本來自于胃潰瘍切除術或者十二指腸切除術的患者，均通過病理診斷排除了高度不典型增生，其中男31例、女15例，年齡36～76(46.9±6.5)歲。胃癌組和對照組的性別、年齡等一般資料具有均衡性。

1.2免疫組織化學染色方法 石蠟切片使用梯度乙醇脫蠟水化，微波抗原修復5 min，3%過氧化氫孵育10 min去除內源性過氧化物酶，加兔抗人livin一抗(1∶100,美國Santa Cruz公司)和兔抗人caspase-3一抗(1∶200,美國Santa Cruz公司)，室溫過夜，pH 7.4的磷酸鹽緩沖液清洗，加生物素標記的羊抗兔IgG二抗(1∶100，美國Sigma公司)室溫孵育40 min；磷酸鹽緩沖液清洗，DAB底物液(中國邁新公司)顯色20 min，蘇木精復染30 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光鏡下觀察攝片。

1.3染色結果判斷標準 Livin和caspase-3均定位于胞質中，以胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞標志。在高倍鏡下隨機選取10個視野，根據陽性細胞在全部組織細胞中所占比例判定實驗結果，陽性細胞比例<5%判斷為(-)，陽性細胞比例≥5%判斷為(±)[5,7]。

1.4統計學方法 應用SPSS 15.0統計軟件進行數據分析，計數資料采用χ2檢驗，相關性采用Spearman等級相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1Livin和caspase-3在不同組織中的表達情況 Livin在胃癌組的陽性表達率高于對照組(χ2=66.74，P<0.05)；caspase-3在胃癌組的陽性表達率低于對照組(χ2=68.01，P<0.05)(表1)。

表1 Livin和caspase-3在不同組織中的表達情況

2.2Livin和caspase-3在胃腺癌組織中表達以及與臨床、病理指標的關系 不同性別、年齡的livin和caspase-3陽性表達率比較差異無統計學意義(P>0.05)；不同臨床分期、組織分化、腫瘤浸潤深度以及淋巴轉移與否的livin和caspase-3陽性率比較差異均有統計學意義(P<0.05)(表2)。

表2 Livin和caspase-3在胃腺癌癌組織中表達以及與臨床、病理指標的關系 (例)

2.3Livin和caspase-3在胃腺癌癌組織表達的相關性 在胃腺癌組織中，livin和caspase-3陽性表達率分別為77.19%和15.79%，Spearman等級相關檢驗分析結果顯示：兩者在胃腺癌組織中的表達呈負相關(rs=-0.56，P<0.05)(表3)。

表3 Livin和caspase-3在宮頸鱗癌組織表達的相關性 (例)

3 討 論

目前的研究表明，致癌因子引發的細胞增殖和凋亡的失衡與惡性腫瘤的發生、發展有密切關系[8]，其中caspase家族蛋白[9]、Bcl-2家族蛋白[10]和p53[11]等細胞因子在凋亡的信號轉導中均發揮重要的生理功能。本研究結果顯示，livin在胃癌組的陽性表達率高于對照組(P<0.05),且其與臨床分期、病理分級、浸潤深度、淋巴結轉移均顯著相關(P<0.05)。本研究結果和Liang等[12]的研究結果一致。

Caspase是一組存在于細胞質中的半胱氨酸蛋白酶，在細胞凋亡中發揮著關鍵作用。其中caspase-3是caspase家族中最重要的細胞因子，其主要功能是負責水解全部或部分負責大量底物[6]。凋亡通路激活caspase-9，caspase-9引起caspase-3活化，并且發生級聯反應，引發細胞凋亡[7]。本研究結果顯示，caspase-3在胃腺癌組織中的陽性率較正常胃黏膜組織低，通過對胃腺癌患者的臨床和病例指標分析發現，caspase-3在胃腺癌組織中的陽性表達率和臨床分期、病理分級、浸潤深度和淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)。本研究結果與卵巢癌[13]、乳腺癌[14]患者的研究結果基本相同。

此外，本研究結果還顯示，livin與caspase-3在胃腺癌癌中的陽性表達率呈負相關，提示livin可能通過影響caspase-3的表達水平來抑制胃腺癌細胞的凋亡。目前的研究認為，livin調節凋亡主要通過以下兩種途徑：①livin直接下調caspase-3的表達水平，抑制死亡受體途徑來減少凋亡；②livin通過與caspase-9結合，使caspase-9失活，從而間接降低caspase-3的活性，抑制線粒體途徑來減少凋亡[15]。

綜上所述，livin與caspase-3在胃腺癌癌組織表達水平呈負相關，并且均與臨床分期、病理分級以及淋巴結轉移有關。這提示livin可能通過抑制細胞凋亡來促進胃腺癌的發生、發展。

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