CK7、CK18、CK5/6及P63在不同類型肺癌組織中的表達分析

朱棟麟　沈榮明　劉曉強　崔建勇　楊勇　朱一蒙

【摘要】 目的 探討CK7、CK18、CK5/6及P63在各類型肺癌組織中的表達情況。 方法 對104例肺癌手術標本進行免疫組化分析， 聯合檢測CK7、CK18、CK5/6及P63的表達， 同時分析它們在不同類型肺癌中的表達情況。 結果 CK7在腺癌、腺鱗癌及大細胞癌中的陽性表達率分別為91.07%、85.71%及50.00%， 在鱗癌和小細胞癌中無陽性表達。CK18在腺癌、腺鱗癌、小細胞癌及大細胞癌中的陽性表達率分別為96.43%、85.71%、100%及100%， 在鱗癌中無陽性表達。CK5/6在鱗癌中的陽性表達率為100%， 在腺癌、腺鱗癌、小細胞癌及大細胞癌中無陽性表達。P63在鱗癌和腺鱗癌中的陽性表達率分別為100%及14.29%， 在腺癌、小細胞癌及大細胞癌中無陽性表達。 結論 CK7及CK18可用于肺腺癌診斷， CK5/6及P63可用于肺鱗癌診斷。同時， CK18還可用于肺小細胞癌及大細胞癌的診斷。

【關鍵詞】 肺癌；免疫組化；CK7；CK18；CK5/6；P63

近年來肺癌的發病率逐年增長， 已成為我國首位惡性腫瘤死亡原因[1]。其組織學分類類型眾多， 常見的有腺癌、鱗癌、腺鱗癌、小細胞癌、大細胞癌等。目前越來越多的研究顯示某些新興的靶向治療方案及聯合治療方案與肺癌組織學類型密切相關， 因而準確的分型對肺癌患者的治療及預后有重要價值。高分化及中分化的鱗癌及腺癌不難診斷， 然而對于分化較差的標本， 以及纖維支氣管鏡活檢組織等擠壓明顯的標本， 僅依靠HE染色判別類型已遠遠不夠。本文收集肺癌手術標本104例， 對其進行CK7、CK18、CK5/6及P63的聯合檢測， 旨在探討它們在不同類型肺癌組織中的表達特點， 旨在為診斷與治療提供幫助。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 標本來源于2008年1月～2012年12月在蘇州市立醫院手術切除并經病理確診的肺癌患者， 共104例， 其中男性70例， 女性34例， 年齡從44～84歲， 平均年齡為63.2歲。其中腺癌56例， 鱗癌22例， 腺鱗癌14例， 小細胞癌8例， 大細胞癌4例。所有手術標本均經10%中性福爾馬林溶液固定， 常規取材、包埋、切片和HE染色。所選患者術前均未行放療、化療等治療。

1. 2 免疫組織化學染色 CK7、CK18、CK5/6及P63抗體及二抗均來源于廣州深達公司， 組織切片經常規脫蠟、水化、高壓抗原修復3 min， 3%H2O2封閉內源性過氧化物酶， 使用iVision 免疫組化染色試劑盒， 用PBS代替一抗作為陰性對照。

1. 3 結果判定 CK7、CK18、CK5/6陽性表達于細胞質和細胞膜， P63定位于細胞核。判讀結果綜合染色強度及染色范圍， 染色強度判讀標準為：不著色為陰性， 黃色至褐色為陽性。陽性細胞范圍判讀標準為：無陽性細胞為陰性， 陽性細胞≤30%為灶性陽性， >30%為陽性。

2 結果

2. 1 CK7在肺癌組織中的表達情況 在104例肺癌組織中檢測CK7的表達， 結果如表1所示， CK7在肺腺癌組織中的表達陽性率為91.07% （51/56）， 局灶陽性率為5.36% （3/56）；在肺鱗癌組織中的表達陽性率為0， 局灶陽性率為27.27% （6/22）；在肺腺鱗癌組織中的表達陽性率為85.71% （12/14）， 局灶陽性率為14.29% （2/14） ；在肺大細胞癌組織中的表達陽性率為50% （2/4）， 局灶陽性率為50% （2/4）；而在肺小細胞癌中未檢測到陽性表達。

2. 2 CK18在肺癌組織中的表達情況 CK18在各類型肺癌中的表達結果如表2所示， 其在肺腺癌組織中的表達陽性率為96.43% （54/56）， 局灶陽性率為3.57% （2/56）；在肺鱗癌組織中的表達陽性率為0， 局灶陽性率為81.82% （18/22）；在肺腺鱗癌組織中的表達陽性率為85.71% （12/14）， 局灶陽性率為14.29% （2/14） ；在肺小細胞癌及大細胞癌中表達陽性率均為100% （8/8， 4/4）。

2. 3 CK5/6在肺癌組織中的表達情況 CK5/6在各類型肺癌中的表達結果如表3所示， 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽性表達8.93% （5/56）；而在肺鱗癌組織中的表達陽性率為100%；在肺腺鱗癌組織中為局灶陽性表達85.71% （12/14） ；在肺小細胞癌及大細胞癌中均無陽性表達。

2. 4 P63在肺癌組織中的表達情況 P63在各類型肺癌中的表達結果如表4所示， 其在肺腺癌組織中僅有局灶陽性表達21.43% （12/56）；而在肺鱗癌組織中的表達陽性率為100%；在肺腺鱗癌組織中陽性表達率為14.29% （2/14）， 局灶陽性率為57.14% （8/14） ；在肺小細胞癌中有灶性表達25% （2/8）， 在大細胞癌中無陽性表達。

3 討論

肺癌的個體化治療將成為臨床肺癌治療的主流趨勢， 毫無疑問， 對肺癌的準確分型是這一方案得以施行的前提。以往人們重點關注肺小細胞癌與非小細胞癌的區分， 然而大量研究發現非小細胞中的組織學分類也至關重要。如臨床試驗發現針對EGFR的靶向藥物吉非替尼及埃羅替尼等僅對肺腺癌患者療效明顯。故而探討分子標志物在不同類型肺癌中的表達， 充分發揮其指導診斷及治療的作用， 值得深入研究。

細胞角蛋白（cytokeratin， CK）主要分布于上皮細胞， 是細胞的主要骨架蛋白。它們具有極高的保守性和組織分化特異性， 與上皮細胞的類型、增殖、分化密切相關， 因而被用作腫瘤標志物[2， 3]。P63在正常肺組織中表達于支氣管儲備細胞， 而不表達于上皮細胞， Wang BY等[4] 研究了30例肺鱗癌組織， 發現其均表達P63， 少數肺腺癌和細支氣管肺泡癌也有表達。也有研究認為P63僅表達于鱗癌， 在其他類型肺癌中基本不表達。

越來越多的研究表明多個抗體的聯合檢測在肺癌組織學分類中的實用價值大于單個指標的運用[5]。有研究在12株肺癌細胞株中檢測了CK5/6、CK14、CK17及CK18等分子標志物的mRNA水平， 并在95例非小細胞肺癌患者組織標本中檢測了其蛋白表達， 發現CK5/6、CK14、CK17在鱗癌中表達較高， 且其高表達與低分化相關， CK7、CK18則高表達于腺癌細胞[6]。張同海等人聯合檢測了TTF1、CK5/6、P63和napsinA在肺鱗癌及腺癌中的表達， 認為P63和CK5/6共同陽性表達與TTF1和napsinA共同陰性表達更支持肺鱗癌， 而非肺腺癌， 反之亦然[7]。楊艷等研究表明， 在肺腺癌中， CK7的靈敏度和特異度分別為98.6%和61.5%， CK18則分別為 98.6%和37.5%[8]。

本研究結果表明， 在所觀察的56例肺腺癌中， CK7與CK18表達陽性的病例分別為51例及54例， 靈敏度為91.07%及96.43%， 而CK7或CK18表達陽性者共56例， 靈敏度為100%。而兩者在22例肺鱗癌中均為陰性表達， 表明CK7與CK18聯合運用對肺腺癌診斷意義明確， 與文獻報道相符。同時14例腺鱗癌中的腺癌成份均可檢測到CK7及CK18的表達。而CK7在大細胞癌中部分表達， 在小細胞癌中不表達。但CK18在小細胞癌及大細胞癌中均為陽性表達， 提示小細胞癌及大細胞癌與低分化腺癌的鑒別仍需要其它分子標志物的加入。

在對CK5/6及P63的檢測中發現， 二者在22例肺鱗癌組織中均為陽性表達， 陽性率100%， 在56例肺腺癌中均為陰性表達， 提示CK5/6與P63聯用可準確鑒別肺鱗癌與腺癌， 與文獻報道相符[9-11]。P63在腺鱗癌中部分表達陽性， CK5/6在85.71%的腺鱗癌中局灶表達陽性。在8例小細胞癌和4例大細胞癌中CK5/6表達均為陰性；P63在大細胞癌中無陽性表達， 在小細胞癌中有25%呈局灶陽性表達。結合CK7的檢測結果， 可發現在小細胞癌及大細胞癌中， 上皮標志物表達水平較低， 與其分化較差相符合。

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