膠體金法與酶聯(lián)免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體的對照研究＊

蔣峻峰，周雪蓮（重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院輸血科 402360）

丙型肝炎是慢性感染性疾病，它可經(jīng)由輸血、針刺和毒品傳播感染，危害人類健康，據(jù)統(tǒng)計世界丙型肝炎病毒（HCV）感染者約有2億，且呈增加趨勢［1］。此病可導致肝臟纖維化繼而發(fā)生炎癥，嚴重者肝臟組織會逐漸壞死，病變?yōu)楦斡不踔涟┌Y。HCV 是致病的根本原因，感染初期不易發(fā)現(xiàn)［2］，受到外界刺激時，HCV 會加速病情發(fā)展。因此，及時檢測HCV 感染有助于預(yù)防病情加重。丙型肝炎感染者血液中會大量存在丙型肝炎病毒抗體（HCV－Ab），這是檢測丙型肝炎的重要標志［3－4］。本試驗采用膠體金法和酶聯(lián)免疫法（ELISA 法）檢測HCVAb，旨在對比兩者的檢測效果。具體結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機選取2011年1月至2013年12月本院收治的丙型肝炎患者210例為觀察組；其中男150例，女60例，平均年齡（37.6±5.7）歲。另外選擇健康體檢人員100例為健康對照組，其中男68例，女32例，平均年齡（37.8±5.8）歲。兩組間一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），組間具有可比性。

1.2 儀器與試劑酶標儀（Multiskan MK3）、高精度加樣器、PW－960全自動酶標洗板機等儀器。膠體金試劑盒由艾康生物醫(yī)藥有限公司提供，ELISA 試劑盒由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 標本采集患者采集靜脈血3～5mL于含促凝試管中，經(jīng)30min凝集［5］，然后將試管置于離心機中離心，吸取血清后置于冷藏室中低溫保存［6］。

1.3.2 膠體金法檢測兩組患者均接受膠體金方法檢測，首先采用高特異性的抗原抗體反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)。試劑含有被預(yù)先固定于膜上測試區(qū)（T）的目的重組抗原和包被在金標墊上的丙型肝炎重組抗原膠體金顆粒。使用前將試劑和標本恢復至20～30℃，然后從原包裝鋁箔中取出試紙條，用塑料吸管吸取50μL受試者的血清垂直滴入加樣區(qū)。10～30 min內(nèi)試紙條在反應(yīng)線和質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為陽性，僅在質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為陰性，質(zhì)控線位置未出現(xiàn)紫紅色結(jié)果為無效。

1.3.3 ELISA 法檢測兩組患者均接受ELISA 法檢測，將試劑于室溫下平衡30min后取出板條，每板設(shè)置陰性對照3孔，陽性對照2孔［7］，樣品對應(yīng)微孔板按序編號。分別在相應(yīng)孔中加入稀釋液100μL后，在各孔中加入待測樣本血清和陰、陽性對照10μL，用封板膜封板，置于37℃溫育60min，取出后用洗板機洗板5遍，最后一次盡量扣干。每孔加入酶標試劑100μL，用封板膜封板，置于37℃溫育30min，取出后用洗板機洗板5遍，最后一次盡量扣干。每孔加入顯色劑A、B 液各50μL輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色30 min后，每孔加入50μL終止液，輕輕震蕩混勻。設(shè)定酶標儀波長450／630nm 測定各孔A值。吸光度值大于或等于1時HCV－Ab為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理采用SPSS21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測丙型肝炎患者結(jié)果比較膠體金法檢測出陽性者206例（98.10%），ELISA法檢測出陽性者204例（97.14%），兩者間陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2＝0.172，P＝0.679）。

2.2 兩種方法檢測健康體檢者結(jié)果比較膠體金法檢測出陰性者94例（94.00%），有6例假陽性；ELISA 法檢測出陰性者90例（90.00%），有10例假陽性。兩者間陰性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（χ2＝0.136，P＝0.712）。

3 討論

丙型肝炎為臨床病死率較高的疾病，其可血液、母嬰和性傳播等傳播。多數(shù)HCV 感染呈亞臨床狀態(tài)，易延誤治療，病情進一步惡化時會發(fā)生肝硬化甚至肝癌。及時有效的檢測對于臨床預(yù)防和治療有十分重要的意義［8］。HCV 感染者血液中會出現(xiàn)HCV－Ab，臨床常用膠體金法、ELISA 法和FQ－PCR 法等方法來檢測HCV 感染情況，但由于FQ－PCR 法影響因素較多，試驗較難控制，故本研究選用膠體金法和ELISA 法來檢測HCV 感染情況，并比較兩者的有效性以此找出更佳的檢測方法［9］。

膠體金是氯金酸在還原劑作用下聚合而成的金顆粒，它是穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，通過膠體金標記，可以檢測蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)［10］。膠體金在人體環(huán)境下帶負電，能夠結(jié)合蛋白質(zhì)表面正電荷基團［11］，此過程即可達到標記的作用又不會影響蛋白質(zhì)的性質(zhì)。HCV－Ab即為蛋白質(zhì)，因此它可與膠體金結(jié)合進而被標記，本試驗所用的免疫金標記技術(shù)，即利用其高電子密度特性，通過結(jié)合反應(yīng)，標記物大量聚集，進而形成（粉）紅色斑點。此方法操作簡單，操作人員無需經(jīng)過專業(yè)培訓；不存在放射性同位素污染，應(yīng)用便捷且廣泛。ELISA 法是常用的免疫學檢測方法之一，其機理為酶復合物與抗體結(jié)合并顯色，通過顯色反應(yīng)來達到標記和檢測的目的。

本項試驗結(jié)果顯示，膠體金法和ELISA 法均可有效檢測出HCV－Ab，在210例丙型肝炎患者中，膠體金法檢測出了206例，僅漏診4例；ELISA 法亦檢測出204例，二者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。然而，在健康人群中ELISA 法誤測率略高，出現(xiàn)10例假陽性，膠體金法僅出現(xiàn)6例假陽性，二者比較ELISA 法檢測靈敏度稍高。膠體金法檢測速度更加快捷，且操作更簡單，它無需特殊儀器和設(shè)備，經(jīng)濟便利，為了提高檢測準確性，可以將二者聯(lián)合使用，這可以減少漏測率和誤測率。另有研究表明，采用ELISA 法和膠體金法準確率分別為100.0%和96.0%［12］，與本項研究結(jié)果相同。說明本項研究具有高可靠性和臨床價值。然而，本研究中ELISA 法準確率并未達到100.0%，可能是由于加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、洗板徹底性等諸多因素的影響。

綜上所述，膠體金法和ELISA 法均可有效檢測HCV 抗體，在檢測靈敏度和特異性方面差異不大，但ELISA 法操作步驟多，實驗需要3h，需配置酶標儀、洗板機等設(shè)備，不適用于基層單位。膠體金法具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設(shè)備、肉眼可直接觀察結(jié)果等優(yōu)點，尤其適用于基層單位和快速篩查。

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