犬瘟熱病毒檢測技術淺述

崔金鑫 田志高

（張家港出入境檢驗檢疫局，江蘇張家港 215600）

犬瘟熱病毒檢測技術淺述

崔金鑫 田志高

（張家港出入境檢驗檢疫局，江蘇張家港 215600）

犬瘟熱（CD）由犬瘟熱病毒（CDV）感染引起，是臨床上犬科等多種動物的常見疾病之一，傳染性強，致死率高，發病急，危害較大。目前國內外已有多種有效的檢測方法，主要分為病原學、血清學和分子生物學三類。本文對犬瘟熱病毒的檢測技術進行了綜述。

犬瘟熱病毒；檢測；技術

犬瘟熱臨床癥狀主要有典型的雙相熱、呼吸道和消化道卡他性炎癥以及神經癥狀等[1]，對養殖業、寵物業和野生動物保護業的危害有目共睹，有效的檢測手段是防控該病的一個必要條件。本文對犬瘟熱病毒的各種檢測方法進行簡要的綜述，為廣大獸醫工作者選擇有效檢測方法提供參考。

1 病原學檢測方法

1.1 病毒分離鑒定

病原分離鑒定通常是疾病確診的根本方法，近年來，不少學者成功在CDV細胞培養分離上取得了成功。該方法準確可靠，但目前主要用于實驗室研究，臨床使用受限較多。CDV環境生存能力很弱，且在感染中后期受抗體影響較大，因此，在自然感染的病例中該病毒的分離成功率很低。

1.2 包涵體檢查

包涵體是CDV感染細胞所產生的特征性病理變化，通過診斷病理學可以檢查到包涵體的存在，從而證實CDV的感染[2]。鑒于其他一些病毒也會產生包涵體，僅靠該方法不能確診，需與其他方法配合。

1.3 電鏡檢查和動物接種試驗

CDV的電鏡檢查較為困難，該病毒顆粒與同科病毒在形態結構上難以區分，同時其采樣獲取較為困難。常國權等[3]采取糞便作為病料，分別使用免疫電鏡技術和離子捕獲電鏡技術對病料做出了檢查，取得了一定效果。目前，該方法通常作為一種輔助方法，不作為CDV檢測的常規手段。

動物接種試驗作為一種病原學診斷方法，在某些病原的診斷上有重要的作用，CDV目前尚無理想的動物接種試驗診斷效果的報道。

2 血清學檢測方法

2.1 血清中和試驗

血清中和試驗是常用的CDV抗體標準檢測方法，該方法既可以檢測待檢血清中的CDV抗體，又可以測定CDV抗體的效價，具有敏感性高、特異性強、穩定性好等特點。該方法首次由國外學者Lo JP等應用到CDV的檢測中來，現已得到了較為廣泛的使用。由于該方法作出診斷時間較長，不能滿足臨床上快速診斷的要求，目前多用于實驗室研究。

2.2 免疫組化技術

免疫組化技術通常用于檢測CDV在動物機體內各組織器官的分布情況，多在動物死亡后的病理檢查中使用，敏感性和穩定性較高。有學者用PAP檢測犬CDV抗體，發現該試驗特異性與中和試驗相似。

2.3 免疫熒光技術

免疫熒光技術結合了抗原抗體反應的特異性和染色技術的快速性，目前是國際通用的CDV診斷方法，同時適用于體外細胞培養物和組織臟器中CDV的檢測。袁書智等[4]分別在犬瘟熱病犬死亡前后用直接FA染色法檢測CDV抗原，結果表明該方法可作為CDV是否感染的指標。

2.4 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

酶聯免疫吸附試驗結合抗原抗體反應的特異性和酶促反應的高敏感性，建立起準確率高、敏感性好、特異性強的抗原抗體檢測技術。同時，ELISA具有良好的商品化產品，可批量快速檢測。因此，該方法目前在臨床實踐中得到了大量應用。

2.5 膠體金免疫層析

膠體金免疫層析技術是一種基于單克隆抗體建立起來的技術，該方法操作簡單，可批量快速檢測，但具有一定的假陽性率，這點值得注意。該方法在臨床應用上擁有很好的推廣前景，如果在敏感度上再加以改進，相信會得到更好的發展。

2.6 瓊脂免疫擴散試驗和凝集試驗

瓊脂免疫擴散法是利用抗原抗體反應建立起來的一種簡單快捷的檢測方法。該方法在敏感度上雖有一定局限性，但操作簡單，不需要復雜設備技術，適合在廣大基層單位進行推廣。

凝集試驗是一種操作簡單、快速的血清學檢測手段，該方法也是基于抗原抗體反應建立。該方法要求條件較低，診斷時間短，利用糞便或尿液檢測抗原能夠不受免疫接種的影響，在臨床上應用具有很大的優勢。

3 分子生物學檢測方法

3.1 核酸雜交技術

核酸雜交技術通過檢查兩種核酸分子堿基排列有無互補關系或互補程度來判斷二者關系，從而達到檢測特有核酸序列的目的。王宏俊等[5]建立了一種核酸探針檢測CDV的方法，結果顯示該方法的特異性和敏感性均較好。

3.2 聚合酶鏈式反應

目前在CDV的檢測中，國內外學者較多地使用了PCR技術。劉大飛等[6]建立了檢測CDV和其他幾種犬病毒的多重PCR方法，該方法縮短了臨床上檢測病料的時間，敏感性和特異性較好。PCR因其特異性強、敏感性高以及檢測快速的優勢，在實驗研究中得到了廣泛應用。

3.3 環介導等溫擴增和基因芯片

環介導等溫擴增技術是日本學者Notomi等開發的一種恒溫核酸擴增方法，該方法特異性高、簡單快捷，避免了常規核酸擴增方法的繁瑣擴增、檢測程序。基因芯片技術是最近發展很好的一種新型分子生物學技術，該方法快速、準確、敏感，可以批量檢測，具有很好的應用前景。這兩種方法要求較高，目前主要用于實驗室研究，在臨床上推廣尚需時日。

[1] 陳溥言.獸醫傳染病學[M].北京: 中國農業出版社，2006，415-419.

[2] 賀永明，劉艷紅，劉淑芳.犬瘟熱臨床診治[J].安徽農業科學，2007，35（ 13） : 3930．

[3] 常國權，楊盛華.用離子捕獲電鏡技術快速檢測犬瘟熱病毒[J].畜牧與獸醫，1994，26（6）: 243-244.

[4] 袁書智，夏咸柱.犬瘟熱熒光抗體技術的應用研究[J].中國獸醫學報，1994，14（2） :146-150.

[5] 王宏俊，丁少忠.核酸探針檢測犬瘟熱病毒方法的建立和初步應用[J].中國獸藥雜志，2006，40（5）: 19-22.

[6] 劉大飛，姜一曈，戚亭，等.同時檢測犬瘟熱病毒、犬細小病毒I型和II型犬腺病毒多重PCR方法的建立[J].中國預防獸醫學報，2012，34（11）: 911-914.

崔金鑫（1988-），研究生，張家港出入境檢驗檢疫局，動物傳染病防治；田志高，張家港出入境檢驗檢疫局。