安立生坦β-環糊精包合物制備與表征

鐘文君 石 雷 劉永麗 林曉艷 章海紅

1.臺州職業技術學院化學制藥研究所，浙江臺州 318000；2.浙江海正藥業股份有限公司質檢部，浙江臺州 318000

安立生坦為高選擇性內皮素受體拮抗劑，是治療肺動脈高壓的新型靶向藥物，其療效好、安全性高，被歐洲心臟病協會和美國胸科醫師協會列為推薦用藥[1-3]。環糊精具有外壁親水和內側疏水的錐形腔體結構，能包裹水不溶性藥物形成包合物，掩蓋藥物的味道，提高藥物水溶性和穩定性，作為藥物載體材料發展迅速[4-6]。環糊精種類中β-環糊精毒性小、價廉易得，空腔大小適中，廣泛作為包合物的主體分子使用[7-8]。安立生坦在水中溶解度小[9]，本研究使用高速均質機通過飽和水溶液法制備安立生坦β-環糊精包合物，并對質量特性進行考察，以期提高藥物溶解度、穩定性和生物利用度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BSA224S 電子天平（精密度0.1 mg，賽多利斯科學儀器有限公司）；Agilent 1220 高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；QXQM-2 行星式球磨機（長沙天創粉末技術有限公司）；S-4800 場發射掃描電鏡（日本日立高新技術公司）；DSC-100 差示掃描量熱儀（南京大展機電技術研究院）；Bruker-D8 Advance X-射線粉末衍射儀（德國布魯克科技公司）；RC-8D 溶出度測試儀（天津市光學儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

安立生坦（浙江永寧藥業股份有限公司，含量：101.1%，批號：ALST-170413）；β-環糊精（阿拉丁試劑有限公司，批號：D1211011）；微晶纖維素（曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號：191205A）；三氟乙酸（薩恩化學技術上海有限公司，批號：FK180232）；乙腈（色譜純，美國天地）；安立生坦膠囊和包合物膠囊（自制，規格：5 mg）。

2 方法與結果

2.1 包合物與膠囊制備

2.1.1 安立生坦β-環糊精包合物制備 安立生坦原料藥經球磨機研磨并過九號篩備用。在65℃水浴條件下，β-環糊精用純化水配制成飽和溶液，加入上述原料藥粉末，β-環糊精與原料藥質量比為3∶1。維持恒溫，10 000 r/min 高速均質分散1 h（工作10 min，停2 min），趁熱抽濾，上清液2～8℃冷藏12 h，抽濾，少量無水乙醇快速洗滌，棄去濾液，沉淀50℃常壓干燥，即得包合物粉末[10-12]。

2.1.2 藥物膠囊和包合物膠囊制備 分別取原料藥和自制的包合物粉末，加入適量微晶纖維素，混合均勻，填充入1 號空膠囊，制得藥物膠囊和包合物膠囊，規格均為每粒5 mg。

2.2 含量測定方法

2.2.1 色譜條件 儀器Agilent 1220；色譜柱：Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃；流動相：0.02%三氟乙酸溶液-乙腈（體積比30∶70）；流速：1.2 ml/min；檢測波長：262 nm；進樣量：20 μl[13-15]。

2.2.2 溶液制備 對照品溶液：精密稱取安立生坦對照品20.4 mg，置于100 ml 量瓶中，加流動相溶解并定容，搖勻，制得對照品儲備液。供試品溶液：精密吸取所制備的包合物溶液1.0 ml，置于10 ml 量瓶中，加流動相定容，超聲10 min，搖勻，即得。空白輔料溶液：取不含安立生坦的空白輔料適量，按供試品溶液制備方法配制，即得。

2.2.3 專屬性實驗 分別取“2.2.2”項下溶液，按色譜條件進樣，結果顯示輔料對安立生坦檢測沒有干擾，藥物色譜峰保留時間約為3.5 min，理論塔板數均大于8500，分離度均大于2.5。

2.2.4 標準曲線繪制 精密吸取對照品儲備液0.1，0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml 分別到10 ml 量瓶中，流動相定容并搖勻。按色譜條件檢測，以峰面積A 對樣品濃度C（μg/ml）進行線性回歸分析，得回歸方程：A=13.881C+7.891（r=0.9999）。結果顯示，安立生坦在2.04～163.20 μg/ml 濃度范圍內線性關系良好。

2.2.5 精密度試驗 取對照品溶液適量，連續重復進樣6 次，記錄峰面積，計算峰面積相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為1.57%，顯示儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 取供試品溶液適量，每間隔1 h 進樣1 次，連續6 次，記錄峰面積，計算峰面積RSD 為1.79%，表明安立生坦溶液6 h 內穩定性良好。

2.2.7 重復性試驗 取所制備的包合物溶液，按供試品溶液制備方法平行制備6 份并檢測，峰面積RSD 為1.83%，提示本方法重復性良好。

2.2.8 回收率試驗 精密吸取對照品儲備液0.5、4.0，8.0 ml，各平行3 份，置于10 ml 量瓶中，加入適量輔料，用流動相定容并搖勻，按色譜條件檢測，計算平均回收率為100.51%，RSD 為1.04%，提示本方法有良好的回收率。

2.3 包合物質量表征

2.3.1 形態觀察 使用掃描電鏡對原料藥、球磨后原料藥、β-環糊精、物理混合物（球磨后原料藥和β-環糊精按處方比例進行混合）和包合物進行形態觀察，見圖1。

圖1 掃描電鏡圖

2.3.2 差示掃描量熱分析 分別取適量的原料藥、β-環糊精、物理混合物和包合物，置于鋁坩堝中進行差示掃描量熱分析[16]，設定溫度30～300℃，升溫速率10℃/min，樣品升溫曲線見圖2。由圖可知，β-環糊精在136℃附近有較寬的吸熱峰，安立生坦在188℃有特征吸熱峰，該峰在物理混合物的曲線中仍存在，在包合物的曲線中消失。

圖2 樣品差示掃描量熱圖

2.3.3 粉末X-射線衍射 分別取相同樣品進行X-射線衍射測定，測定條件：Cu 靶，掃描范圍5°～50°，電壓40 kV，掃描速度5°/min，結果見圖3。由圖可知，安立生坦衍射強度高，體現其結晶性，物理混合物衍射圖譜為藥物和β-環糊精特征峰疊加，包合物圖譜中藥物衍射峰消失。

圖3 樣品X-射線衍射圖

2.3.4 包合率測定 精密稱取包合物粉末100 mg，置于100 ml 量瓶中，加流動相適量超聲10 min，流動相定容并搖勻，0.45 μm 微孔濾膜過濾，濾液按色譜條件檢測，計算包合物中藥物質量[17-18]。安立生坦包合率（%）=包合物中安立生坦質量/安立生坦投入量×100%。重復測定3 批，包合率分別為68.2%、64.6%、71.1%，平均包合率為68.0%。

2.3.5 溶解度測定 取安立生坦原料藥、球磨后原料藥和包合物，分別置于具塞量筒中，各加入純化水適量配制成過飽和溶液，恒溫振蕩器中振搖24 h[（37.0±0.5）℃，100 r/min][19]，0.45 μm 微孔濾膜迅速過濾，按色譜條件檢測，計算原料藥、球磨后原料藥和包合物在水中溶解度分別為46.35、74.28、592.17 μg/ml，包合物中藥物溶解度提高約13 倍。

2.3.6 體外溶出考察 取自制的藥物膠囊、包合物膠囊，根據《中華人民共和國藥典》[20]溶出度測定法中籃法的規定，純化水900 ml 經超聲脫氣作為溶出介質，溫度（37±0.5）℃，轉籃轉速100 r/min，于5、10、15、20、30、45、60 min 取樣8 ml（同時補加同體積水），用0.45 μm 微孔濾膜過濾，濾液按色譜條件檢測，計算累積溶出度，溶出曲線見圖4。結果顯示包合物膠囊在各時間點的溶出明顯優于原料藥膠囊，其60 min累積溶出度為83.17%。

圖4 體外溶出曲線圖

3 討論

環糊精包合物制備方法，文獻報道[21-23]有飽和水溶液法、共沉淀法等，為提高包合率，通常將藥物溶解在乙醇、丙酮等有機溶劑中再與環糊精飽和水溶液混合[24]。實驗中通過球磨破壞安立生坦晶體結構，將球磨后藥物直接加入環糊精飽和水溶液中制備包合物，并結合高速均質方法促進藥物分散和進入環糊精空腔，該方法能達到較高的包合率，因未使用有機溶劑，改善了制備環境、避免有機溶劑殘留。所采用制備方法簡便、易操作、重復性好。

掃描電鏡觀察顯示包合物與原料藥、β-環糊精形態均有明顯差異，與物理混合物形態也不相同，提示形成了新的物相[25]，差示掃描量熱分析結果提示包合物不是簡單的混合，藥物包裹進入環糊精空腔中，X-射線衍射結果提示形成了新的物相，安立生坦被包合后降低了結晶性[11]。環糊精包合作用明顯提高了安立生坦水中溶解度與體外溶出度。

安立生坦為生物藥劑學分類系統Ⅱ類藥物（低溶解性、高滲透性），具有較好臨床應用前景，將其制備成包合物能改善藥物穩定性、溶出度和生物利用度，并可以進一步制備成片劑、膠囊劑等，為臨床應用提供更多可行的辦法。